一种检测唾液中EGFR突变的纸芯片传感器的构建制造技术

本发明专利技术公开了一种基于纸芯片检测肺癌病人唾液中EGFR突变的方法。我们首先建立了一个微流控纸芯片电化学DNA生物传感器，通过分析纸电极表面DNA杂交反应可以检测非小细胞肺癌患者是否发生EGFR突变。电化学聚合的聚吡咯带正电荷，溶液中DNA的磷酸基团带负电荷，单链DNA与聚吡咯膜之间通过静电作用吸附到金电极表面，采用微分脉冲伏安法通过辣根过氧化物酶催化过氧化氢和亚甲基蓝的氧化还原反应。这项工作探讨了一种无创的电化学DNA检测方法，并为肺癌肿瘤标志物的检测提供了潜在的应用。

Construction of a paper chip sensor for detecting EGFR mutation in saliva

The present invention discloses a method for detecting EGFR mutation in saliva of lung cancer patients based on a paper chip. We first established a microfluidic paper chip electrochemical DNA biosensor. By analyzing the DNA hybridization reaction on paper electrodes, we could detect whether EGFR mutation occurred in patients with non-small cell lung cancer. The electrochemical polymerization of polypyrrole are positively charged phosphate groups of DNA in solution with negative charge, between single stranded DNA and polypyrrole films by electrostatic adsorption to the surface of the gold electrode, the reaction of hydrogen peroxide catalyzed by methylene blue and redox differential pulse voltammetry. This work explores a noninvasive electrochemical DNA detection method and provides a potential application for the detection of tumor markers in lung cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种检测唾液中EGFR突变的纸芯片传感器的构建
本专利技术涉及一种检测唾液中EGFR突变的纸芯片传感器的构建，属于电化学DNA检测

技术介绍
近几年来癌症发病率及死亡率呈现逐步上升的趋势，因此寻找快速、定量、灵敏的检测肿瘤标记物的方法在早期检测和治疗监控中非常重要。常见的临床诊断方法包括活体检查和血液抽样检查，而唾液中不仅含有各种蛋白质，还含有DNA、RNA、脂肪酸以及各种微生物等。研究发现，血液中的各种蛋白质成分同样存在于唾液中，唾液能反映出血液中各种蛋白质水平的变化。因此，我们构建的体系就通过唾液的检测来进行肺癌疾病的诊断。
技术实现思路
随着科技的快速发展，各种生物传感设备朝着简单化、小型化的方向发展，因此微流控纸质分析设备越来越多的受到大家的关注。纸芯片具有廉价、储量丰富、可折叠、易于储藏等特点，因而常被使用作为现场即时检测的平台。这种微流控纸芯片分析器件的工作原理如下：在纸芯片上绘制疏水的蜡打印图案，未绘制疏水图案的部分借助于纸的毛细驱动力而构成亲水通道。基于纸的分析器件廉价、制作简便、试剂消耗量低、且可多元检测，并且操作简单，无需复杂昂贵的仪器设备，可以作为一次性分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于纸芯片检测肺癌病人唾液中EGFR突变的方法，其特征是包括以下步骤：1.1 在Adobe illustrator CS4上设计如附图1所示的三维微流控纸芯片的疏水蜡批量打印图案；1.2 将纸剪裁成常用A4大小的纸，将步骤（1.1）中设计的疏水蜡批量打印图案打印到A4纸上，随后将带有蜡图案的A4纸放置到平板加热器或烘箱中，在150 ºC加热2 min；使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；1.3 采用丝网印刷的方法，将阵列工作电极、参比电极、对电极印刷图案依次印刷到步骤（1.2）中得到的纸上，最后所得的样式如附图1所示，其中右侧为工作区印有1个工作电极，左侧为参比区印有参比电极和对电极；...

【技术特征摘要】
1.一种基于纸芯片检测肺癌病人唾液中EGFR突变的方法，其特征是包括以下步骤：1.1在AdobeillustratorCS4上设计如附图1所示的三维微流控纸芯片的疏水蜡批量打印图案；1.2将纸剪裁成常用A4大小的纸，将步骤（1.1）中设计的疏水蜡批量打印图案打印到A4纸上，随后将带有蜡图案的A4纸放置到平板加热器或烘箱中，在150ºC加热2min；使蜡融化并浸透整个纸的厚度，形成疏水墙；1.3采用丝网印刷的方法，将阵列工作电极、参比电极、对电极印刷图案依次印刷到步骤（1.2）中得到的纸上，最后所得的样式如附图1所示，其中右侧为工作区印有1个工作电极，左侧为参比区印有参比电极和对电极；1.4探针预变性首先，捕获探针和FITC标记的检测探针以及目标DNA，在95ºC下分别孵育5min；将这三种溶液在室温条件下放30min；1.5电极表面的杂交反应首先，在裸纸电极上滴加金纳米粒子生长液，待生长液自然干燥后，通过电聚合反应将0.1M吡咯和100nM捕获探针聚合到制备好的金纸电极表面，循环伏安法施加电压在-0.1到0.7V之间，扫描速度为50m...

【专利技术属性】
技术研发人员：田甜，刘海云，颜梅，于京华，葛慎光，张彦，李丽，马超，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37