一种构建独特调节方式下特异性杀灭ＨＩＶ感染细胞的新型重组ＨＩＶ载体的方法：基因疗法是治疗艾滋病毒（ＨＩＶ）感染和艾滋病的根本手段，而构建携带强大毒性蛋白编码基因的新型重组ＨＩＶ载体（即仅表达１～几个毒性蛋白就足以杀死ＨＩＶ感染细胞和ＨＩＶ），是最具吸引力和最有效的基因疗法之一，但构建新型重组ＨＩＶ载体并非易事，其中最关键性难题是需要有非常可靠的调节方式来保障专一性杀灭ＨＩＶ感染细胞和ＨＩＶ而不损伤正常细胞。本发明专利技术利用人类的正常细胞基因组与ＨＩＶ（主要指ＨＩＶ－１型的野生型）基因组表达产物之间的差异性焦点，即ＨＩＶ编码基因表达关键性产物所独有的作用机理，通过三种调节方式：①Ｒｅｖ蛋白调节方式。②蛋白酶调节方式。③Ｒｅｖ蛋白和蛋白酶双重调节方式。解决重组ＨＩＶ载体的强大毒性蛋白编码基因仅在ＨＩＶ感染细胞中表达，而不会有１分子毒性蛋白在正常细胞内出现的创新性方法，预期产品的独特作用最有可能根治艾滋病毒感染与艾滋病。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种构建独特调节方式下特异性杀灭ＨＩＶ感染细胞的新型重组ＨＩＶ载体的方法，其特征在于利用ＨＩＶ（主要指ＨＩＶ－１型的野生型）基因组表达产物的３种特异性调节方式：①Ｒｅｖ蛋白调节方式。②蛋白酶调节方式。③Ｒｅｖ蛋白和蛋白酶双重调节方式。Ｒ ｅｖ蛋白特异性调节方式，指在构建新型重组ＨＩＶ载体过程中，将ＣＲＳ（顺式作用阻抑序列）与ＲＲＥ（顺式作用抗阻抑序列）和（或）ＮＲＳ（核阻留序列）等的ＤＮＡ功能序列插入以供目的基因等外源性基因表达的重组ＨＩＶ载体各自相应的合适位置，依赖与ＨＩＶ的Ｒｅｖ蛋白特异的相互作用而发挥Ｒｅｖ蛋白重要的调节功能。在ＨＩＶ感染细胞内，由于ＨＩＶ基因组早期表达的Ｒｅｖ蛋白与ＲＲＥ相互作用克服ＣＲＳ的阻抑作用，同时Ｒｅｖ蛋白与ＮＲＳ的相互作用，将未经剪切的病毒ＲＮＡ运出细胞核。因此在Ｒｅｖ蛋白质所独有的作用下，ＨＩＶ基因由早期（转录调节蛋白ｍＲＮＡ）向晚期（转录ＨＩＶ结构蛋白ｍＲＮＡ）转化，其结果产生ＨＩＶ结构蛋白组装病毒颗粒。在ＨＩＶ感染细胞内，Ｒｅｖ蛋白同时也会与新型重组ＨＩＶ载体中的ＲＲＥ与ＣＲＳ和（或）ＮＲＳ相互作用，促进毒性蛋白编码基因顺利表达强大毒性蛋白杀灭ＨＩＶ感染细胞和ＨＩＶ。在正常细胞内，由于不存在ＨＩＶ的Ｒｅｖ蛋白，因此新型重组ＨＩＶ载体目的基因在ＣＲＳ与ＲＲＥ和（或）ＮＲＳ独特的作用影响下，即使存在很低水平的毒性蛋白基因转录产物也将停留在细胞核内，最终被降解，而不会有毒性蛋白产生（注：本专利技术不涉及ＨＩＶ的ＬＴＲ与Ｔａｔ蛋白和Ｔｅｖ蛋白之间的相互作用，因为这是本专利技术与其它重组病毒载体共用的调节方式）。蛋白酶特异性调节方式，指构建新型重组ＨＩＶ载体过程中，在外源性目地基因的一侧或 两侧连接上ＨＩＶ蛋白酶特异性识别序列和酶切位点的编码基因片断，也可将ｇａｇ或ｐｏｌ的某一特定产物编码基因或基因片段以合适位点与新型重组ＨＩＶ载体的目地基因相连接（注：ｇａｇ或ｐｏｌ本身含有蛋白酶识别序列和酶切位点）。在ＨＩＶ感染细胞内，ＨＩＶ基因组晚期表达的蛋白酶将ｐｏｌ蛋白切割成几个功能酶，也将Ｇａｇ蛋白前体切割成多个蛋白质及多肽，最终装配成熟的病毒颗粒。在ＨＩＶ感染细胞内，蛋白酶同时也会特异性将新型重组ＨＩＶ载体编码基因表达的蛋白前体或某一特定聚蛋白切开，加工形成具有生物活性的强大毒性蛋白，介导杀灭ＨＩＶ感染细胞和ＨＩＶ。而在正常细胞内，新型重组ＨＩＶ载体产生的毒性蛋白前体或某一特定聚蛋白，由于...
【技术特征摘要】
...
【专利技术属性】
技术研发人员：王胜军，
申请(专利权)人：王胜军，
类型：发明
国别省市：12[中国|天津]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。