一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法技术

一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法，将鼠李糖乳杆菌接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中培养后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤离心得鼠李糖乳杆菌菌泥；向鼠李糖乳杆菌菌泥中添加磷酸缓冲液，离心得胞壁蛋白酶的酶液，冷冻干燥获得鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；向脱脂后的鲜羊奶中加入鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和CaCl2酶解后再加β‑环糊精，拐枣多糖、赤藓糖醇、木糖醇、L‑苹果酸，柠檬酸，柠檬酸钠混合均匀后经均质、杀菌后得到含降压肽和抗氧化肽的羊乳活性饮料，其ACE抑制活性为70‑90％，DPPH自由基清除率为60‑80％，羟自由基清除率为75‑95％。本发明专利技术以羊乳为原料，所制备的羊乳活性饮料可作为辅助降血压、抗氧化、降血糖和防龋齿食品。

A method of Lactobacillus rhamnosus protease preparation of active goat milk beverage

A method of Lactobacillus rhamnosus protease preparation of goat milk beverage activity, Shu Li Lactobacillus inoculation access of Lactobacillus rhamnosus medium after the cells were collected after centrifugal precipitation, centrifugal washing with sterile saline Shu Li Lactobacillus bacteria sludge; adding phosphate buffer to Shu Li Lactobacillus bacteria the mud, centrifugal liquid cell wall enzyme protease, to obtain mouse Li Tangru coli cell wall proteinase bacteria powder freeze drying; adding Lactobacillus rhamnosus cell wall proteinase bacteria powder and CaCl2 enzyme plus beta cyclodextrin into defatted fresh goats'milk, dulcis polysaccharide, erythritol, xylitol L, malic acid, citric acid, sodium citrate, mixed evenly after sterilization after milk beverage containing active antihypertensive peptides and antioxidant peptides, the ACE inhibitory activity of 70 90%, DPPH free radical clearance rate was 60 80%, Hydroxyl free radical scavenging rate of 75 95%. The present invention in goat milk as raw material, made of goat milk beverage preparation activity can be used as auxiliary lowering blood pressure, antioxidant, hypoglycemic and anti caries food.

【技术实现步骤摘要】
一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法
本专利技术涉及一种功能性羊乳饮料的制备方法，特别涉及一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法。
技术介绍
益生菌具有蛋白水解系统，该系统包括CEP、氨肽酶、肽链内切酶、Pro-特异性肽酶等，它能够将蛋白质水解并释放出大小不同的肽以及一些游离的氨基酸以满足菌体生长，其中水解产生的一些肽类具有生物活性，比如抗氧化、降血压、免疫调节等功能。在整个水解过程中，胞壁蛋白酶是其中最重要的酶，已有研究发现一些CEP单独就可以水解乳蛋白并产生ACE抑制肽。乳酸杆菌的细胞表面包括许多酶类及蛋白质，主要有核糖体蛋白，细胞表面透性酶，表面层(S层)的蛋白质，细胞膜相关蛋白酶(CEPs)，以及其他基于蛋白质的分子[10]。细胞壁蛋白酶(CEP)水解乳蛋白的机理为：首先乳蛋白被CEP水解为一系列的短肽，之后寡肽、二肽及三肽转运系统将这些短肽运输到细胞内，最后由胞内肽酶(肽链内切酶、pro-特异性肽酶、氨肽酶等)将其进一步水解成ACE抑制肽和抗氧化肽肽等生物活性肽拐枣又叫万寿果，学名枳椇，其多糖具有降血糖的功能，但目前拐枣多糖制备存在纯度低的问题，主要杂质为单糖和双糖，因此去除单双糖和保留多糖是制备高纯度拐枣多糖和开发新产品的关键。陕西省是我国传统的奶山羊主产区，关中地区是全国最大的奶山羊良种生产基地。2015年底全省奶山羊存栏180万多只，羊乳产量50万余吨，羊奶粉市场份额达95％以上，奶山羊数量、羊乳产量及羊奶粉产量均为全国第一，但国内羊乳产品的品种少，主要为羊奶粉及液态羊奶，其中大部分羊奶粉作为工业原料销往国外，存在产品科技含量低、附加值不高及同质化严重等问题，国外羊乳产品种类多，主要包括发酵羊乳产品(如奶酪、脱脂酪乳或酸羊奶)、冷冻产品(如冰激凌或冷冻酸羊奶)、液态奶、黄油、功能性羊奶片等。因此，开发功能性羊乳新产品很有必要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种具有降血压、抗氧化、降血糖和防龋齿等功能的鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法。为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案是：1)鼠李糖乳杆菌培养基制备：将乳糖15-25g、牛肉膏15-25g、硫酸镁10-20mg、吐温800.5-1.0mL，低聚半乳糖2-5g、蛋白胨3-6g、磷酸氢二钠4-6g、丙氨酸5-10mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5-7.0，于121℃灭菌得得鼠李糖乳杆菌培养基；2)鼠李糖乳杆菌培养及菌体收集：将鼠李糖乳杆菌按2％-5％的接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中，35-41℃恒温培养18-24h，然后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤离心得鼠李糖乳杆菌菌泥；3)鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶制备：按每g鼠李糖乳杆菌菌泥中添加20-30mL的磷酸缓冲液，35-45℃保温1-3h后离心得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超滤膜去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl2，控制CaCl2的浓度为10-20mM，冷冻干燥获得鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；4)羊乳活性饮料的制备：将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.0-8.0质量体积比向其中加入1-3％的鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01-0.04％CaCl2，于35-45℃下酶解2-4h，然后再按质量体积比添加0.5-1.0％的β-环糊精，0.2-0.4％的拐枣多糖、4-6％的赤藓糖醇、3-5％的木糖醇、0.1-0.3％的L-苹果酸，0.10-0.25％的柠檬酸，0.10-0.25％的柠檬酸钠混合均匀后经均质、杀菌后得到含降压肽和抗氧化肽的羊乳活性饮料，其ACE抑制活性为70-90％，DPPH自由基清除率为60-80％，羟自由基清除率为75-95％。所述步骤2)的离心是在4-10℃、6000-8000r/min下离心15-25min。所述步骤3)的磷酸缓冲液的pH＝7.0，每升磷酸缓冲液中含15-30g甘氨酸和0.5-1.0g溶菌酶。所述步骤3)的离心是在4-10℃、6000-8000r/min下离心20-30min。所述步骤4)的均质为温度为15-30℃。所述步骤4)的拐枣多糖制备过程为：取新鲜拐枣经洗净后进行打浆，然后加入20倍拐枣重量的水，搅拌均匀，于90℃条件下保温2h，然后抽滤获得拐枣多糖提取液，冷却至38℃后按质量体积比接入2％的保拉迪酵母活化液，37℃恒温培养24h除去拐枣中的单糖和双糖，离心收集保拉迪酵母菌体，将上清液用旋转蒸发仪浓缩至1/20，再按1:3的体积比加入无水乙醇，然后用布氏漏斗抽滤获得拐枣粗多糖，再将拐枣粗多糖复水加入氯仿和正丁醇除蛋白，然后取水相再次加入氯仿和正丁醇，三次脱蛋白后通过冷冻干燥获得拐枣多糖。本专利技术以羊乳为原料，GRAS微生物——鼠李糖乳杆菌的胞壁蛋白酶为生物催化剂，将羊乳中的蛋白质水解成具有ACE抑制活性和抗氧化性的短肽，消费者摄入可以辅助降血压和抗氧化，添加的拐枣多糖既具有稳定剂和降低血糖的作用，可增加羊乳活性饮料的功能性；添加的赤藓糖醇和木糖醇为功能性糖醇，其具有低甜度、低热量、无龋齿性、对血糖影响小等特点，本专利技术制备的羊乳活性饮料可作为辅助降血压、抗氧化、降血糖和防龋齿食品。具体实施方式以下为结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1：1)鼠李糖乳杆菌培养基制备：将乳糖20g、牛肉膏15g、硫酸镁13mg、吐温800.7mL，低聚半乳糖3g、蛋白胨3g、磷酸氢二钠6g、丙氨酸5mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至6.0，于121℃灭菌得得鼠李糖乳杆菌培养基；2)鼠李糖乳杆菌培养及菌体收集：将鼠李糖乳杆菌按3％的接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中，37℃恒温培养22h，然后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤离心得鼠李糖乳杆菌菌泥；所述的离心是在8℃、7000r/min下离心20min；3)鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶制备：按每g鼠李糖乳杆菌菌泥中添加23mL、pH＝7.0的磷酸缓冲液(每升磷酸缓冲液中含20g甘氨酸和1.0g溶菌酶)，35℃保温3h后在4℃、8000r/min下离心20min得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超滤膜去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl2，控制CaCl2的浓度为17mM，冷冻干燥获得鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；4)羊乳活性饮料的制备：将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.5质量体积比向其中加入1.5％的鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.03％CaCl2，于40℃下酶解3h，然后再按质量体积比添加0.8％的β-环糊精，0.2％的拐枣多糖、5％的赤藓糖醇、5％的木糖醇、0.3％的L-苹果酸，0.2％的柠檬酸，0.15％的柠檬酸钠混合均匀后经25℃均质、杀菌后得到含降压肽和抗氧化肽的羊乳活性饮料，其ACE抑制活性为80％，DPPH自由基清除率为60％，羟自由基清除率为75％。实施例2：1)鼠李糖乳杆菌培养基制备：将乳糖15g、牛肉膏20g、硫酸镁18mg、吐温800.5mL，低聚半乳糖4g、蛋白胨5g、磷酸氢二钠4g、丙氨酸8mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5，于121℃灭菌得得鼠李糖乳杆菌培养基；2)鼠李糖乳杆菌培养及菌体收集：将鼠李糖乳杆菌按5％的接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中，35℃恒温培养24h，然后离心收集菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法，其特征在于：1)鼠李糖乳杆菌培养基制备：将乳糖15‑25g、牛肉膏15‑25g、硫酸镁10‑20mg、吐温80 0.5‑1.0mL，低聚半乳糖2‑5g、蛋白胨3‑6g、磷酸氢二钠4‑6g、丙氨酸5‑10mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5‑7.0，于121℃灭菌得得鼠李糖乳杆菌培养基；2)鼠李糖乳杆菌培养及菌体收集：将鼠李糖乳杆菌按2％‑5％的接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中，35‑41℃恒温培养18‑24h，然后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤离心得鼠李糖乳杆菌菌泥；3)鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶制备：按每g鼠李糖乳杆菌菌泥中添加20‑30mL的磷酸缓冲液，35‑45℃保温1‑3h后离心得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1‑3KDa超滤膜去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl2，控制CaCl2的浓度为10‑20mM，冷冻干燥获得鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；4)羊乳活性饮料的制备：将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.0‑8.0质量体积比向其中加入1‑3％的鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01‑0.04％CaCl2，于35‑45℃下酶解2‑4h，然后再按质量体积比添加0.5‑1.0％的β‑环糊精，0.2‑0.4％的拐枣多糖、4‑6％的赤藓糖醇、3‑5％的木糖醇、0.1‑0.3％的L‑苹果酸，0.10‑0.25％的柠檬酸，0.10‑0.25％的柠檬酸钠混合均匀后经均质、杀菌后得到含降压肽和抗氧化肽的羊乳活性饮料，其ACE抑制活性为70‑90％，DPPH自由基清除率为60‑80％，羟自由基清除率为75‑95％。...

【技术特征摘要】
1.一种鼠李糖乳杆菌蛋白酶制备羊乳活性饮料的方法，其特征在于：1)鼠李糖乳杆菌培养基制备：将乳糖15-25g、牛肉膏15-25g、硫酸镁10-20mg、吐温800.5-1.0mL，低聚半乳糖2-5g、蛋白胨3-6g、磷酸氢二钠4-6g、丙氨酸5-10mg添加到纯净水中，定容至1L，调节pH值至5.5-7.0，于121℃灭菌得得鼠李糖乳杆菌培养基；2)鼠李糖乳杆菌培养及菌体收集：将鼠李糖乳杆菌按2％-5％的接种量接入鼠李糖乳杆菌培养基中，35-41℃恒温培养18-24h，然后离心收集菌体沉淀，之后用无菌生理盐水洗涤离心得鼠李糖乳杆菌菌泥；3)鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶制备：按每g鼠李糖乳杆菌菌泥中添加20-30mL的磷酸缓冲液，35-45℃保温1-3h后离心得上清液即为胞壁蛋白酶的酶液，采用1-3KDa超滤膜去除小分子物质，然后在保留液中添加CaCl2，控制CaCl2的浓度为10-20mM，冷冻干燥获得鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉；4)羊乳活性饮料的制备：将鲜羊奶经脱脂后调节pH值至6.0-8.0质量体积比向其中加入1-3％的鼠李糖乳杆菌胞壁蛋白酶菌粉和0.01-0.04％CaCl2，于35-45℃下酶解2-4h，然后再按质量体积比添加0.5-1.0％的β-环糊精，0.2-0.4％的拐枣多糖、4-6％的赤藓糖醇、3-5％的木糖醇、0.1-0.3％的L-苹果酸，0.10-0.25％的柠檬酸，0.10-0.25％的柠檬酸钠混合均匀后经均质、杀菌后得到含降压肽和抗氧化肽的羊乳活性饮料...

【专利技术属性】
技术研发人员：舒国伟，田梦琪，上官文菲，陈合，
申请(专利权)人：陕西科技大学，
类型：发明
国别省市：陕西,61