一种丙型肝炎病毒三价亚单位疫苗的制备及应用制造技术

本发明专利技术提供了一种丙型肝炎病毒三价亚单位疫苗的制备及应用。将分别来源于HCV病毒Con1、H77、和S52病毒株的sE2蛋白混合制备的三价疫苗(Con1/H77/S52三价苗)，能够大幅提升小鼠对多种株型病毒的免疫能力，实验结果表明，与来源于Con1、H77或S52病毒株的单价苗相比，Con1/H77/S52三价苗极大地提升了针对HCV主要流行亚型病毒的中和水平。

Preparation and application of a trivalent subunit vaccine of hepatitis C virus

【技术实现步骤摘要】
一种丙型肝炎病毒三价亚单位疫苗的制备及应用
本专利技术属于生物
，具体地说，本专利技术涉及一种丙型肝炎病毒三价亚单位疫苗的制备及应用。
技术介绍
丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus,HCV)是危害全球公共健康的严重问题。目前全球已经有超过1.7亿HCV慢性感染病例，每年还有3到4百万新发病例。据统计，80％的HCV感染者会转为慢性感染，其中25％可能发展为肝硬化，其中又有20％可能发展为肝癌。丙型肝炎病毒是黄病毒科肝炎病毒属的单链正义RNA病毒，基因组约9.6kbp。HCV基因组共编码10个病毒蛋白，包括核蛋白Core、包膜糖蛋白E1和E2在内的结构蛋白，以及包括P7,NS2,NS3,NS4A,NS4B,NS5A和NS5B在内的非结构蛋白。丙型肝炎的传统治疗手段主要为利巴韦林合并干扰素治疗，该方法副作用较大、持续病毒学应答(sustainedvirologicalresponse,SVR)不高且存在显著的型间和人群间差异。2014年，随着多种针对HCV的新一代抗病毒药物(direct-actingantiviralagents,DAA)在国外上市，丙型肝炎治疗方法发生了革命性的进步，新的DAA疗法将丙型肝炎的SVR提高到90％以上，让人们看到了根除HCV的希望。但DAA的上市并不意味着HCV的彻底根除。首先，昂贵的价格极大限制了这些DAA在中低收入国家的使用、即使在发达国家的使用也可能被限制在特定人群中。其次，这些DAA多作用于非结构蛋白NS3/4A和NS5A上的固定位点，考虑到HCV复制中的高突变率，存在出现耐药性突变病毒的可能性。第三，DAA并不能排除治愈后再感染的可能性，对于高暴露、高危人群仍缺乏有效的长期保护手段。另外，这些DAA的临床数据多来源特定群体(如无肝纤维化的中年白人男性)，在许多复杂情况下(如3型感染、纤维化等肝代偿性疾病、肝移植、肾衰竭等)的清除效果还不明确，对于儿童和孕妇的作用效果也缺乏报道；有报道甚至观察到采用无干扰素DAA疗法的HCV相关肝癌手术病人存在较高的早期癌症复发率。最后，由于起病隐匿、发病症状不明显，丙型肝炎存在着“认知率低、就诊率低、治疗率低”的特点。据估计，在中国HCV的就诊率仅为1.6％-10％左右，相当部分的病人觉察到症状而就诊时已经发展到肝硬化甚至肝癌阶段。这意味着大量晚期阶段才被发现的HCV病例仍然无法治愈，HCV慢性感染及其所引发的肝硬化和肝癌等终身疾病仍是公共卫生领域的巨大负担。因此，尽快研制安全有效的HCV预防性疫苗对于控制和消除HCV感染，减轻HCV这一全球性的长期公共卫生负担具有不可忽视的意义。由于该病毒存在基因序列的高度变异性、糖基化漂移等免疫逃逸特质，目前尚无针对HCV的有效疫苗。但临床数据显示在高慢性化率之外，仍有20-25％的病人可通过早期产生的中和抗体及T细胞免疫反应自发地清除HCV病毒；另一些证据显示在黑猩猩和人身上存在的保护性免疫记忆能大量降低二次感染的病毒载量以及肝脏炎症反应等病理现象。这表明，感染早期的中和抗体产生对于抵抗和消除HCV的感染至关重要，也为预防性HCV疫苗的研究提供了理论基础和依据。国际上已有的HCV候选疫苗主要分为预防性与治疗性两种。预防性疫苗多在结构蛋白的基础上设计，以诱导高滴度的广谱中和抗体、中和入侵的HCV病毒为主要目的。而治疗性疫苗多在非结构蛋白的基础上设计，主要以诱导多功能T细胞反应、清除已存在的病毒感染为目的。目前已有多种HCV候选疫苗处于研发阶段，但进入临床试验的疫苗仅有少数，如预防性疫苗E1/E2重组蛋白联合MF59佐剂(CHO细胞表达)，治疗性疫苗DNA疫苗ChronVac-C、人重组腺病毒疫苗Ad6NS、黑猩猩重组腺病毒疫苗AdCh3NS和重组麻疹病毒MVA-NS。在预防性疫苗的研发中，疫苗保护的广谱性是一个极为重要问题。HCV现有7种基因型，型间序列存在31％－34％的差异，进一步可分为100个左右的亚型。据统计1、2型流行于亚洲，欧洲，拉丁美洲等世界大部分地区，3型主要流行于南亚、澳洲和欧洲，4型流行于中东和中北非地区，5流行于南非，6型流行于东南半岛。中国HCV流行型以1b，2a，2b及3a、6a等型较为常见，其中又以1b型为主，2a型次之。然而，目前绝大部分疫苗研究针对的都是北美主要流行的1a基因型，对于中国HCV流行株的保护性难以保证。中国HCV疫苗研发工作则开展较慢，至今尚未有疫苗开展临床试验。因此，本领域迫切需要开发针对中国HCV流行株的HCV疫苗及其应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种丙型肝炎病毒三价亚单位疫苗的制备及应用。在本专利技术的第一方面，提供了一种疫苗组合物，所述疫苗组合物包括：第一组分，所述第一组分为HCV病毒1b型的sE2蛋白或其衍生序列。在另一优选例中，所述疫苗组合物还包括：第二组分，所述第二组分为HCV病毒1a型的sE2蛋白或其衍生序列。在另一优选例中，所述疫苗组合物还包括：第三组分，所述第三组分为HCV病毒3a型的sE2蛋白或其衍生序列。在另一优选例中，所述HCV病毒1b型为Con1病毒株。在另一优选例中，所述HCV病毒1a型为H77病毒株。在另一优选例中，所述HCV病毒3a型为S52病毒株。在另一优选例中，所述疫苗组合物中，第一组分：第二组分：第三组分的重量比约为1～5：1～5：1～5。在另一优选例中，所述疫苗组合物中，第一组分：第二组分：第三组分的重量比约为1～3：1～3：1～3。在另一优选例中，所述疫苗组合物中，第一组分：第二组分：第三组分的重量比约为1～2：1～2：1～2。在另一优选例中，所述疫苗组合物中，第一组分：第二组分：第三组分的重量比约为1：1：1。在另一优选例中，所述疫苗组合物中还包括药学上或免疫学上可接受的赋形剂或佐剂。在另一优选例中，所述第一组分选自下组：(A)具有SEQIDNO:1所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQIDNO:1所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽，且所述多肽具有诱导机体产生抗HCVsE2蛋白抗体的能力；(C)将SEQIDNO:1中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留诱导机体产生抗HCVsE2蛋白抗体能力的衍生多肽。在另一优选例中，所述第二组分选自下组：(A)具有SEQIDNO:2所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQIDNO:2所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽，且所述多肽具有诱导机体产生抗HCVsE2蛋白抗体的能力；(C)将SEQIDNO:2中所示氨基酸序列经过1-5个氨基酸残基的取代、缺失或添加而形成的，且保留诱导机体产生抗HCVsE2蛋白抗体能力的衍生多肽。在另一优选例中，所述第三组分选自下组：(A)具有SEQIDNO:3所示氨基酸序列的多肽；(B)具有与SEQIDNO:3所示氨基酸序列≥80％同源性(优选地，≥90％的同源性；等优选地≥95％的同源性；最优选地，≥97％的同源性)的多肽，且所述多肽具有诱导机体产生抗HCVsE2蛋白抗体的能力；(C)将SEQIDNO:3中所示氨基酸序列本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括：第一组分，所述第一组分为HCV病毒1b型的sE2蛋白或其衍生序列。

【技术特征摘要】
1.一种疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物包括：第一组分，所述第一组分为HCV病毒1b型的sE2蛋白或其衍生序列。2.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物还包括：第二组分，所述第二组分为HCV病毒1a型的sE2蛋白或其衍生序列。3.如权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述疫苗组合物还包括：第三组分，所述第三组分为HCV病毒3a型的sE2蛋白或其衍生序列。4.如权利要求1所述的疫苗组合物，其特征在于，所述HCV病毒1b型为Con1病毒株。5.如权利要求2所述的疫苗组合物，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟劲，黄忠，颜雨，王雪松，李大鹏，
申请(专利权)人：中国科学院上海巴斯德研究所，
类型：发明
国别省市：上海,31