自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法技术

本发明专利技术提供了一种自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法，涉及细胞培养技术领域。本发明专利技术自然杀伤细胞培养基质主要由无血清培养基、自体血浆和细胞因子组成，应用该细胞培养基质的自然杀伤细胞的扩增培养方法，通过Lymactin‑NK抗体联合细胞培养基质中的细胞因子诱导人源外周血单个核细胞释放危险信号，间接通过抗体激活自然杀伤细胞并增强细胞杀伤活性。该方法可以在短周期内大量高效的扩增得到高质量的自然杀伤细胞，同时，该方法得到自然杀伤细胞具有纯度高以及细胞毒性强等优点。有效缓解了现有自然杀伤细胞培养方法中存在的生产工艺繁琐、生产成本较高以及自然杀伤细胞扩增倍数低，纯度不高难以大规模生产的问题。

The amplification and culture method of natural killer cell culture matrix and natural killer cells

The invention provides a method for amplification and cultivation of natural killer cell culture matrix and natural killer cells, and relates to the field of cell culture technology. The invention of natural killer cell culture matrix by serum-free medium, autologous plasma and cell culture medium components, the application of natural killer cells in the cell culture method, cultured mononuclear cells release dangerous signal blood cytokines in matrix induced human peripheral Lymactin cells by NK antibody by indirect antibody the activation of natural killer cells and enhanced cell killing activity. This method can amplify a lot of natural killer cells in a short period, and obtain high quality natural killer cells. Meanwhile, the method has the advantages of high purity and strong cytotoxicity. The existing natural killer cell culture methods effectively alleviate the problems existing in the existing natural killer cell culture methods, such as tedious production process, high production cost, low natural killer cell multiplication rate, low purity, and difficult to mass production.

【技术实现步骤摘要】
自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法
本专利技术涉及细胞培养
，尤其是涉及一种自然杀伤细胞培养基质及自然杀伤细胞的扩增培养方法。
技术介绍
自然杀伤细胞(NatureKillercells,NK)是机体固有免疫系统的细胞毒性淋巴细胞，存在于淋巴器官和外周组织中，具有抗肿瘤、抗感染和免疫调节等功能，其无须抗原预先致敏就可以直接识别，并且非特异性地杀伤肿瘤细胞，是人体防御体系的第一道屏障。自然杀伤细胞具有强大的细胞毒活性，它对刺激因素产生的应答十分迅速，而且免疫应答强度高；同时，自然杀伤细胞的杀伤活性无需抗原刺激，也不受MHC分子的限制；此外，自然杀伤细胞还具有强大的细胞因子/趋化因子分泌功能，有助于启动和活化其他免疫细胞(如T细胞、B细胞、树突状细胞和内皮细胞等)的应答。正因为自然杀伤细胞所具有的上述特点，其在固有免疫和适应性免疫中均发挥重要作用，被认为是肿瘤免疫治疗的重要效应细胞。但自然杀伤细胞是淋巴细胞中的稀有亚群，在外周血淋巴细胞中约只占10％～20％。正常人体外周血中的自然杀伤细胞含量远不能满足临床治疗的需要。现有自然杀伤细胞的培养方法主要包括以下几种：(1)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述培养基质主要由以下成分组成：无血清培养基、自体血浆和细胞因子；所述细胞因子包括IL‑2、IL‑7、IL‑12、IL‑15和IL‑21。

【技术特征摘要】
1.一种自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述培养基质主要由以下成分组成：无血清培养基、自体血浆和细胞因子；所述细胞因子包括IL-2、IL-7、IL-12、IL-15和IL-21。2.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述无血清培养基由X-VIVO15培养基和AlyS505NK-AC培养基组成；优选的，所述X-VIVO15培养基和AlyS505NK-AC培养基的质量比为1：1～2：1。3.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述自体血浆在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为0～5％。4.根据权利要求1所述的自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述IL-2细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为500～1500IU/mL；所述IL-7细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为10～30ng/mL；所述IL-12细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为2～8ng/mL；所述IL-15细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为10～30ng/mL；所述IL-21细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为5～15ng/mL。5.根据权利要求4所述的自然杀伤细胞培养基质，其特征在于，所述IL-2细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为1000IU/mL；所述IL-7细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为20ng/mL；所述IL-12细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为5ng/mL；所述IL-15细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为20ng/mL；所述IL-21细胞因子在自然杀伤细胞培养基质中的浓度为10ng/mL。6.一种自然杀伤细胞的扩增培养方法，其特征在于，...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐永胜，杨莹，金星，
申请(专利权)人：天津长和生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12