一种氯胺酮胶体金唾液检测试纸条制造技术

本发明专利技术提供了一种氯胺酮胶体金唾液检测试纸条，包括反应膜和金标垫，所述反应膜是在硝酸纤维膜(NC膜)上分别包被与载体蛋白连接的氯胺酮和质控二抗IgG，形成反应线和质控线；所述金标垫包被有胶体金标记的氯胺酮单克隆抗体，应用膜层析竞争抑制法，检测唾液标本中氯胺酮。应用本发明专利技术试纸条，可有效监测唾液中氯胺酮，检测特异性强，重复性好，灵敏度高，最低检出量达到50ng/ml，该试纸条操作简单，不需特殊仪器设备，不需专业培训，结果清晰易辨，易于推广，适合于现场检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物检测领域，具体涉及一种氯胺酮胶体金唾液检测试纸条。
技术介绍
氯胺酮(Ketamine,KET)是苯环己哌唳(N-l-phenycyclohexy-piperidine, PCP)的衍生物，医学上作为外科手术麻醉剂，黑市上俗称“K粉”、“K仔”。近年来在娱乐场所滥用日趋严重。是我国目前的主要的新型毒品之一。目前，我国列入管制的麻醉药品有120多种，精神药品有130多种。研究表明，在服用氯胺酮后都会出现“去人格化”、“去真实感”、人体形象改变、梦境、幻觉以及恶心呕吐，大剂量服用，会出现意识模糊、身体呈木僵状，呼吸抑制，甚至出现四肢抽搐以及呼吸停止等现象；长期使用氯胺酮可造成记忆缺失、认知功能 损害和精神病。人体服用的氯胺酮有70% -90%在肝内代谢并经尿液排出，其在体内的代谢较快，清除半衰期约为2. 5小时，一般在吸食后2-4小时内即可被检出。目前对氯胺酮快速检测的方法和仪器较多，主要依靠气相色谱、高效液相色谱、质谱和毛细管电泳等进行检测，但存在仪器昂贵、检测时间长，需要专业技术人员操作的缺点。胶体金免疫层析技术是目前较为成熟的技术方法，其原理是将氯胺酮-BSA结合物包被在硝酸纤维薄膜上，在玻璃纤维上包被胶体金标记的特异性抗体。在检测时，如样本中没有氯胺酮或其代谢产物存在，胶体金标记的特异性抗体与膜区抗原结合形成两条红线(一条反应线T，一条质控线C)，表明检测结果为阴性；如样本中存在氯胺酮或其代谢产物，而且浓度高于检测水平(1000ng/ml)时，毒品分子就与胶体金标记的抗体竞争结合，从而阻止胶体金标记的抗体与膜区抗原结合，使其对应的红色反应线消失，仅出现一条红色的质控线，表明检测结果为阳性。尽管以胶体金免疫层析技术为原理生产的的氯胺酮检测试纸条(胶体金法)已经得到了较为广泛的临床应用，但其检测标本为尿液，目前国内外尚未有研制和生产以人体唾液作为检测样本的氯胺酮唾液检测试纸条。现有的尿液试纸条在其使用过程中存在如下不足之处(I)样本采集不卫生，为很多样本采集者和检测者难以接受；(2)隐私权问题，SP性隐蔽取尿，女性尿检时需要女性人员监督；(3)新兵、公务员、特殊从业人员(飞行员、驾驶员、高空作业者等)体检，受试者易在标本采集中掺假制造假阴性；(4)而取尿时需有专用场所，而且必须一对一进行监督取尿，很不方便，不适用于驾驶员路旁筛查和娱乐场所突击抽查；(5)在实际使用过程中，易发生与美沙酮、美沙芬等药物交叉问题，从而导致错检和误检。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种使用方便、快捷，用于检测人类唾液中氯胺酮的试纸条。本专利技术的另一目的是提供一种氯胺酮胶体金检测试纸条的制备方法。本专利技术的再一目的是提供一种氯胺酮胶体金检测试纸条的应用。一种氯胺酮唾液检测试纸条，包括反应膜(3)和金标垫(2)，所述反应膜为硝酸纤维膜，其具有分别包被与载体蛋白连接的氯胺酮的反应线和二抗IgG的质控线；所述金标垫是包被有胶体金标记的氯胺酮单克隆抗体的玻璃纤维膜。所述载体蛋白为小牛血清白蛋白(BSA)、鸡卵白蛋白(OVA)和/或血蓝蛋白(KLH)。所述的二抗IgG为抗鼠IgG抗体。所述玻璃纤维膜中胶体标记的氯胺酮的单克隆抗体的pH值为8. 0 8. 5，胶体金和氯胺酮单克隆抗体的配比为2 12y g/ml胶体金。优选地，所述玻璃纤维膜中胶体金标记的氯胺酮的单克隆抗体的pH值为8. 2，胶体金和氯胺酮单克隆抗体的配比为g/ml胶体金。所述金标垫是将胶体金标记的氯胺酮单克隆抗体加入脱脂奶粉，离心后取沉淀，沉淀用复溶液复溶后喷涂于玻璃纤维膜上制得。所述复溶液是由终浓度为0. 01 0. 2mol/lTris，l% 5%BSA*0. 01% 0. 2%络蛋白，I % -3%海藻糖或1% -5%蔗糖或0. I % -1% EDTA,0. 1% 2%曲拉通X-100或0. 1% 0.5%土温-20或0.01% 0.5% S9表面活性剂，0. 1% 1%柠檬酸钠，0. 1% 2% ￠-环糊精，0. 1% 1% PEG20000,0. 1 % 2%水解干络素，0. I % 2%氯化钠或0. 1% 2%氯化钾或0. 1% 2%氢氧化钠，0. 05% 0. 1%叠氮钠配制而成，HCl调节pH值为7.0 8. O。所述脱脂奶粉加入量为按质量比0. 5%。 1%。加入10%的脱脂奶粉。所述复溶液是按照原初始标记时所用胶体金溶液体积的40% 100%进行复溶的。所述氯胺酮或抗氯胺酮多克隆抗体的包被浓度为0. 2 I. Omg/ml，所述抗鼠IgG抗体的包被浓度为0. 2 I. Omg/ml o优选地，所述氯胺酮或抗氯胺酮多克隆抗体的包被浓度为0.4mg/ml，所述抗鼠IgG抗体的包被浓度为0. 4mg/mlo所述包被浓度是由划膜液稀释获得的，划膜液是由终浓度为0. 01-0. 2mol/lTris,1% -3%海藻糖或1% -3%蔗糖或0. I % -1% EDTAjO. 05% -0. I %叠氮钠配制而成，HCl调节pH值为7. 2 7.8。本专利技术氯胺酮唾液检测试纸条，还包括反应支持物(5)、上样垫(I)，所述反应支持物(5)上依次相互搭接粘贴的上样垫(I)、金标垫(2)、硝酸纤维膜(3)和吸水垫(4)。所述上样垫含有上样垫处理液，处理液配方为0.01 0. 2mol/LTris，0. 1% 2%曲拉通X-IOO或0. I % 0.5%土温-20或0.01% 0.5% S9表面活性剂，0. 1% 2%柠檬酸钠，0. I % 2%柠檬酸，0.05% 0.2%聚乙烯吡咯烷酮，0. 1% 2% P -环糊精，0. 1% 1%明胶，0. 1% 2% a淀粉酶，0. 1% 1%氯化钠或0. 1% 1%氯化钾或 0. 1% 1%氢氧化钠，0. 05% 0. I %叠氮钠配制而成，上述浓度均为配制处理液后的终浓度，HCl调节pH值为8. O 9. O。所述上样垫为本专利技术试纸条的加样区，反应膜为反应区。本领域技术人员可以根据需要，将本专利技术提供的试纸条的加样区制作为实际检测中可接受的装置，以利于唾液的收集。本专利技术提供一种制备上述氯胺酮唾液检测试纸条的方法，其特征在于，包括如下步骤(I)制备氯胺酮的单 克隆抗体；(2)硝酸纤维膜的制备用划膜液将与载体蛋白偶联的氯胺酮稀释为终浓度为0. 2 I. Omg/ml的包被抗原、将抗鼠IgG抗体稀释为浓度为0. 2 I. Omg/ml,喷于硝酸纤维膜上，分别形成反应线和质控线，且于37°C中干燥4小时，备用；所述划膜液由终浓度为0.01-0. 2mol/lTris, 1% -3%海藻糖或 I % -3%蔗糖或 0. 1% -1% EDTA,0. 05% -0. 1%叠氮钠配制而成，HCl调节pH值为7. 2 7. 8。(3)金标垫的制备氯胺酮的单克隆抗体标记胶体金的pH值为8. O 8. 5，以2 12 ii g/ml胶体金加入氯胺酮的单克隆抗体，摇匀后静置，按质量比0.5%。 1%。，加入10%的脱脂奶粉，摇匀、静置，离心，取沉淀，用复溶液按原初始标记时所用胶体金溶液体积的40 % 100 %复溶，将复溶后的胶体金标记物喷涂于玻璃纤维膜上，37 V，烘干4h，得到金标垫；所述复溶液是由终浓度为0. Ol 本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：戴国华，
申请(专利权)人：戴国华，
类型：发明
国别省市：