一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法技术

本发明专利技术提供了一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法，其采用冷冻破壁，有机溶剂加热浸提冷冻破壁处理后的菌丝体，及对西罗莫司粗品进行动态轴向高压层析柱进行分离，洗脱剂梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液进行浓缩后的得浓缩液，并采用两次有机溶剂溶解结晶得到西罗莫司。本发明专利技术所揭示的一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法，降低了从发酵液中分离并纯化西罗莫司的生产成本，避免了两次硅胶柱层析，从而简化了西罗莫司的纯化工艺，大大降低了柱损耗液大等缺陷，因此比较适合于工业化量产。

【技术实现步骤摘要】
一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法
本专利技术涉及生物制药
，尤其涉及一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法。
技术介绍
西罗莫司(Sirolimus)也称雷帕霉素(Rapamycin)，是1975年由Veniza等分离得到的吸水链霉菌所产的大环内脂类抗生素。经过多年的研究，西罗莫司现已开发成为临床使用的强效免疫抑制。同时以西罗莫司为前体，化学修饰合成的一些结构新颖衍生物，被发现在免疫抑制、抗癌、抗帕金森综合征与艾滋病等方面上，具有新的治疗作用，其中其合成物Temsirolimus、Everolimus、AP23573已作为抗肿瘤靶向新药物进行临床研究，西罗莫司在医药应用领域具有广泛前景。杨国新等在《海峡药学》(2007年，第19卷第17期，25-26页)文献中公开：发酵液经离心后得到菌丝体，菌丝体用两倍量体积的95％酒精分别浸泡2次，离心弃菌丝渣，合并酒精浸泡液，减压浓缩去除酒精。残留液用等体积的乙酸乙酯分别萃取2次，合并乙酸乙酯层，并用饱和NaCl溶液洗涤1次，经无水Na2SO4干燥1h后，过滤，减压浓缩除去乙酸乙酯得上柱物。上柱物溶于适当体积的洗脱剂(乙酯-石油醚洗脱系统本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向西罗莫司发酵液中加入助滤剂进行搅拌30～45分钟后，板框过滤收集菌丝体；(2)将菌丝体置于冷冻环境中冷冻破壁3～5小时；(3)使用有机溶剂加热浸提冷冻破壁处理后的菌丝体1～2次，每次浸提4～6小时，过滤合并浸提液，于‑0.06MPa～0.1MPa的条件下减压浓缩后得到浓缩液；(4)对步骤(3)所得的浓缩液使用非极性大孔树脂吸附，洗脱剂梯度洗脱，收集洗脱液；(5)将洗脱液转移至浓缩罐中，并向浓缩罐中加入有机溶剂进行萃取，收集萃取液；(6)向萃取液中加入活性炭，搅拌30～60分钟后过滤并收集过滤液；(7)将过滤液进行减压浓缩，...

【技术特征摘要】
1.一种从发酵液中分离提纯西罗莫司的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)向西罗莫司发酵液中加入助滤剂进行搅拌30～45分钟后，板框过滤收集菌丝体；(2)将菌丝体置于冷冻环境中冷冻破壁3～5小时；(3)使用有机溶剂加热浸提冷冻破壁处理后的菌丝体1～2次，每次浸提4～6小时，过滤合并浸提液，于-0.06MPa～0.1MPa的条件下减压浓缩后得到浓缩液；(4)对步骤(3)所得的浓缩液使用非极性大孔树脂吸附，洗脱剂梯度洗脱，收集洗脱液；(5)将洗脱液转移至浓缩罐中，并向浓缩罐中加入有机溶剂进行萃取，收集萃取液；(6)向萃取液中加入活性炭，搅拌30～60分钟后过滤并收集过滤液；(7)将过滤液进行减压浓缩，直至蒸出的滤液不含有机溶剂，收集浓缩液；(8)对步骤(7)所得的浓缩液使用有机溶剂溶解，充分搅拌后在低温条件下吸晶，得吸晶液，对吸晶液过滤后得到西罗莫司粗品；(9)对西罗莫司粗品进行动态轴向高压层析柱进行分离，洗脱剂梯度洗脱，收集洗脱液，洗脱液进行浓缩后的得浓缩液；(10)对步骤(9)所得的浓缩液使用有机溶剂溶解，结晶得到西罗莫司半成品；(11)对步骤(10)所得西罗莫司半成品使用有机溶剂溶解，结晶得到西罗莫司成品。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙醇或者丙酮中的一种或者两种以上任意比例的混合物；所述步骤(5)...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵永俊，付静，郑缘，游云龙，金丹甜，徐新冬，吴东奇，王同意，
申请(专利权)人：无锡福祈制药有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32