丙型肝炎病毒(HCV)一步荧光定量RT-PCR检测方法及其试剂盒技术

本发明专利技术涉及丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）一步实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测方法以及试剂盒组成。首先，检索到人体丙型肝炎病毒基因组全序列，并对检索所得ＨＣＶ各个亚型序列进行同源性比对，再针对其保守基因序列设计出一对特异性引物和一条用荧光染料标记的探针，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法扩增目的基因。在一适当波长下检测反应始终扩增产物荧光强度，Ｃｔ值为０或大于２７：丙型肝炎病毒呈阴性；Ｃｔ值小于２６：则呈阳性，病人丙型肝炎病毒感染。此外，本发明专利技术采用改进的Ｔｒｉｚｏｌ法结合特异性硅基质核酸吸附柱来提取ＨＣＶ　　ＲＮＡ，同时，利用一步荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ技术对丙型肝炎病毒进行检测。在核酸提取结束后直接在体系中加入ＲＴ－ＰＣＲ反应液，ｃＤＮＡ的合成与ＰＣＲ反应在同一管中进行，不用增加额外的步骤。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种丙型肝炎病毒一步实时荧光定量ＲＴ－ＰＣＲ检测方法以及试剂盒。本法考察了人体丙型肝炎病毒基因组全序列，并对检索所得ＨＣＶ各个亚型序列进行同源性比较，针对其保守基因序列设计出一对特异性引物和一条特异性荧光探针，采用实时荧光定量ＰＣＲ方法扩增目的基因。在一适当波长下检测反应始终荧光强度，Ｃｔ值为０或大于２７：丙型肝炎病毒呈阴性；Ｃｔ值小于２６：则呈阳性，病人丙型肝炎病毒感染。本专利技术具有特异性好，灵敏度高，定量精确，快速简便，可重复性高，可对丙型肝炎病毒进行快速定性定量检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和ＥＬＩＳＡ（酶联免疫吸附试验）诊断方法。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：唐先兵，石和鹏，肖静，段清芬，李晓雯，郑宜婷，吕倩倩，
申请(专利权)人：扬子江药业集团北京海燕药业有限公司，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]