IL-1β结合抗体及其片段制造技术

ＩＬ－１β结合抗体或其ＩＬ－１β结合片段，其含有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２氨基酸序列和相关的核酸、载体、细胞核组合物及使用它们用于治疗疾病的方法，以及制备亲和力成熟的ＩＬ－１β结合多肽的方法。提供了ＩＬ－１β结合抗体或其ＩＬ－１β结合片段，其具有期望的亲和力和效力。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL-1 (3结合抗体及其片段对相关申请的交叉引用本申请要求2005年6月21日提交的美国临时申请No.60/692,830的优先 权，这里引入其内容作为参考。 专利
本专利技术涉及IL-1 P结合抗体并包括其片段，编码这些抗体的核酸，以及包 含所述抗体或核酸的载体、细胞和组合物，以及它们的应用。 专利技术背景细胞因子的白介素-1 (IL-1)家族已经涉及疾病状态例如类风湿性关节炎 (RA)、骨关节炎、克罗恩病(Crohn's disease )、溃疡性结肠炎(UC)、败血 性休克、慢性阻塞性肺部疾病(COPD)、哮喘、移植物抗宿主疾病、动脉粥 样硬化、成人T细胞性白血病、多发性骨髓瘤、多发性硬化症、中风以及阿 尔茨海默病。IL-1家族成员包括IL-lot、 IL-1 (3和IL-lRa。尽管与它们结合IL-1 受体(IL-1R1和IL-1R2)的能力有关，但这些细胞因子的每一种是由不同的 基因所表达的，并且具有不同的一级氨基酸序列。而且，这些细胞因子的生理 学活性可以被区分。破坏IL-1受体信号传导的化合物已经被作为治疗药物进行研究以治疗 IL-1介导的疾病。这些化合物包括重组IL-1 Ra ( Amgen Inc. ， Thousand Oaks, CA)和IL-1受体"陷阱(trap)"肽(Regeneron Inc., Tarrytown, NY)。结合 IL-1细胞因子的动物来源单克隆抗体也已经被研究。然而，由于其免疫原性， 因此它们的临床价值是有限的。例如，已知被给药小鼠单克隆抗体的人类受试 者会产生人抗小鼠抗体(HAMA )。已经报道HAMA会降低单克隆抗体治疗的 效率，并产生负面反应包括对肾脏的损伤。其它的IL-1 p抗体受到它们的结合 亲和力和/或它们效价(potency)的限制。因此，需要其它能够阻断IL-1受体 信号传导的化合物。本专利技术提供了这类化合物，以及制备和应用这些化合物的 方法。简要概述本专利技术提供了 IL-1 P结合抗体或其IL-1 p结合片段，其包含SEQIDNO:2的氨基S吏序列。这里还4是供了编码所述抗体或抗体片段的核酸，以及包含所 述核酸的载体，包含所述核酸或载体的细胞，以及包含所述抗体、核酸或载体 的组合冲勿。本专利技术还提供了治疗或预防哺乳动物中疾病的方法，其包括为需要治疗的 哺乳动物给药有效量的本专利技术抗体或抗体片段、核酸或载体，这样在哺乳动物 中疾病得到了治疗或者预防。本专利技术提供了一种制备亲和力成熟的IL-1 (3结合多肽的方法，其包括(a) 提供第一核酸和第二核酸，其中所述第一核酸包含编码IL-1 (3结合多肽的核酸 序列，所述IL-1 P结合多肽包含SEQIDNO: 1至SEQ ID NO: 26中任一项 的氨基酸序列，其中所述第二核酸包括与第一核酸序列至少有一个核苷酸不同 的核酸序列；(b)进行核酸混编(shuffling)以提供两种或者多种突变的核酸； (c)选择编码突变的核酸，其编码的多肽(i)以比第一核酸所编码的多肽高 的亲和力结合IL-1P, (ii)对于IL-l P具有高于IL-la的选择性，所述选择性 高于第一核酸所编码的多肽对IL-1 P的选择性，(iii)对于IL-1 P具有比第一 核酸所编码的多肽低的平衡结合解离常数(KD),或者(iv)抑制动物中IL-1 P诱导的血清IL-6表达达到高于第一核酸所编码的多肽高的程度；以及(d) 表达所选择的突变核酸，这样制备了亲和力成熟的IL-1 P结合多肽。本专利技术提供了新型的IL-1 P结合抗体或其IL-1 P结合片段，其以低于3pM 的解离常数结合到人IL-l (3 ,可选大约2pM或更少，优选大约lpM或更少。 这些高亲和力抗体祐:设计能够用于各种治疗或者预防IL-1相关的疾病或病症 的方法。可选地，或者另外地，所述IL-lp结合抗体或者IL-ip结合片段结合 到IL-1卩抗原决定簇上，这样所结合的抗体或片段基本上不会防止IL-l卩结合 到I型IL-1受体上。可选地，或者另外地，所述IL-1(3结合抗体或者IL-1卩结 合片段结合到与这里所描述的示例性抗体的一种或者多种基本上相同的抗原 决定簇上，例如被指定为AB7的抗体，其包含重链可变区。可选地，或者另 外地，所述IL-1卩结合抗体或者IL-1卩结合片段与具有SEQIDNO: 11轻链可 变区以及SEQIDNO: 15重链可变区的抗体竟争结合。可选地，或者另外地，本专利技术包括结合到包含在序列ESVDPKNYPKKKMEKRFVFNKIE (SEQ ID NO:36)中的抗原决定簇的IL-1卩结合抗体或者IL-1(3结合片段。典型的IL-1(3 结合抗体包括这里^皮指定为AB5和AB7的抗体。本专利技术还提供了 IL-1结合抗体或其IL-1卩结合片段，其具有小于3pM的 解离常数，可选大约lpM或者更低，可选这里所公开的其它解离常数中的任 何一种，并且其包含重链可变区，其中所述重链可变区包含下列氨基酸序列中 的一种氨基酸序列SEQIDNO: 12、 SEQIDNO: 13、 SEQIDNO: 21、 SEQ ID NO: 23或SEQ ID NO: 24，或者可选地氨基酸序列SEQ IDNO: 12、 SEQ IDNO: 13或SEQ ID NO: 21,或者可选地氨基酸序列SEQ ID NO: 13或SEQ IDNO: 21，或者可选地氨基酸序列SEQ IDNO: 8、 SEQ ID NO: 14或SEQ IDNO: 15，或者可选地氨基酸序列SEQIDNO: 8或SEQ ID NO: 15。所述 IL-ip结合抗体或IL-1(3结合片段还可以包含轻链可变区，所述轻链可变区包 含氨基醋列SEQIDNO: 9、 SEQIDNO: IO或SEQIDNO: 11。作为本专利技术的另一个实施方式，提供了新型的IL-ip结合抗体或其IL-l卩 结合片段，其以在大约6pM至大约50pM之间的解离常数结合IL-ip，可选在 大约13pM至大约25pM之间，可选大约19pM,其中所述抗体或片段具有小 于0.5nM ( 500pM)的IC5G，可选在大约5pM至大约200pM之间，可选在大 约10pM至大约100pM之间，可选大约30pM，以抑制IL-1卩刺激的IL-6从人 成纤维细胞中释放。抑制IL-1卩刺激的IL-6从人成纤维细胞释放的ICso是指 抑制IL-1(3刺激的IL-6从人成纤维细胞释放的50%所需浓度。典型的抗体包 括这里指定为AB1的抗体。本专利技术还提供了 IL-1结合抗体或其IL-ip结合片段，其具有在大约6pM 至大约50pM之间的解离常数，并包含重链可变区，所述重链可变区包含氨基 酸序列SEQIDNO: 4、 SEQIDNO: 5或SEQ ID NO: 6之一，可选地氨基 酸序列SEQ ID NO: 4或SEQ ID NO: 5之一 ，可选地是SEQ ID NO: 4氨基 酸序列。设计在某些情况中，具有相对高解离常数的IL-1卩结合抗体或IL-l卩 结合片段可以是期望的，例如，用于治疗或者预防IL-1相关疾病或者病症的 某些期望相对4交4氐亲和力水平的方法。示例性抗体包括被指定为AB1、 AB2、 AB3、 AB4、 AB5、 AB6、 A本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种ＩＬ－１β结合抗体或其ＩＬ－１β结合片段，其包含ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２８的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：琳达马萨特，玛丽哈克弗伦兹乔，陈刚，阿诺德霍维茨，马里纳勒尔，
申请(专利权)人：佐马技术有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]