包含丝氨酸蛋白酶变体的组合物和方法技术

本发明专利技术提供了包含丝氨酸蛋白酶变体，更具体地，由此产生的枯草杆菌蛋白酶变体的消费品。具体地，本发明专利技术提供了包含丝氨酸蛋白酶变体，更具体地，与参考丝氨酸蛋白酶相比具有一个或多个取代的枯草杆菌蛋白酶变体的消费品。此外，本发明专利技术提供了制备此类组合物的方法和处理表面，尤其是织物表面的方法，所述方法包括使表面与包含丝氨酸蛋白酶变体，更具体地，枯草杆菌蛋白酶变体和助剂材料的含水液体接触。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日为2012年5月4日、专利技术名称为“包含丝氨酸蛋白酶变体的组合物和方法”的中国专利申请No.201280021968.1的分案申请。
本专利技术提供了包含丝氨酸蛋白酶变体的消费品。具体地，本专利技术提供了包含与参考丝氨酸蛋白酶相比具有一个或多个取代的丝氨酸蛋白酶变体的组合物。此外，本专利技术提供了制备和使用此类消费品的方法。所述蛋白酶可以是枯草杆菌蛋白酶变体。
技术介绍
尽管蛋白酶提供对污渍(例如血液)的良好清洁是已知的，考虑到可持续性和对较低洗涤温度的消费者趋势，对递送消费者可接受的有益效果的洗涤剂的需求在持续增长，并且仍然存在提供那些带来清洁和清新度的组合物的需求。尽管丝氨酸蛋白酶作为工业酶类很久以来在本领域中是已知的，仍然存在对适合特定条件和用途的工程化的蛋白酶的需求，并且本专利技术人已发现，这些对于帮助解决对有效的清洁和/或处理组合物的持续增长的需求能够是有用的。
技术实现思路
在一个实施例中，本专利技术包括清洁和/或处理组合物，其包含：分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述枯草杆菌蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的成熟形式，并且包含具有选自列表1-19的位置处氨基酸取代组合的氨基酸序列，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置根据SEQ ID NO:1中所示的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中对应氨基酸位置的编号来编号；和助剂材料。在一个实施例中，本专利技术包括清洁和/或处理组合物，其包含：迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体与SEQ ID NO:2具有至少80％的氨基酸序列同一性，并且具有蛋白水解活性，并且包含具有选自列表1-19的氨基酸取代组合的氨基酸序列，并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置根据SEQ ID NO:1中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中对应氨基酸位置的编号来编号；和助剂材料。在上文所列的每一实施例中，与具有SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列的GG36蛋白酶相比，所述变体能够具有改善的清洁。在一些实施例中，本专利技术包括任何上述变体，其中所述变体的总净电荷相对于所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的总净电荷是0、+1、+2、+3、+4、+5、-1、-2、-3、-4、或-5。在一些实施例中，本专利技术包括具有至少一种上文所列的变体的组合物，其中所述组合物是织物和家居护理产品。在另一个实施例中，本专利技术包括制备上述组合物的方法，其包括获得至少一种上文所列的变体并且将它与助剂材料或其混合物混合。在另一个实施例中，本专利技术包括处理表面(尤其是织物)的方法，其包括使所述表面与包含至少一种上文所列的变体和助剂材料的含水液体接触。序列表简述图1提供了成熟的参考蛋白酶的比对，所述蛋白酶包括：BPN’(SEQ ID NO:1)和GG36(SEQ ID NO:2)。每种蛋白酶变体(更具体地，本文所述的枯草杆菌蛋白酶变体，包括每一冷水蛋白酶变体)的每一氨基酸位置均根据如图1中所示的解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列中对应氨基酸位置的编号来编号，如通过将所述蛋白酶变体的氨基酸序列与解淀粉芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列进行比对所确定的。因此，除非本文另外指明，取代位置均以与BPN’的关系给出。具体实施方式定义除非另外指明，本专利技术的制备涉及分子生物学、蛋白质工程、微生物学、和重组DNA中常用的常规技术，它们是在本领域的技术范围内。此类技术是本领域的技术人员已知的，并且描述于本领域的技术人员所熟知的众多文献和参考工作中。在上文和下文中，本文提及的全部专利、专利申请、文章和出版物，均以引用方式特此并入本文。除非本文另外指明，本文所用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域普通技术人员一般理解的相同的含义。许多技术辞典是本领域的技术人员已知的。尽管与本文所述的方法和材料类似或等同的任何方法和材料也可用于本专利技术的制备中，但是本文描述了一些合适的方法和材料。因此，下面即将限定的术语通过参考说明书作为整体而得到更加充分的描述。此外，如本文所用，单数的“一个”、“一种”和“所述”包括复数的参考，除非上下文清楚地另外指明。数值范围包括限定该范围的数值在内。除非另外指明，分别地，核酸以5′至3′方向从左至右书写；氨基酸序列以氨基至羧基方向从左至右书写。应当理解，本专利技术不限于所描述的特定方法、规程和试剂，因为本领域技术人员可以根据它们的应用背景对它们进行改变。除非另外指明，本专利技术的制备采用了蛋白质纯化、分子生物学、微生物学、重组DNA技术和蛋白质测序的常规技术，这些全部均在本领域的那些技术范围内。此外，本文提供的标题并非对通过参考说明书作为整体能够得到的本专利技术的实施例的各种方面的限制。因此，下面即将限定的术语通过参考说明书作为整体而得到更加充分的限定。尽管如此，为了有利于理解本专利技术，多个术语被定义如下。如本文所用，术语“蛋白酶”和“朊酶”是指具有分解其他蛋白质的能力的酶蛋白质。蛋白酶具有进行“蛋白水解”的能力，其通过在形成蛋白质的肽或多肽链中将氨基酸连接在一起的肽键的水解，开始蛋白质的分解代谢。蛋白酶作为蛋白质消化酶类的活性被称为“蛋白水解活性”。存在许多用于测量蛋白水解活性的为人们所熟知的方法(参见，例如，Kalisz,“Microbial Proteinases,”见：Fiechter(编辑),Advances in BiochemicalEngineering/Biotechnology,(1988))。例如，通过分析相应的蛋白酶水解商品化底物的能力的比较性测定，可确定蛋白水解活性。在蛋白酶或蛋白水解活性的分析中有用的示例性底物包括但不限于二甲基酪蛋白(Sigma C-9801)、牛胶原(Sigma C-9879)、牛弹性蛋白(Sigma E-1625)、和牛角蛋白(ICN Biomedical 902111)。利用这些底物的比色测定是本领域中为人们所熟知的(参见，例如，WO 99/34011和美国专利6,376,450，二者均以引用方式并入本文)。pNA测定法(参见，例如，Del Mar等人，Anal.Biochem.99:316-320[1979])也可用于测定在梯度稀释中收集的部分的活性酶浓度。该测定法测量随着酶使可溶的合成底物丁二酰-丙氨酸-丙氨酸-脯氨酸-苯丙氨酸-对-硝基苯胺(suc-AAPF-pNA)水解，对-硝基苯胺释放的速率。在分光光度计上于410nm测量了来自水解反应的黄颜色的产生速率，并且其与活性酶的浓度成比例。此外，在280纳米(nm)处的吸光度测量能够被用于测定总蛋白质浓度。活性酶/总蛋白质比率给出了酶的纯度。如本文所用，术语“枯草杆菌蛋白酶”是指如MEROPS-肽酶数据库(参见，Rawlings等人，MEROPS:the peptidase database,Nucl Acids Res,34Database issue,D270-272[20本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种清洁和/或处理组合物，包含助剂材料和分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述枯草杆菌蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的成熟形式并且包含具有选自下列的位置处氨基酸取代组合的氨基酸序列：T022A‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑S188D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑Q245R‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑N248D‑E271F,T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑Q245R‑E271F,或T022A‑S101G‑S103A‑V104I‑N116L‑G159D‑S188D‑A232V‑Q245R‑N248D‑E271F,并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置根据SEQ ID NO:1中所示的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中对应氨基酸位置的编号来编号。...

【技术特征摘要】
2011.05.05 US PCT/US2011/0353191.一种清洁和/或处理组合物，包含助剂材料和分离的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述枯草杆菌蛋白酶变体是具有蛋白水解活性的成熟形式并且包含具有选自下列的位置处氨基酸取代组合的氨基酸序列：T022A-S103A-V104I-N116L-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-V104I-N116L-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-N116L-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-G159D-A232V-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-G159D-S188D-Q245R-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-G159D-S188D-A232V-N248D-E271F,T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-G159D-S188D-A232V-Q245R-E271F,或T022A-S101G-S103A-V104I-N116L-G159D-S188D-A232V-Q245R-N248D-E271F,并且其中所述枯草杆菌蛋白酶变体的氨基酸位置根据SEQ ID NO:1中所示的解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)枯草杆菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列中对应氨基酸位置的编号来编号。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述分离的枯草杆菌蛋白酶变体是迟缓芽孢杆菌(Bacillus lentus)枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的枯草杆菌蛋白酶变体，其中所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。3.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述分离的枯草杆菌蛋白酶变体与所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶具有至少90％的氨基酸同一性，所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶包含SEQ ID NO:2中所示的氨基酸序列。4.根据前述权利要求中任一项所述的组合物，其中所述分离的枯草杆菌蛋白酶变体的总净电荷相对于所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的总净电荷是-1、0、+1、+2、+3、+4、+5、-1、-2、-3、-4、或-5。5.根据权利要求4所述的组合物，其中所述分离的枯草杆菌蛋白酶变体的总净电荷相对于所述迟缓芽孢杆菌枯草杆菌蛋白酶GG36蛋白酶的总净电荷是+1、0、-1、-2、-3、或-4。6.根据前述权利要求中任一项所述的清洁和/或处理组合物，其中所述分离的枯草杆菌蛋白酶变体的总净电荷通过选自下列的一个或多个取代获得：A001E,V004E,R010H/A,Q012E,A015D,N018D,R019H/S,V026D,K027E,N043D,R045C/T/S P,S049D,V051E,G061E,N062D E,N0...

【专利技术属性】
技术研发人员：P·F·苏特，E·J·马格尼斯，G·S·沃德，N·S·阿明，K·奥古斯丁，J·R·巴斯勒，L·G·卡斯考皮埃拉，K·D·科利尔，E·M·孔卡，D·A·伊斯戴尔，J·T·小克里斯，A·皮萨契克，A·J·鲍罗斯，J·姚，
申请(专利权)人：宝洁公司，
类型：发明
国别省市：美国;US