一种能够快速准确判断药物对细胞基因扩增倍数影响的方法技术

本发明专利技术旨在提供一种能够快速准确判断药物对细胞基因扩增倍数影响的方法，该方法包括药物组实验，药物组实验中的实验数据处理步骤依下面次序进行计算：（1）待测基因相对18S的扩增数据△CT；（2）计算对照组平均扩增数；（3）药物组相对对照组的扩增数据△△CT；（4）待测基因倍数的变化；（5）当△△CT

A method that can quickly and accurately determine the effect of drugs on the multiplier of cell gene amplification

The invention aims at providing a rapid and accurate method to judge the drug effect on the cell gene amplification factor, the method includes drug experiments, the experimental data in the experiment of drug group were calculated according to the following steps: (1) the relative order of gene amplification of 18S CT data to be measured; (2) the control group average was calculated the number of; (3) drug group relative to the control group the amplified data delta CT; (4) to measure the variation of multiple genes; (5) when the delta CT

【技术实现步骤摘要】
一种能够快速准确判断药物对细胞基因扩增倍数影响的方法
自KaryB.Mullis在1988年专利技术了聚合酶链式反应(polymerasechainreaction，简称PCR)，并于1993年获得了诺贝尔化学奖以来，PCR技术发生了巨大的变化和进一步的改进,其中最重要的莫过于由MolecularProbes公司研发合成的荧光物质-sybregreen,其能结合双链脱氧核糖核酸（DNA）并发出强烈的荧光，从而开辟了实时定量PCR（real-timequantitativePCR，或qPCR)的时代。随着分子生物学的迅速发展，实时定量PCR已应用于各种细胞基因扩增情况的快速诊断。例如，采用基因工程手段来测定药物对细胞基因变化的影响（即通过在细胞培养基中添加一定浓度的药物，并依次提取细胞中的RNA、制备cDNA和实时定量PCR的方式来获得细胞中某一基因片段的扩增情况）。在定量PCR技术中，有一个很重要的概念—Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。现有的实时定量PCR的实验数据通常应用△△CT法进行处理本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够快速准确判断药物对细胞基因扩增倍数影响的方法，包括药物组实验、对照组实验和实验数据处理，其中，一、药物组实验药物组实验包括细胞培养、药物处理、提取RNA、制备cDNA和定量PCR测定5个步骤，其中，（1）细胞培养步骤：取细胞株于细胞培养液内进行培养，直至显微镜下观察细胞透明度大、折光性强、轮廓不清；（2）药物处理步骤：将细胞培养步骤得到的细胞株再次进行传代，当细胞株培养至长满细胞培养器皿生长空间的70%‑80%时, 换含有药物的新细胞培养液继续培养12‑24小时；（3）提取RNA步骤：对经药物处理步骤得到的细胞株进行裂解，提取细胞株中的RNA，得到RNA溶液，保存备用；（4）制备cDN...

【技术特征摘要】
2017.08.01 CN 20171064752391.一种能够快速准确判断药物对细胞基因扩增倍数影响的方法，包括药物组实验、对照组实验和实验数据处理，其中，一、药物组实验药物组实验包括细胞培养、药物处理、提取RNA、制备cDNA和定量PCR测定5个步骤，其中，（1）细胞培养步骤：取细胞株于细胞培养液内进行培养，直至显微镜下观察细胞透明度大、折光性强、轮廓不清；（2）药物处理步骤：将细胞培养步骤得到的细胞株再次进行传代，当细胞株培养至长满细胞培养器皿生长空间的70%-80%时,换含有药物的新细胞培养液继续培养12-24小时；（3）提取RNA步骤：对经药物处理步骤得到的细胞株进行裂解，提取细胞株中的RNA，得到RNA溶液，保存备用；（4）制备cDNA步骤：取RNA含量为1.0的RNA溶液作为模板，经逆转录得到逆转录终产物，即为cDNA溶液，并将cDNA溶液进行稀释，得到稀释后的cDNA溶液，保存备用；（5）定量PCR测定步骤：①待测基因定量PCR测定待测基因定量PCR：从稀释后的cDNA溶液中取5.0作为待测基因定量PCR的模板，以待测基因的上下游引物进行定量PCR，得到待测基因的扩增数；②内参照基因定量PCR测定内参照基因定量PCR：以18S核糖体RNA（简称“18S”）作为内参照基因，从稀释后的cDNA溶液中取5.0作为内参照基因定量PCR的模板，以18S核糖体RNA的上下游引物进行定量PCR，得到内参照基因扩增数；该定量PCR测定步骤重复进行n次，n≥2；二、对照组实验对照组实验与药物组实验同步开展，唯一的不同之处仅在于未进行药物处理，其提取RNA步骤为直接对经细胞培养步骤得到的细胞株进行裂解，提取细胞株中的RNA，得到RNA溶液，保存备用；三、实验数据处理实验数据依下面次序进行计算，①待测基因相对18S的扩增数据△CT对照组:待测基因扩增数(CT对)-18S平均扩增数(CT0对)=△CT对药物组:待测基因扩增数(CT药)-18S平均扩增数(CT0药)=△CT药②计算对照组平均扩增数（即平均△CT对）平均△CT对=（n次对照组定量PCR测定步骤对应△CT对之和）/n③药物组相对对照组的扩增数据△△CT对照组:△△CT对=单次对照组定量PCR测定步骤对应△CT对–平均△CT对药物组:△△CT药=单次药物组定量PCR测定步骤对应△CT药–平均△CT对④待测基因倍数的变化（2(-△△CT)，或=-2(△△CT)）对照组：△△CT对~0，基因倍数的变化=2-0=1或=-20=-1药物组：当△△CT...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵克维，陈友宁，
申请(专利权)人：福建海兴保健食品有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35