三种甘薯病毒的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测方法技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，特别是涉及三种甘薯病毒的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测方法。该方法通过，分别合成甘薯潜隐病毒引物、甘薯Ｇ病毒引物和甘薯羽状斑驳病毒的引物，然后提取样品中病毒的总ＲＮＡ，进行反转录；将病毒的上、下游引物分别混合后置于一个ＰＣＲ反应体系中，置于ＰＣＲ反应体系中，以反转录产物作为模板，进行ＰＣＲ扩增；最后用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。本发明专利技术建立了可同时检测甘薯三种病毒的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测技术，即在一次ＰＣＲ反应中同时检测三种甘薯病毒，有效地提高了检测效率，降低了生产成本；通过对三种主要甘薯病毒的高效检测，可确保脱毒甘薯的质量和增产效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物工程
，特别是涉及三种甘薯病毒的多重RT-PCR检 测方法。二
技术介绍
甘薯潜隐病毒(Sweet potato latent virus, SPLV)、甘薯G病毒(Sweet Potato Virus G， SPVG)和甘薯羽状斑驳病毒(Sweet potato feathery mottle virus, SPFMV)是危害甘薯的主要病毒。三种病毒都属于马铃薯Y病毒属(Potyvirus)，常常混 合侵染，造成甘薯产量降低，品质变劣和种性退化，对甘薯生产造成严重危害。 对甘薯病毒病目前尚无特别有效的化学防治方法，利用茎尖分生组织培养，培 育脱毒甘薯是防治病毒病最有效的方法。在培育脱毒甘薯的过程中，需要对甘 薯茎尖苗进行病毒检测，因此，建立甘薯病毒高效的检测技术是培育脱毒甘薯 的前提和基础。目前用于甘薯病毒检测的常用方法是酶联免疫吸附(ELISA)技 术和PCR技术，由于ELISA技术的灵敏度较低，而且SPLV、 SPVG和SPFMV 三种病毒的抗体之间常有交互反应，不能对三种病毒进行特异性检测。而利用 单一的RT-PCR检测方法对多种病毒进行检测时，工作本文档来自技高网...

【技术保护点】
三种甘薯病毒的多重ＲＴ－ＰＣＲ检测方法，其特征在于，（１）分别合成甘薯潜隐病毒引物ＳＥＱ１、ＳＥＱ２，甘薯Ｇ病毒引物ＳＥＱ３、ＳＥＱ４和甘薯羽状斑驳病毒引物ＳＥＱ５、ＳＥＱ６；其中，ＳＥＱ１：５′－ＣＴＴＣＡＧＴＧＡＣＧＴＴＧＣＴＧＡＡＧＣ－３′，ＳＥＱ２：５′－ＴＧＣＡＣＡＣＣＣＣＴＣＡＴＴＣＣＴＡＡＧ－３′，ＳＥＱ３：５′－ＣＣＡＡＡＴＡＴＣＡＡＴＧＧＴＧＡＴＴＧＧＧＴ－３′，ＳＥＱ４：５′－ＣＣＡＣＧＣＡＴＴＣＣＡＡＧＴＡＧＴＧＴＧＴＧＴ－３′，ＳＥＱ５：５′－ＧＣＡＣＣＡＡＴＧＧＣＡＡＡＴＧＧＡＡＧＡＡＴＡＧ－３′，ＳＥＱ６：５′－ＧＡＧＧＴＴＡＴＧＴＡＴＡＴＴＣＣＴＴＧＴＡＡＣ－３′...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张振臣，张业辉，张德胜，蒋士君，乔奇，王永江，秦艳红，
申请(专利权)人：河南省农业科学院植物保护研究所，
类型：发明
国别省市：41[中国|河南]