The present invention discloses a method for separation and purification of rapamycin. The method comprises the following steps: (1) isolated from fermentation broth and mycelium; (2) the ultrasonic stirring processing to extract of mycelium, mycelium; (3) the fermentation and mycelium extract mixture, extraction, decolorization, filtration, then 90% to 95% ethanol treatment, dry to rapamycin the crude product; (4) silica gel column chromatography; (5) recrystallization, was purified by rapamycin. The invention can effectively improve the purity and yield of rapamycin, and the preparation cost is low.
【技术实现步骤摘要】
一种雷帕霉素的分离纯化方法
本专利技术属于分离纯化
,具体涉及一种雷帕霉素的分离纯化方法。
技术介绍
雷帕霉素(又名“西罗莫司”)是科学家于1975年首次从智利复活节岛的土壤中发现的一种由土壤链霉菌分泌的次生代谢物,其化学结构属于“三烯大环内酯类”化合物。是一种新型大环内酯类免疫抑制剂,为白色固体结晶,熔点为183-185℃,亲脂性,溶解于甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等有机溶剂,极微溶于水,几乎不溶于乙醚。雷帕霉素作为一种重要的免疫抑制剂,在临床上具有广泛的应用,包括用于治疗器官移植的排斥反应、可用于治疗阿尔茨海默症等,但由于其在制备过程中提取工艺复杂、收率低等,导致其产量低,价格昂贵。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足,本专利技术提供一种雷帕霉素的分离纯化方法,可在分离纯化阶段提升雷帕霉素的收率和纯度。一种雷帕霉素的分离纯化方法,包括以下步骤:(1)收集含有雷帕霉素的发酵液,过滤,分离得到发酵液和菌丝体;(2)向菌丝体中加入为其3~5倍体积的丙酮,在20~30Hz、400~800r/min条件下搅拌1~2h,过滤,得菌丝体提取液;(3)将菌丝体提取液和发酵液胺体积比为1:1的比例混合,然后加入混合液2~3倍体积的乙酸乙酯-丙酮混合物,萃取2~3次,每次3~5h,合并萃取液,向合并后的萃取液中加入活性炭,搅拌30~40min,过滤,减压浓缩,然后溶解,再加入溶解液1~2倍体积的90%~95%乙醇,搅拌均匀,静置30~50min,过滤,将滤液蒸干,得雷帕霉素粗品;其中,乙酸乙酯和丙酮的体积比为2~3.8:1~2.5;活性炭在萃取液中的浓度为0.05~0.1 ...
【技术保护点】
一种雷帕霉素的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)收集含有雷帕霉素的发酵液,过滤,分离得到发酵液和菌丝体;(2)向菌丝体中加入为其3~5倍体积的丙酮,在20~30Hz、400~800r/min条件下搅拌1~2h,过滤,得菌丝体提取液;(3)将菌丝体提取液和发酵液胺体积比为1:1的比例混合,然后加入混合液2~3倍体积的乙酸乙酯‑丙酮混合物,萃取2~3次,每次3~5h,合并萃取液,向合并后的萃取液中加入活性炭,搅拌30~40min,过滤,减压浓缩,然后溶解,再加入溶解液1~2倍体积的90%~95%乙醇,搅拌均匀,静置30~50min,过滤,将滤液蒸干,得雷帕霉素粗品;其中,乙酸乙酯和丙酮的体积比为2~3.8:1~2.5;活性炭在萃取液中的浓度为0.05~0.12g/L;(4)用乙酸乙酯‑丙酮混合物溶解雷帕霉素粗品,并将其加入硅胶层析柱中,用乙酸乙酯‑丙酮混合物作为流动相进行梯度洗脱,每次洗脱2~3个柱体积,分段收集洗脱液,经薄层层析检测后,合并馏分;其中,乙酸乙酯和丙酮的体积比为1~2:0~20;(5)蒸干浓缩合并后的馏分,乙醇溶解,再用乙醚重结晶2~3次,得分离纯化后的雷帕霉素 ...
【技术特征摘要】
1.一种雷帕霉素的分离纯化方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)收集含有雷帕霉素的发酵液,过滤,分离得到发酵液和菌丝体;(2)向菌丝体中加入为其3~5倍体积的丙酮,在20~30Hz、400~800r/min条件下搅拌1~2h,过滤,得菌丝体提取液;(3)将菌丝体提取液和发酵液胺体积比为1:1的比例混合,然后加入混合液2~3倍体积的乙酸乙酯-丙酮混合物,萃取2~3次,每次3~5h,合并萃取液,向合并后的萃取液中加入活性炭,搅拌30~40min,过滤,减压浓缩,然后溶解,再加入溶解液1~2倍体积的90%~95%乙醇,搅拌均匀,静置30~50min,过滤,将滤液蒸干,得雷帕霉素粗品;其中,乙酸乙酯和丙酮的体积比为2~3.8:1~2.5;活性炭在萃取液中的浓度为0.05~0.12g/L;(4)用乙酸乙酯-丙酮混合物溶解雷帕霉素粗品,并将其加入硅胶层析柱中,用乙酸乙酯-丙酮混合...
【专利技术属性】
技术研发人员:贺正全,田单,黄燕,
申请(专利权)人:四川摩尔生物制药有限公司,
类型:发明
国别省市:四川,51
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