基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术涉及基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒及其检测方法，通过在环介导等温扩增体系中加入右旋糖苷和黄芪多糖至终浓度均为0.05～0.25mol/L，提高了聚合酶的稳定性，可部分替代普通LAMP试剂盒中价格昂贵的“甜菜碱”，可很好的促进高含量GC片段的扩增，可以将检测反应时间减少到20‑30分钟，能够降低检测成本同时缩短检测周期，对环介导等温扩增在病原微生物中检测具有重要意义。

Loop mediated isothermal amplification kit for detection of avian rhinitis type Klebsiella and detection method thereof

The invention relates to a loop mediated isothermal amplification detection kit for chicken rhinitis Creutzfe Klebsiella and its detection method based on the loop mediated isothermal amplification system with dextran and astragalus polysaccharide to the final concentration was 0.05 ~ 0.25mol/L, improve the polymerase stability, it can replace the ordinary LAMP kit the expensive \betaine\, can be very good to promote the high content of GC amplification can be detected, the reaction time is reduced to 20 30 minutes, can reduce the cost and shorten the test cycle, the loop mediated isothermal detection plays an important role in the pathogenic micro organisms amplification.

【技术实现步骤摘要】
基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒及其检测方法
本专利技术属于生物
，涉及基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒，还涉及利用试剂盒检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的方法。
技术介绍
目前，原微生物的检测方法主要有分离培养鉴定法、聚合酶链式反应(PCR)法和荧光定量PCR(FQ-PCR)法，但分离培养鉴定法操作繁琐、费时，PCR法和FQ-PCR法需要昂贵的仪器和试剂，检测成本高，不适合中小型单位和现场检测应用。环介导等温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)技术与其它核酸扩增技术相比，可以在等温条件下快速、高效、特异地扩增靶序列，且操作简便，不需要昂贵的仪器和试剂，成本低，已在病原微生物检测领域显示出广阔的发展前景。但扩增过程中仍需要价格较高的DNA聚合酶，如果能减少DNA聚合酶的使用量将对进一步降低病原微生物检测成本具有重要意义。克雷伯氏菌属(Klebsiella)为革兰氏阴性杆菌。主要有肺炎克雷伯氏菌(K.peneumoniae)、臭鼻克雷伯氏菌(K.ozaenae)和鼻硬结克雷伯氏菌(k.rhinoscler本文档来自技高网...

【技术保护点】
基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：环介导等温扩增内引物和外引物，嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物、硫酸镁、甜菜碱、右旋糖苷、黄芪多糖和荧光染料赛博绿Ⅰ；所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为150‑250mmol/L、pH为8.5‑8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、浓度为50‑100mmol/L的氯化钾、浓度为50‑100mmol/L的硫酸铵、浓度为15‑20mmol/L的硫酸镁和质量分数为0.5‑1％的曲拉通X‑100组成；所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、...

【技术特征摘要】
1.基于环介导等温扩增检测鸡鼻炎型克雷伯氏菌的试剂盒，其特征在于，包括如下组分：环介导等温扩增内引物和外引物，嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶、10×热聚合反应缓冲液、三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物、硫酸镁、甜菜碱、右旋糖苷、黄芪多糖和荧光染料赛博绿Ⅰ；所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为150-250mmol/L、pH为8.5-8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、浓度为50-100mmol/L的氯化钾、浓度为50-100mmol/L的硫酸铵、浓度为15-20mmol/L的硫酸镁和质量分数为0.5-1％的曲拉通X-100组成；所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物由三磷酸腺嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸鸟嘌呤脱氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脱氧核苷酸和三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸组成；所述环介导等温扩增内引物序列如SEQIDNO.1和SEQIDNO.2所示；所述外引物序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述环介导等温扩增内引物浓度分别为5μmol/L；所述外引物浓度分别为20μmol/L。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述嗜热乳酸枯草芽孢杆菌DNA聚合酶浓度为8U/μl、所述三磷酸碱基脱氧核苷酸混合物各组分浓度为10mmol/L、硫酸镁浓度为100mmol/L、甜菜碱浓度为2mol/L、右旋糖苷浓度为4mol/L，黄芪多糖浓度为4mol/L和荧光染料赛博绿Ⅰ质量分数为10％。4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于：所述10×热聚合反应缓冲液由浓度为250mmol/L、pH为8.8的Tris–HCl、浓度为100mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨金龙，戴茜茜，殷素会，许国洋，周婵，王海燕，谷山林，王介平，吕金凤，王小燕，李晋，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：重庆,50