人源化抗HER2单克隆抗体及其制法和药物组合物制造技术

本发明专利技术提供了一种抗ＨＥＲ２单克隆抗体，它的重链可变区具有ＳＥＱＩＤＮＯ：１、ＳＥＱ＿ＩＤＮＯ：５或ＳＥＱＩＤＮＯ：９所示的氨基酸序列，它的轻链可变区具有ＳＥＱＩＤＮＯ：２、ＳＥＱ＿ＩＤＮＯ：６或ＳＥＱＩＤＮＯ：１０所示的氨基酸序列。该单克隆抗体的生物活性和在宿主细胞中的表达量有显著提高。本发明专利技术还提供了编码该抗体的ＤＮＡ分子、该抗体的制备方法和含有该抗体的药物组合物。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物
具体地说，本专利技术涉及一种新的人源化抗HER2单克隆抗体。另外，本专利技术还涉及该单克隆抗体的制备方法以及含有该单克隆抗体的药物组合物。
技术介绍
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一。据统计，全球每年约有120余万妇女患乳腺癌，50万妇女死于乳腺癌。北美洲、西欧、北欧等发达国家乳腺癌发病率最高，非洲发病率最低。近年来，乳腺癌的发病在世界范围内呈明显上升趋势。无论在高发区还是低发区，乳腺癌发病率均以5-20％的速度上升。随着亚洲国家生活水平的提高，亚洲妇女乳腺癌发病的增长趋势已明显高于欧美国家，成为上升幅度最大的地区之一。尽管我国与其他国家和地区相比较，尚属于乳腺癌低发地区，但是乳腺癌的发病率也处于上升阶段。在我国，乳腺癌在一些城市已发展为女性恶性肿瘤发病的首位，上海1972～1974年女性乳腺癌的发病率为18.3/10万，1987～1989年为25.1/10万，增长37.6％，年增长2.3％。据专家预测，2000年上海女性乳腺癌发病率将达28.8/10万，居女性恶性肿瘤的首位。HER2(人表皮生长因子受体2，human epidermal growth factor receptor2)受体是分子量为185kD、具酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，配体与HER2受体结合后，使HER2受体自身磷酸化并激活其酪氨酸激酶活性，从而促进细胞增殖。正常人中有一定的HER2基因的表达，但其过度表达就可导致细胞过度增殖和表型恶性转化，也就形成了肿瘤。研究发现，在25％～30％晚期乳腺癌的癌组织中有HER2受体基因过度表达，且此基因的过度表达是乳腺癌的一项独立的预后不良因素(Slamon等，Science，235177-182；Slamon等，Science，244707-712)。HER2受体过度表达的乳腺癌特点表现为病情进展迅速，化疗缓解期短，对三苯氧胺易产生耐药，无病生存率和总生存率均低于HER2阴性的乳腺癌。国内外研究发现，抗HER2的单克隆抗体可以在体外、体内抑制HER2阳性的乳腺癌细胞或其它类型HER2阳性癌细胞的生长。但是用鼠源性抗体治疗人体疾病，受到鼠源性抗体的免疫原性等限制。以往的临床经验已经证实，鼠源抗体很难取得理想的疗效。近年来，人源化抗体技术的出现和发展，为这种针对HER2受体的单抗免疫治疗过渡到临床提供了可能。但是，现有的商品化的抗HER2单克隆抗体Herceptin(Genentech公司)的生物活性仍有待提高。因此，本领域中仍需要一种新的生物活性更高的人源化抗抗HER2单克隆抗体。专利技术目的本专利技术的目的是提供一种特异性结合HER2受体的单克隆抗体。本专利技术的另一目的是提供编码上述抗HER2单克隆抗体的DNA分子。本专利技术的另一目的是提供一种含有上述单克隆抗体的药物组合物。本专利技术还有一个目的是提供制备上述单克隆抗体的方法。为达到上述专利技术目的，本专利技术一方面提供了一种人源化单克隆抗体，该蛋白特异性结合人HER2受体，该蛋白包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，重链可变区具有SEQ ID NO1、SEQ ID NO5或SEQ ID NO9所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO2、SEQ ID NO6或SEQ ID NO10所示的氨基酸序列。较佳的是，该单克隆抗体中的重链可变区具有SEQ ID NO1所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO2所示的氨基酸序列。本专利技术另一方面提供了编码上述人源化单克隆抗体的DNA分子。在一个较佳的实例中，该DNA分子含有SEQ ID NO3、SEQ ID NO7或SEQ IDNO11所示的编码所述单抗重链可变区的核苷酸序列，以及SEQ ID NO4、SEQ IDNO8或SEQ ID NO12所示的编码所述单抗轻链可变区的核苷酸序列。本专利技术第三方面提供了一种表达载体，该表达载体含有上述DNA序列以及与该序列操作性相连的表达调控序列。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，其特征在于，它被上述表达载体转化。在一个较佳的实例中，该宿主细胞选自大肠杆菌和COS细胞。本专利技术第五方面提供了一种药物组合物，其特征在于，它含有药学上有效量的上述人单克隆抗体以及药学上可接受的载体。本专利技术第六方面提供了一种制备上述人源化单克隆抗体的方法，其特征在于，该方法包括a)提供一表达载体，该表达载体含有上述DNA序列以及与该序列操作性相连的表达调控序列；b)用步骤a)所述的表达载体转化宿主细胞；c)在适合所述人源化单克隆抗体表达的条件下培养步骤b)所得的宿主细胞；和d)分离纯化获得所述人源化的单克隆抗体。本专利技术的优点在于本专利技术的单克隆抗体的亲和力和在宿主细胞中的表达量比现有的商品化的Herceptin单克隆抗体均有显著提高。本专利技术的其它目的和优点可通过下面的详细描述得知。 附图说明图1显示了本专利技术所用pMG18载体的酶切图谱。图中Ck表示抗体kappa轻链的恒定区基因；IgG1恒定区表示人抗体IgG1的重链恒定区基因；pA表示SV40加poly A位点。图2显示了构建人源化抗体基因时所用引物之间的位置关系。专利技术详述本专利技术涉及一种人源化单克隆抗体，该蛋白特异性结合人HER2受体，该蛋白包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，重链可变区具有SEQ ID NO1、SEQ IDNO5或SEQ ID NO9所示的氨基酸序列，轻链可变区具有SEQ ID NO2、SEQ IDNO6或SEQ ID NO10所示的氨基酸序列。本文所用的术语“单克隆抗体(单抗)”指从一类基本均一抗体获得的抗体，即该群体中包含的单个抗体是相同的，除少数可能存在的天然发生的突变外。单克隆抗体高特异性地针对单个抗原位点。而且，与常规多克隆抗体制剂(通常是具有针对不同决定簇的不同抗体)不同，各单克隆抗体是针对抗原上的单个决定簇。除了它们的特异性外，单克隆抗体的好处还在于它们是通过杂交瘤培养来合成的，不会被其它免疫球蛋白污染。修饰语“单克隆”表示了抗体的特性，是从基本均一的抗体群中获得的，这不应被解释成需要用任何特殊方法来生产抗体。例如，用于本专利技术的单克隆抗体可用杂交瘤方法(由Kohler等，Nature，256495(1975)首先提出)制得，或可用重组DNA方法(例如参见美国专利No.4,816,567)制得。“单克隆抗体”也可用例如Clackson等，Nature，352624-628(1991)和Marks等，J.Mol.Biol.，222581-597(1991)所述的技术从噬菌体抗体文库中分离获得。“人源化”形式的非人(如小鼠)抗体是嵌合的免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv，Fab，Fab′，F(ab′)2或抗体的其它抗原结合序列)，它们含有非人免疫球蛋白的最小序列。对于大多数情况，人源化抗体是人免疫球蛋白中的互补决定区(CDR)残基被非人源抗体(例如有所需特异性、亲和力和活性的小鼠、大鼠或兔抗体)的CDR残基代替。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区(FR)被对应的非人残基代替。另外，人源化抗体还可包括既不存在于受者抗体、又不存在于导入的CDR或构架序列中的残基。作这些修饰能进一步提高和最大化抗体的性能。通常，人源化抗体包含基本上所有的(至少一个、通常两个)可变区，其中所有或基本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人源化单克隆抗体，该抗体特异性结合人ＨＥＲ２受体，它包含重链可变区和轻链可变区，其特征在于，重链可变区具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：５或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：９所示的氨基酸序列，轻链可变区具有ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６或ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：马菁，王俊林，
申请(专利权)人：上海中信国健药业有限公司，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]