松果菊苷的新应用制造技术

本发明专利技术提供松果菊苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途。经试验证明，ECH能显著降低体重和血糖水平；能显著降低24小时尿蛋白含量；能显著降低肾脏重量、血BUN和血Cr水平；能减少肾间质纤维化的含量以及减少系膜基质的沉积；能显著降低肾脏内α‑SMA升高E‑cadherin的表达水平；能显著降低肾脏内FN和CollagenⅣ表达水平。

New application of pineoside

The present invention provides the use of pineoside in the preparation of drugs for the treatment of diabetic nephropathy. Experiments show that ECH can significantly reduce the body weight and blood glucose level significantly decreased; 24 hours urinary protein content; can significantly reduce kidney weight, blood BUN and blood Cr level; can reduce the renal interstitial fibrosis and reduce the content of mesangial matrix deposition; can significantly reduce the expression level in the kidney increased SMA E alpha cadherin; kidney can significantly reduce FN and Collagen expression level IV.

【技术实现步骤摘要】
松果菊苷的新应用
本专利技术涉及松果菊苷的新用途。
技术介绍
糖尿病肾病是糖尿病的一种最常见也是最严重的并发症，最终将导致终末期肾脏疾病(ESRD)是糖尿病患者最重要的死亡原因；近年来，随着人们生活方式以及饮食习惯的改变导致糖尿病的患病率逐年增长；相关流行病调查表明，成年人糖尿病患者将由2010年的2.85亿增长2030年的4.39亿，也就是截止到2030年全球糖尿病患者相比2010年增长了一倍多。糖尿病肾病在临床上以持续性白蛋白尿和(或)肾小球滤过率(GFR)进行性下降为主要特征；其典型的肾脏形态学改变包括：肾小球基底膜增厚、系膜基质增宽、肾小球硬化、足细胞丢失；肾小管基底膜增厚、肾小管萎缩及细胞凋亡增加、肾间质炎性浸润、肾间质纤维化、管周毛细血管稀疏；出入球小动脉壁玻璃样变，尤以出球小动脉的玻璃样变更具特征性。对于DN的发展有以下几个风险因素：持续长时间的糖尿病、诊断年龄、种族、系统性或肾小球源性高血压、血糖控制不佳、遗传、肾脏疾病的易感性以及饮食。目前糖尿病肾病的发病机制尚不明确，肾纤维化常发生于糖尿病肾病，最终会导致终末期肾衰竭；肾纤维化是细胞外基质(ECM)积聚过多的结果，其中转化因子β(TGF-β)被认为是诱导上皮间质转化(EMT)的主要调节因子；同时TGF-β可能通过蛋白激酶和转绿因子等多种细胞内信号转到通路来促进纤维化的产生，因此TGF-β在DN的发展中起到非常重要的作用。目前对于糖尿病肾病的治疗主要是控制血糖、降低血压、减少尿蛋白、控制高血脂、低蛋白饮食、纠正水电解质代谢紊乱等治疗，这些治疗只能延缓糖尿病肾病的进展，但根本不能阻止ESRD的发生，传统的中药在治疗糖尿病肾病方面有着悠久的历史，但是其具体的作用机理的研究相对落后。因此，深入开展糖尿病肾病发病机理及中药的作用机理的研究，将作为中药新药研究开发机糖尿病肾病的临床治疗提供重要的科学依据。松果菊苷(ECH)是从肉苁蓉中分离出来的一种天然苯乙醇物，肉苁蓉是中药中常用的药物之一，它主要用来增强肾功能，治疗阳痿、早泄男性不孕，妇女的带下、血崩和老年人的慢性便秘。之后对松果菊苷的研究中发现其具有护肝、抗纤维化、抗氧化、抗凋亡等作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供松果菊苷在预防、缓解和/或治疗糖尿病肾病的新用途。本专利技术提供松果菊苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途。本专利技术还挺一种治疗糖尿病肾病药物，它是以松果菊苷为活性成分，加上药学上常用的辅料制备而成的制剂。所述制剂是注射制剂或口服制剂。经试验证明，ECH具备如下作用：(1)能显著降低体重和血糖水平；(2)显著降低24小时尿蛋白含量；(3)显著降低肾脏重量、血BUN和血Cr水平；(4)减少肾间质纤维化的含量以及减少系膜基质的沉积；(4)显著降低肾脏内α-SMA升高E-cadherin的表达水平；(5)显著降低肾脏内FN和CollagenⅣ表达水平。附图说明图1是db/m、db/db和db/db+ECH组小鼠的体重、血糖结果图；其中：A为小鼠体重结果图；B为空腹血糖水平统计图；图2是db/m、db/db、db/db+ECH组小鼠病理结果图；A图为HE染色图；B图为Masson染色图；C图为PAS染色图；D图为间质纤维化百分比柱状图；E图为系膜基质百分比。图3为db/m、db/db、db/db+ECH组小鼠肾脏内与上皮间质转化相关因子E-cadherin、α-SMA免疫组化及结果统计柱状图；A图为E-cadherin、α-SMA免疫组化镜下图；B图为E-cadherin免疫组化柱状统计图；C图为α-SMA免疫组化柱状统计图。图4为db/m、db/db、db/db+ECH组小鼠肾脏内反应间质纤维化的相关因子FN、CollagenⅣ的免疫组化及结果统计柱状图；A图为FN、CollagenⅣ的免疫组化镜下图；B图为FN免疫组化柱状统计图；C图为CollagenⅣ免疫组化柱状统计图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。小鼠和基因工程小鼠资源是目前疾病机制研究、基因功能研究、药物创制等领域最重要的动物模型之一，也是这些领域创新研究的必须条件。利用基因工程小鼠针对糖尿病肾病病理过程中的各个分子环节进行研究，对阐明糖尿病肾病发生发展过程中的分子机制，寻找糖尿病肾病治疗的有效药物具有重要的意义。本专利技术以遗传背景为C57BLKS/J的雄性db/db小鼠和db/m小鼠为实验对象，均给予普通饲料喂养，结果表明与db/m小鼠对比，db/db小鼠表现出明显的肥胖，其体重明显高于db/m小鼠，并且db/db小鼠空腹血糖，24小时尿蛋白明显高于对照组db/m小鼠。从小鼠肾脏HE、PAS以及Masson染色说明db/db组小鼠肾脏病变严重，肾小球体积增大，系膜基质增生、基地膜增厚，肾间质纤维组织增多，这表明db/db小鼠出现了糖尿病肾病的表现。而通过灌胃给予ECH喂养后发现ECH能显著降低db/db小鼠体重、空腹血糖以及24小时尿蛋白含量，同时db/db小鼠肾脏病理改变明显改善。这表明db/db小鼠产生糖尿病肾病的改变，ECH对糖尿病肾病具有保护作用。实验用动物及饲养实验动物种属，性别，周龄及来源：遗传背景为C57BLKS/J的db/m小鼠与db/db小鼠，雄性，8周龄，体重db/m为20-25g，db/db为40-48g。db/m与db/db小鼠购自南京大学-南京生物医药研究院(质量合格证号：db/db：32002100000734，db/m：32002100000735)。(22)动物饲养及环境条件：所有的实验小鼠饲养在武汉大学人民医院动物饲养中心SPF级动物房(许可证号：SYXK(鄂)2009-0027)。每12小时交替照明，温度24±2℃，湿度40％-70％，小鼠自由饮水进食。实验所用药物：松果菊苷(ECH)购买于上海融禾医药科技发展有限公司，货号(150623)【实施1】小鼠体重，血糖水平测定以及24h尿液收集与检测(1)小鼠空腹体重，眶静脉窦采血。1)体重检测①禁食：晚上10：00将待实验小鼠禁食(不禁水)，第二天上午8：00开始实验操作。②称重：分别在小鼠年龄的8周、10周、12周、14周、16周、18周称重，将一铁饭盒放在动态电子天平上，抓起小鼠，放入称量饭盒中，称量体重记录数据。2)腹腔注射戊巴比妥麻醉小鼠后眶静脉采血，分离血清。①麻醉：将戊巴比妥粉末用生理盐水配置成3％浓度，小鼠腹腔注射，0.1mL/10g麻醉小鼠。②常规抓取小鼠，置于采血台上，左手拇指和食指抓住鼠两耳之间的皮肤使鼠固定，并轻轻压迫颈部两侧，阻碍静脉回流，使眼球充分外突，提示眼眶后静脉丛充血。③右手持采血管，将尖端与小鼠面部成45°的夹角，沿内眦插入内眼入滑眼球后方，向眼底方向刺入，当感到有阻力时即旋转轻采血管以切开静丛，血液即流入采血管。④缓慢调整采血管的角度使之水平或稍向下倾斜，辅助者将0.5mLEP管置于采血管末端的下方收集血液，并在0.5mLEP管上标上耳标号。采血结束后，拔出采血管，放松左手，使用无菌纱布块轻轻压迫眼眶帮助止血。⑤分离血清：收集血液的EP管于室温下静置1-2h使血液自然凝固。4℃，4000rpm/min，离心30min，充分分离血清。用微量移液器分别吸取血清置无菌EP管中，对EP管进行标记本文档来自技高网...

【技术保护点】
松果菊苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途。

【技术特征摘要】
1.松果菊苷在制备治疗糖尿病肾病药物中的用途。2.一种治疗糖尿病肾病药物，其特征在于：它是以松果菊苷为活性成...

【专利技术属性】
技术研发人员：郝亚荣，邱波，唐凤娟，张雪，张祥，蔡江，
申请(专利权)人：武汉大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42