一种布瓦西坦中间体的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种布瓦西坦中间体的制备方法，以4‑正丙基‑2(5H)‑呋喃酮为底物，在重组烯还原酶和辅酶及辅酶再生系统的作用下，在温度为25℃‑30℃且pH值为6.0‑9.0的水相缓冲液中反应生成中间体(R)‑4‑正丙基二氢呋喃‑2‑酮。本发明专利技术通过采用特定的烯还原酶，解决了现有布瓦西坦中间体(R)‑4‑正丙基二氢呋喃‑2‑酮合成路线长、收率低、成本高和采用有毒危险试剂造成环保压力大的问题，具有重要的工业应用价值。

【技术实现步骤摘要】
一种布瓦西坦中间体的制备方法
本专利技术属于药物合成领域，具体涉及一种布瓦西坦中间体的制备方法。
技术介绍
布瓦西坦(brivaracetam)，化学名为(2S)-2-[(4R)-2-氧代-4-丙基-1-吡咯烷基]丁酰胺，其结构式如下：布瓦西坦是由比利时UCB最新开发的第三代抗癫痫药物，分别于2016年1月和2月获EMEA和FDA批准上市，用于治疗成人和16岁以上青少年癫痫患者的部分发作、伴有或不伴有继发性全身发作的辅助治疗。作为一种新型的SV2A高亲和性配体，布瓦西坦通过影响突触功能发挥抗癫痫作用，同时对电压依赖性Na离子通道也有一定的抑制作用，通过与钠离子通道相互作用，抑制兴奋性神经递质的释放，减少痫性放电的持续时间和频率，从而减少癫痫的发作。鉴于其良好的药理学活性、临床疗效及安全性，布瓦西坦有望成为继左乙拉西坦后又一重磅抗癫痫药物。(R)-4-正丙基二氢呋喃-2-酮是布瓦西坦合成过程中一个关键的中间体，BenoitM.(J.Med.Chem.2004,47,530-549)报道了如下反应路线：ArnaudSchülé等(Org.ProcessRes.Dev.,2016,20(9本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种布瓦西坦中间体的制备方法，以4‑正丙基‑2(5H)‑呋喃酮为底物，在烯还原酶和辅酶及辅酶再生系统的作用下进行反应，具体包括：步骤1：重组烯还原酶的制备：将已双酶切的表达载体pET‑30a与合成的目的基因用T4连接酶进行连接过夜，将10uL的连接产物加入100uL的Rosetta(DE3)感受态细胞中，冰上放置30min，42℃热激60sec，冰上放置2min，加入预热的0.45mL LB培养基220rpm 37℃培养1h，将200uL菌液加入含有100μg/mL的卡那霉素的LB平板上，37℃过夜培养12‑16，得到重组菌E.coli Rosseta；将含有烯还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接...

【技术特征摘要】
1.一种布瓦西坦中间体的制备方法，以4-正丙基-2(5H)-呋喃酮为底物，在烯还原酶和辅酶及辅酶再生系统的作用下进行反应，具体包括：步骤1：重组烯还原酶的制备：将已双酶切的表达载体pET-30a与合成的目的基因用T4连接酶进行连接过夜，将10uL的连接产物加入100uL的Rosetta(DE3)感受态细胞中，冰上放置30min，42℃热激60sec，冰上放置2min，加入预热的0.45mLLB培养基220rpm37℃培养1h，将200uL菌液加入含有100μg/mL的卡那霉素的LB平板上，37℃过夜培养12-16，得到重组菌E.coliRosseta；将含有烯还原酶基因的重组大肠杆菌单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基活化过夜；进行振荡培养OD600值达到0.6-0.8，再加入诱导剂继续培养过夜；离心收集细胞，用磷酸缓冲液悬浮细胞，将细胞悬浮液置于冰浴中，利用超声波破碎，最后进行离心处理；步骤2：将所述步骤1获得的重组烯还原酶、辅酶、辅酶再生系统和底物4-正丙基...

【专利技术属性】
技术研发人员：唐圆圆，艾忠良，刘朝，
申请(专利权)人：重庆迪维斯生物科技有限公司，唐圆圆，艾忠良，刘朝，
类型：发明
国别省市：重庆,50