一种从枳实小果中提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，枳实小果经干燥、粉碎、渗漉提取。药渣用碱液提取，提取液调酸沉淀、洗涤，用70%乙醇溶解，结晶、重结晶后得到橙皮苷产品。取渗漉液过强酸性苯乙烯型阳离子柱、水洗，进大孔吸附树脂柱、水洗、20%低碳醇洗涤、70%低碳醇洗涤，取洗液浓缩，助析、结晶、重结晶，得到新橙皮苷产品。取渗漉液过大孔吸附树脂柱，再过强酸性苯乙烯型阳离子柱，再进大孔树脂柱，用氨水洗脱，结晶、重结晶，即为辛弗林产品。所有结晶和重结晶步骤都在5-10℃进行。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及植物提取领域，尤其是一种从枳实小果中提取黄酮的方法。
技术介绍
柑橘是芸香科柑橘属重要的植物，主要是利用其果肉而很少对效果和果皮进行综合利用，大多数被当作废物填埋处理。由于柑橘果、皮含有较多生物活性物质，因此对其的利用已经越来越广泛。橙皮苷(Hesperidin)是柑橘果皮中的天然黄酮类化合物，采用碱浸酸析法从脐橙中提取出的橙皮苷纯度为80.3%，得率为1.55%。新橙皮苷(Neohesperidin)是由橙皮素与新橙皮糖形成的糖苷，目前提取新橙皮苷的方法包括超声辅助提取法、索氏提取法、和水浴回流提取法。辛弗林(Synephrine)是枳实生物碱类物质的主要成分，辛弗林的含量随着柑橘果实的成熟而减少，因此一般选取未成熟的果实即落果来作为提取原料；辛弗林的提取方法有加热回流法、超声提取法和微波提取法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是提供一种高效从枳实小果和柑橘皮中同时提取分离橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，将枳实小果干燥、粉碎，渗漉提取，然后取药渣进行橙皮苷提取，取渗漉液进行新橙皮苷和辛弗林提取；得到橙皮苷含量可达95%，收率为4.0%以上；新橙皮苷提取物含量可达98%，收率为2.0%以上，辛弗林提取物含量可达90%，收率为2.5%以上。为了解决该技术问题，本专利具体实施步骤如下: 一、苦橙枳实小果前处理 收集枳实小果干燥、粉碎，过筛，置于提取罐中，在40-45°C，用35-50%乙醇水溶液，按照料液比为1: (10-20)的比例进行渗滴提取，渗滴提取10_12h ;然后添加0.01-0.1%的果胶酶，50 °C下搅拌30min，然后将温度调到70 °C，处理15_30min，将果胶酶杀灭；然后过滤，将药渣和滤液分离；药渣用于橙皮苷提取，滤液用于新橙皮苷和辛弗林的提取。所述过筛的筛网为10目、或者60目、或者100目； 所述渗漉提取可以进行3次。二、橙皮苷提取、分离、纯化 将上述药渣按料液比为1: (5-10)，用pH值为10.0-11.0碱液浸泡，提取0.5_lh ;所得提取液用HC1调至pH值为2.0-3.0，在5-10°C放置，沉淀；将沉淀用水洗涤，洗至中性，再用70%低碳醇溶解，用HC1调至pH值为4.0-5.0，在5_10°C放置，重结晶后洗涤、干燥即为橙皮苷产品。该产品中橙皮苷含量可达95.0%，橙皮苷收率为4.0%以上。所述碱液为Ca (0H) 2或者NaOH ； 所述低碳醇为甲醇或者乙醇。三、新橙皮苷提取、分离、纯化 取步骤一所述的滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，收集离子柱流出液，然后用水洗。将离子柱流出液和水洗液混合，进大孔吸附树脂柱，先用水洗，然后用20%低碳醇洗涤，再用70%低碳醇洗脱；取70%低碳醇洗脱液浓缩，在5-10°C放置，用浓缩液质量5.0%的比例添加(NH4)2S04/NaCl助析，得粗品；将粗品以料液比l:5g/mL的比例、用70%低碳醇溶解，在5-10°C放置，重结晶，所得晶体即为新橙皮苷产品。该产品中橙皮苷含量可达98.0%，橙皮苷收率为2.0%以上。在新橙皮苷粗品用70%低碳醇溶液溶解时，还可以边搅拌边加活性炭脱色，趁热抽滤，冷却后在重结晶； 所述强酸性苯乙烯型阳离子柱优选001X7阳离子柱； 所述大孔吸附树脂优选D101 ; 所述低碳醇优选甲醇或者乙醇。四、辛弗林的提取、分离、纯化 取步骤一所述的滤液，用HC1调至pH值为1.0-2.0，先过D101大孔树脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，进行浓缩；然后添加硅藻土进行抽滤，将抽滤得到的滤液加入到强酸性苯乙烯型阳离子柱，进柱量为2BV，以流速2BV/h放出流出液；再用2BV去离子水洗树脂柱，放出水洗液，往树脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脱，流速为lBV/h，收集氨水洗脱液，浓缩，用HC1调至pH值为2.0-3.0，再过D101大孔树脂柱，用1.5mol/L氨水洗脱，取洗脱液浓缩后，在5-10°C放置，析晶，得粗晶体；将粗晶体用盐酸溶解，再用1.5mol/L氨水调pH值，然后浓缩，再在5-10°C放置，重结晶，所得晶体即为辛弗林产品，该产品中辛弗林含量达90.0%以上，辛弗林收率达2.5%以上。所述强酸性苯乙烯型阳离子柱优选001X7阳离子柱； 所述大孔树脂优选D101 ; 所有结晶、重结晶都在5-10°C以下进行。所述的渗漉、提取、过滤、吸附分离、洗脱、结晶、重结晶都为已知技术。本专利技术具有下列优点和特性: 1、综合利用枳实小果资源 从枳实小果渗漉提取后的药渣中提取橙皮苷，滤液中提取新橙皮苷、辛弗林，实现了橙皮苷、新橙皮苷、辛弗林同步综合提取，枳实小果资源得到综合利用。2、组合技术新颖 通过本技术方案，将枳实小果渗漉提取后，从药渣中提取橙皮苷，从滤液中提取新橙皮苷、辛弗林，得到橙皮苷含量达95%以上，收率为4.0%以上；得到新橙皮苷提取物含量可达98%以上，收率为2.0%以上，辛弗林提取物含量可达90%以上，收率可达2.5%以上。尤其是新橙皮苷提取和辛弗林的高效提取，是利用渗漉提取滤液，新橙皮苷先采用阳离子层析柱，再用D101大孔树脂柱，然后采用20%低碳醇洗涤，再用70%低碳醇洗脱，取洗脱液浓缩，用(NH4) 2S04/NaCl助析，得粗晶；将粗晶再用70%低碳醇溶解，经重结晶得到产品。辛弗林是将渗漉提取滤液先过D101大孔树脂柱，然后过001X7阳离子柱，用氨水洗脱；用HC1调pH值，再过D101大孔树脂柱，用氨水洗脱，洗脱液浓缩、结晶，重结晶，即得辛弗林产品。所有结晶、重结晶步骤都是在5-10°C进行。这些技术特征组合在一起，新橙皮苷和辛弗林提取物在含量和收率2个指标上产生了意想不到的效果。这些结果是技术组合方案种各技术特点互相支持、共同作用才实现的，已知技术没有报道，也没有该组合技术方案的技术启示，不是简单的叠加，具有突出的实质性特点和显著的进步。【具体实施方式】以下所述实例详细地说明了本专利技术。实施例1 苦橙枳实小果前处理 将苦橙第三次生理落果的枳实小果作为提取原料，干燥，用高速多功能粉碎机粉碎，取粉碎物过10目的筛，准确称取粉碎物25.0g置于烧杯中，以料液比1:10g/mL加入250mL35%的乙醇水溶液，放入水浴锅中40°C下浸泡水浴提取12h，过滤。以0.05%的比例往提取液中加入0.125g果胶酶处理，50°C下搅拌30min，然后将水浴锅调至70 °C，处理15min，将果胶酶充分灭活。冷却，然后用纱布初步过滤，用双层滤纸抽滤，得到滤液和滤渣，滤渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷及辛弗林。橙皮苷提取 取上述滤渣，按料液比1:30加水，在30°C下边搅拌边加入1.75g Ca(0H)2，此时pH为10.6，搅拌提取lh后过滤；取滤液，加适量盐酸，调体系pH为3.0，在5-10°C静置12h ;析出晶体，抽滤，烘干得橙皮苷粗品。以料液比1:60g/mL加入甲醇，用NaOH溶液调体系pH为11.0，30°C下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为5.0，在5_10°C以下静置12h，重结晶，得橙皮苷晶体，橙皮苷的含量为95.70%，得率为4.16%ο新橙皮苷提取 取前处理滤液过001X7强酸性苯乙本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种从柑橘皮、果中提取橙皮苷、新橙皮苷和辛弗林的方法，其特征在于：采用如下工艺步骤：A 苦橙枳实小果前处理以苦橙第三次生理落果的枳实小果为原料，经干燥、粉碎，过筛，用35‑50%乙醇水溶液，在40‑45℃进行渗漉提取10‑12h；按0.01%‑0.1%的比例添加入果胶酶，40‑50℃下搅拌30min，然后调温度至70℃，处理15‑30min；然后过滤，得到的药渣用于提取橙皮苷，滤液用于提取新橙皮苷和辛弗林；B 橙皮苷提取、分离、纯化用pH值为10.0‑11.0 的NaOH或者Ca（OH）2浸泡药渣，提取0.5‑1h；过滤，得提取液；所得提取液用HCl调至pH值为2.0‑3.0，在5‑10℃放置，沉淀；将沉淀物用水洗至中性，再用70%乙醇溶解，在5‑10℃放置，结晶；得到橙皮苷粗品；将橙皮苷粗品以料液比1:60g/mL的比例加入70%的低碳醇，用稀NaOH溶液调体系pH为10.0‑11.0，30℃下反应30min，常压过滤，再用稀盐酸调滤液pH为4.0‑5.0，在5‑10℃静置12h，重结晶，即得橙皮苷产品；C 新橙皮苷提取、分离、纯化取步骤A所述滤液过强酸性苯乙烯型阳离子柱，用水洗；将阳离子柱流出液和水洗液混合，进D101大孔吸附树脂；经水洗后，先用20%低碳醇洗涤，再用70%低碳醇洗脱；将70%低碳醇洗脱液浓缩，在5‑10℃放置，按浓缩液5.0%的比例添加（NH4）2SO4/NaCl助析，得新橙皮苷粗品；将新橙皮苷粗品按料液比1:5g/mL的比例往烧杯中加入70%低碳醇，加热、过滤，冷却，在5‑10℃以下重结晶，得到新橙皮苷；D辛弗林的提取、分离、纯化取步骤A所述的滤液，用HCl调至pH值为1.0，过D101大孔树脂柱，水洗，收集流出液和水洗液，进行浓缩；添加硅藻土过滤，将滤液过001×7阳离子柱，进柱量为2BV，以流速2BV/h放出流出液；再用2BV去离子水洗树脂柱，放出水洗液，往树脂中加入1.5BV 1.5mol/L氨水洗脱，流速为1BV/h，收集氨水洗脱液，浓缩，用HCl调至pH值为2.0‑3.0，再过D101大孔树脂柱，用1.5mol/L氨水洗脱，取洗脱液浓缩后，在5‑10℃放置，结晶，得辛弗林粗品；将辛弗林粗品用pH为2.0‑3.0的HCl溶解，再用氨水调pH值为10.0‑11.0，然后浓缩，冷却，在5‑10℃重结晶，所得晶体即为辛弗林。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：李桂银，周治德，谢冬养，赖廷晓，应启实，卢照凯，杨涛，刘雯，叶航，
申请(专利权)人：桂林三宝药业有限公司，李桂银，
类型：发明
国别省市：广西;45
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