抑制P2X7受体表达的方法和组合物技术

本发明专利技术公开了用于下调Ｐ２Ｘ７受体表达或活性的方法和组合物。优选的组合物包括ｓｉＮＡ。所述方法和组合物用于治疗特征在于增加的Ｐ２Ｘ７受体活性的疾病，诸如神经元变性、阿尔茨海默病、炎症疾病、和某些癌症。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于治疗和/或预防神经元变性或与P2X7受体(P2RX7)的高水平表达或活性相关的其它疾病的方法和组合物。在优选实施方案中，本专利技术涉及应用RNAi技术下调P2RX7的表达。本专利技术提供了用于治疗与P2RX7高水平相关的疾病以及治疗神经性和炎症源性的疼痛的方法和组合物，所述疾病包括，但不限于，神经元变性、中风或者心脏疾病发作中的再灌注(reperfusion)或局部缺血、阿尔茨海默病、炎症疾病(诸如类风湿性关节炎、骨关节炎、哮喘、鼻炎、慢性梗阻性肺病(COPD)、炎性肠病(IBD)诸如局限性回肠炎)、过敏症、自体免疫疾病、癌症(诸如白血病或非黑素瘤皮肤癌)、皮肤相关的病况(诸如银屑病、湿疹、秃头症)、视网膜疾病。
技术介绍
RNAi作为下调基因表达的工具通过同源重组进行基因靶向通常用于确定哺乳动物中的基因功能，但是这是花费高并且费时的方法。备选地，在用核糖酶或反义技术进行mRNA抑制后，可以确定许多基因的功能。尽管在一些情况中是成功的，但是这些技术很难普遍应用。siRNA-指导的“击倒”的出现已经引起了在体细胞遗传学中的革命，这允许在哺乳动物中进行便宜的和快速的基因功能分析。在最近的15年里，在mRNA水平上建立针对敲除基因表达的便利的和可靠的方法已经成为分子生物学的反复的主题。为了努力产生失去功能的细胞或生物体，已经检测了各种分子，其包括，例如，反义序列、核糖酶和嵌合寡核苷酸，但是这样的分子的设计基于反复的试验，这取决于目标基因的特性。此外，很难预测需要的作用，并且只获得微弱的抑制(Braasch & Corey，2002)。在二十世纪九十年代早期发现植物中的现象之后，在1998年，AndyFire和Craig Mello首次用线虫(Caenorhabditis elegans)证明dsRNA(双链RNA)可以以非常有效的方式特异性地和选择性地抑制基因表达(Fire等，1998)。在他们的实验中，第一链(所谓的有义RNA)序列与目标信使RNA(mRNA)的相应区域的序列一致。第二链(反义RNA)与这一mRNA互补。形成的dsRNA结果比相应的单链RNA分子(特别地，反义RNA)有效得多(几个数量级)。Fire等.1998依据RNA干扰将这一现象命名为RNAi。已经表明，这种有力的基因沉默机制在大多数动植物门的一些物种中起作用。当叫作DICER的酶遇到dsRNA，并且将其切割成叫作小干扰RNAs或siRNAs的片段时，RNAi开始。这种蛋白属于RNase III核酸酶家族。当蛋白复合物聚集这些RNA残余物，并且将它们的密码用作寻找和破坏细胞中具有匹配序列的任何RNAs诸如目标mRNA的向导(综述参见Bosher & Labouesse，2000)。RNAi现象(Akashi等，2001)可以总结如下●步骤1dsRNA识别和扫描过程。●步骤2通过RNAse III活性分解dsRNA，并且产生siRNAs。●步骤3siRNAs和RISC复合体中缔合因子的缔合。●步骤4识别互补的目标mRNA。●步骤5在与siRNA互补区域中心分解目标mRNA。●步骤6降解目标mRNA，并且再生RISC复合体。在将RNAi现象用作基因击倒技术的尝试中，很快意识到，哺乳动物细胞已经发展了针对病毒感染的各种保护现象，这些保护线性可以妨碍这种方法的应用。实际上，极低水平的病毒dsRNA的存在引发了干扰素应答，这导致翻译的全面非特异性抑制，其又引发了程序性细胞死亡(Williams，1997，Gil & Esteban，2000)。在2000年，使用dsRNA的第一次尝试导致小鼠卵母细胞和早期胚胎中的3种基因的特异性抑制(MmGFP受控于延伸因子1a、E-钙黏着蛋白和c-mos)。翻译被抑制，因此，当所述胚胎继续发育时，没有观察到PKR应答(Wianny & Zernicka-Goetz，2000)。一年后，关于Ribopharma AG(Kulmbach，Germany)的研究首次证明了RNAi在哺乳动物细胞中的功能性。使用短的(20-24碱基对)dsRNAs-其叫作SIRPLEXTM-它们甚至在人细胞中特异性地关闭基因，而不起始急性期反应。后来其它的研究小组进行的类似实验(Elbashir等，2001；Caplen等.，2001)进一步证明了这些结果。一年后，Paddison等(Paddison等，2002)尝试应用折叠成发夹结构的小RNAs来抑制特异的基因的功能。这一工作受到早先的研究的启发，早先的研究表明，线虫中的一些基因通过编码发夹结构的RNAs的RNAi而天然地调控其它基因。在各种正常的和癌症的人和小鼠细胞系中检测，短的发夹RNAs(shRNAs)能够如同它们的siRNA副本那样有效地沉默基因。此外，shRNA在体内展现出比等价双链体更少的再缔合动力学。甚至更重要的，这些作者制备了转基因细胞系，这些转基因细胞系被加工以合成在细胞分裂过程中表现出持续长久的抑制作用的shRNAs(Eurogentec)。最近，表明另一组小RNAs(也包括在21-25nt范围内)介导基因表达的下调。已经在线虫中描述了这些叫作小的瞬时调控RNAs(stRNAs)的RNAs，在线虫中，它们调控发育过程中基因表达时间。应该注意到，尽管有明显的相似性，但是stRNAs和siRNAs通过不同的作用模式发生(综述参见Banerjee & Slack，2002)。与siRNAs相比，22nt长的stRNAs在翻译起始后下调目标mRNA的表达，而不影响mRNA的完整性。最近的研究表明，最初在线虫类中描述的两种stRNAs是线虫类中存在的具有上百种其它微-RNAs(miRNAs)的大家族中的成员(Grosshans & Slack，2002)。科学家开始将RNAi用在一些系统中，包括线虫、果蝇、锥虫和各种其它的无脊椎动物。并且，应用这种方法，一些小组最近描述了在不同的哺乳动物细胞系一特别是在Hela细胞中一的蛋白生物合成的特异性抑制，这表明RNAi是在体外用于基因沉默的广泛适用的方法。基于这些结果，RNAi已经迅速地成为确定(鉴定和分配)基因功能的公认工具。并且，应用短dsRNA寡聚核苷酸的RNA干扰将允许解释只被部分测序的基因的功能。因此，在诸如下列各项的研究中，RNAi将是不可避免的●在真核细胞中在转录后水平上抑制基因表达。在这一内容中，RNAi是快速评估基因功能和揭示无效表型的直接工具。●研发RNAi技术用于移植后的胚胎。●RNA干扰主要的经济显著性由其作为治疗原理的应用而建立。由于此，RNAi可以产生治疗人类疾病的基于RNA的药物。抑制高水平的P2RX7以预防疾病。P2X受体是应答胞外ATP结合而开放的膜离子通道(North，2002)。它们分布丰富，并且功能性反应在神经元、神经胶质、上皮细胞、内皮细胞、骨、肌肉和造血组织中观察到。嘌呤能P2X7受体(P2RX7)是具有广泛分布的配体-开关的阳离子通道，其包括免疫和造血系统的细胞(Di Virgilio等.，2001；North 2002)。最初鉴定了与GenBank登记号NM_00本文档来自技高网...

【技术保护点】
ｓｉＮＡ在制备药物中的应用，所述药物用于治疗特征在于增加的Ｐ２ＲＸ７表达和／或活性的病况的方法，所述方法包括在患者中下调Ｐ２ＲＸ７的表达。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：安娜I希门尼斯，安吉拉塞斯托，吉塞P罗曼，伊雷妮加斯孔，贡萨洛冈萨雷斯布伊特拉戈，玛丽亚C希门尼斯，
申请(专利权)人：西伦蒂斯私人股份公司，
类型：发明
国别省市：ES[西班牙]