ALR多肽及其应用制造技术

本发明专利技术涉及肝再生增强因子（ＡＬＲ）多肽。本发明专利技术也涉及这些多肽的应用，特别是用于治疗疾病状态。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肝再生增强因子(ALR)多肽。本专利技术也涉及这些多肽的应用，特别是用于治疗疾病状态。
技术介绍
已知肝脏具有惊人的再生能力，肝生长和再生需要多种特异性和非特异性的激素以及其它生长因子。非特异性肝刺激物包括胰岛素、表皮生长因子(EGF)、肝细胞生长因子(HGF)、胰岛素样生长因子I(IGF-1)和转化生长因子(TGF-α)。一种肝特异性肝营养(hepatotrophic)生长因子是肝再生增强因子(augmenter of liver regeneration or ALR)(也称为肝细胞生长素(HPO))。起初，ALR被鉴定并从大鼠肝刺激物质(HSS)中纯化得到(Hagiya等.，1994)。在体内和体外研究中，已显示ALR能增加40％肝部分切除术(PH)或门腔静脉分流术(PCS)所诱导的增殖反应。使用埃克瘘(Eck fistula)试验获得了类似的结果，其中肝门内注射ALR所激发的增殖反应胜于门腔静脉分流术所引起的轻度肝细胞增生(Polimeno等.，1999)。ALR也能刺激体内肝细胞中DNA合成，且已发现其具有FAD-巯基氧化酶活性，类似于酵母同系物ERV1p，可提供ALR在线粒体基因表达中所起的作用。此外，已显示ALR特异性受体存在于所有正常和异常的肝细胞中，其是刺激肝细胞增殖所必需的(Wang等.，1997)。在相当长的一段时间内都很清楚，用于包括暴发性肝功能衰竭的肝病治疗的ALR所可能具有的临床含义(Francavilla等.，1994)。此外，ALR似乎是一种具有重要生理特性的蛋白质，并不仅限于肝再生，其作用与存在于活性再生细胞中的细胞核和线粒体转录物的合成或稳定性有关，特别是与睾丸生殖细胞有关(Giorda等，1996)。已从人胎儿肝文库中分离并克隆出编码人ALR的cDNA(Giorda等.，1996；Yang等.，1997a)。该cDNA编码的ALR与大鼠ALR具有87％氨基酸序列同一性，与酵母ERV具有42％氨基酸序列同一性。编码全长人ALR(hALR)的基因包括一个157个核苷酸的5’非翻译区、一个1570个核苷酸的编码区和一个86个核苷酸的3’非翻译区(Giorda等.，1996；Cheng等.，2000)。HALR包含125个氨基酸，预计分子量为15.1kDa(见图1)。体外和体内研究已显示重组hALR能刺激肝细胞和肝细胞瘤细胞增殖，还能促进肝细胞的再生和损伤恢复(Yang等.，1997b). 业已显示在原核(E.coli)和真核(COS细胞和S.cerevisiae)细胞中重组hALR的表达具有与纯化的天然hALR相当的活性。Francavilla等。(美国专利号5,811,397)已报道了另一种人ALR基因(称为HPO-205)的克隆和表达，该基因编码205个氨基酸的蛋白质，具有与hALR类似的活性，但在N-末端包含额外的80个氨基酸。迄今为止，不同肝细胞生长因子的混合物已被用于治疗肝病。由于已表明在肝再生和恢复中hALR是一种重要的生长因子，因此特别需要开发hALR作为一种可行的治疗剂或药物。本专利技术是基于本专利技术人发现与其天然型相比，在hALR多肽的N和/或C-末端存在额外的组氨酸残基能改善hALR的功能特性、特异性和生物活性。这些额外的残基也对重组hALR的生产特性产生有利的改善，由此开启了用于治疗剂或药物开发的方法。
技术实现思路
根据本专利技术的第一方面，提供了一种纯化的ALR多肽，其中所述多肽包括位于N和/或C末端的一个或多个组氨酸残基。在一个实施方案中，所述多肽包括位于N和/或C末端的3-18个组氨酸残基。所述多肽可包括位于N和/或C末端的12个组氨酸残基。在一个实施方案中，所述多肽包括位于C末端的12个组氨酸残基。所述多肽可包含如SEQ ID NO5所示的氨基酸序列，和/或为如SEQ ID NO6所示的核苷酸序列所编码。在另一个实施方案中，所述多肽可包括位于N和/或C末端的18个组氨酸残基，例如位于C末端的18个组氨酸残基。所述多肽可包含如SEQ ID NO7所示的氨基酸序列，和/或为如SEQ ID NO8所示的核苷酸序列所编码。还在另一个实施方案中，所述多肽可包括位于C末端的6个组氨酸残基，位于N末端的6个组氨酸残基和6个位于C末端的组氨酸残基，或位于N末端的3个组氨酸残基和位于C末端的9个组氨酸残基。根据本专利技术的第二方面，提供了一种纯化的ALR多肽，包含如SEQID NOs1或3所示氨基酸序列，或一种包括对如SEQ ID NOs1或3所示序列进行一个或多个取代、缺失和/或添加的氨基酸序列，其中所述ALR多肽通过在N和/或C末端添加一个或多个组氨酸得到修饰。根据本专利技术的第三方面，提供了一种编码第一或第二方面的多肽的分离的核酸分子。所述核酸分子可包含如SEQ ID NO2或4所示的核苷酸序列，并包括位于5’和/或3’末端的一个或多个组氨酸编码密码子。所述核酸分子可包括位于3’末端的12个组氨酸编码密码子。所述核酸分子可包括位于3’末端的18个组氨酸编码密码子。根据本专利技术的第四方面，提供了一种包含第三方面的核酸的载体。任选地，所述核酸能可操作地连接到一个或多个调节序列上。根据本专利技术的第五方面，提供了一种包含第三方面的核酸或第四方面的载体的宿主细胞。根据本专利技术的第六方面，提供了一种表达第一或第二方面的多肽的宿主细胞。根据本专利技术的第七方面，提供了一种选择性结合第一或第二方面的多肽的抗体。根据本专利技术的第八方面，提供了一种用于治疗患者的方法，包括给予所述患者治疗有效量的第一或第二方面的ALR多肽、第三方面的核酸、第四方面的载体、第五或第六方面的宿主细胞或第七方面的抗体的步骤。根据本专利技术的第九方面，提供了一种用于治疗或预防患者肝病的方法，其中所述方法包括给予所述患者治疗有效量的第一或第二方面的ALR多肽、第三方面的核酸、第四方面的载体或第五或第六方面的宿主细胞。所述肝病可与肝衰竭相关。所述肝病可选自包含对乙酰氨基酚毒性(acetaminophentoxicity)、脂肪肝、肝硬化、病毒性肝炎、癌、黄疸、腹水、肝病性口臭、凝血失败(failure of coagulation)、纤维化、重度肝炎(包括急性肝炎、亚急性肝炎、慢性肝炎)、重度慢性肝炎、非重度肝炎或任何其它类型的肝损伤、肝衰竭或肝病。根据本专利技术的第十方面，提供了第一或第二方面的ALR多肽、第三方面的核酸、第四方面的载体或第五或第六方面的宿主细胞在制备用于治疗或预防肝病的药物中的应用。根据本专利技术的第十一方面，提供了一种用于刺激患者肝再生的方法，其中所述方法包含给予所述患者治疗有效量的第一或第二方面的ALR多肽、第三方面的核酸、第四方面的载体或第五或第六方面的宿主细胞。根据本专利技术的第十二方面，提供了一种用于刺激肝细胞增殖的方法，其中所述方法包括将一个或多个肝细胞暴露于治疗有效量的第一或第二方面的ALR多肽、第三方面的核酸、第四方面的载体或第五或第六方面的宿主细胞。根据本专利技术的第十三方面，提供了一种用于治疗或预防患者肝病的方法，其中所述病症与ALR升高的水平相关，且其中所述方法包括给予所述患者治疗有效量的第七方面的ALR抗体。根据本专利技术的第十四方面，提供了一种用于抑制肝细胞增殖的方法，其中所述方法包括本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纯化的ＡＬＲ多肽，其中所述多肽包括位于Ｎ和／或Ｃ末端的一个或多个组氨酸残基。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：梁润松，劳伟雄，叶卫农，
申请(专利权)人：中国生物科技药物开发有限公司，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]