一种癌症诊断试剂盒以及治疗用药物组合物制造技术

本发明专利技术收集甲状腺癌患者和正常人的血浆对全基因组miR表达谱进行研究。研究结果揭示了一系列miRs与甲状腺癌相关，其中发现分子标记物miR‑27a‑3p作为靶向降低MMSET表达的分子在甲状腺癌中具有显著抑制癌细胞的生长的现象。为有效控制治疗甲状腺癌提供全新的治疗靶点和药物。

With a pharmaceutical composition for cancer diagnosis and treatment kit

The present study collects genome-wide plasma miR expression profiles in patients with thyroid cancer and normal subjects. The results of the study revealed a series of miRs and thyroid cancer, including molecular marker miR 27a 3P as targeting the decreased expression of MMSET molecular phenomenon has significant inhibit the growth of cancer cells in thyroid carcinoma. Provide therapeutic targets and new drugs to effectively control the treatment of thyroid cancer.

【技术实现步骤摘要】
一种癌症诊断试剂盒以及治疗用药物组合物
本专利技术涉及癌症的诊断试剂盒及其治疗用的药物组合物，属于医药生物

技术介绍
甲状腺恶性肿瘤中最常见的是甲状腺癌(Thyroidcarcinoma)，极少数可有恶性淋巴瘤及转移瘤，甲状腺癌占全身恶性肿瘤的1％。除髓样癌外，绝大部分甲状腺癌起源于滤泡上皮细胞。甲状腺癌的发病率与地区、种族、性别有一定关系。美国的甲状腺癌发病率较高，根据统计，1973-2002年间，美国甲状腺癌的年发生率由十万分之3.6增加到十万分之8.7，大约增加了2.4倍(P<0.001),而且这种趋势仍然在逐年增长。国内的甲状腺癌发病率较低，据统计，其中男性约0.8-0.9/10万，女性约2.0-2.2/10万。甲状腺癌是内分泌系统中发病率最高的恶性疾病，其发病率在近三十年内上升了三倍。根据2012年中国国家癌症中心登记处统计，我国甲状腺癌的发病率约为十万分之8.76，每年大约有11.8万人被检测出甲状腺癌。从细胞起源和临床病理上甲状腺癌可分为以下几种亚型:起源于甲状腺滤泡上皮细胞的高分化的乳头状癌和滤泡状癌，低分化癌，未分化癌；以及起源于甲状腺滤泡旁细胞的甲状腺髓样癌。其中乳头状癌占了所有甲状腺癌85％的病例。目前的研究表明基因融合是甲状腺癌发病的决定性因素之一，癌症基因组计划(TheCancerGenomeAtlas)绘制的甲状腺癌的遗传图谱提示，基因融合占据了甲状腺癌驱动突变的20％左右。因此鉴定出甲状腺癌组织中的基因融合对于甲状腺癌的精准诊断和治疗是必要的。CN102844443B描述了用于检测、诊断和监测受试者的甲状腺癌的方法，其包括测定在受试者的样品中的包括Ep-ICD和β-联蛋白在内的标志物。CN102459636B中公开了组合物用于确定受试者中恶性甲状腺病症的可能性，其中所述试剂适于检测所述受试者的DNA样品中IYD或其互补序列与正常样品相比的一种或多种拷贝数变异，并且包含对应于HD或其互补序列的一种或多种生物标志物，并且其中所述甲状腺病症是异常细胞增殖，其中所述可能性如下确定：(a)提供所述受试者的DNA样品；(b)使用所述组合物分析所述DNA样品中IYD或其互补序列的一种或多种拷贝数变异的存在；和(c)基于步骤(b)的结果确定所述受试者是否患有或可能患有恶性甲状腺病症。CN102272325B中公开了试剂在制备用于诊断受试者的甲状腺状态的组合物中的用途，其中所述试剂包含两种对应于两种生物标志物的基因，其中所述两种生物标志物选自ALDH1B1、CFH、CFHR1、PKHD1L1、PYGL、SEMA3D、STK32A，并且其中所述两种生物标志物中的一种是ALDH1B1，所述甲状腺状态通过以下步骤诊断：(a)从所述受试者获得甲状腺组织样品；(b)测定所述甲状腺组织样品中至少两种基因表达产物的表达的表达水平，其中所述至少两种基因表达产物对应于所述甲状腺组织样品中的所述至少两种生物标志物；和(c)通过将算法应用于步骤(b)的表达水平数据而将所述甲状腺组织样品分类为良性或恶性的，其中所述算法的阴性预测值至少为95％，且其中所述分类基于对应于所述至少两种生物标志物的至少两种基因表达产物的所述表达水平。现有技术的研究发现，针对甲状腺癌的检测方法比较复杂，存在这不准确以及不稳定的现象，需要本领域技术人员去追求和研究。前期的研究发现MMSET作为一种近期发现的新的肿瘤相关基因，研究者们在多种肿瘤中证实MMSET在促进肿瘤细胞的恶性转化以及肿瘤的迁移、侵袭以及转移等方面的作用，深入了解MMSET对于了解肿瘤发生、发展以及侵袭转移的分子机制，和判断肿瘤的预后和指导治疗方面均具有重要意义。因此，MMSET基因有可能成为今后肿瘤的早期诊断和基因治疗方面的研究热点。但我们仍应看到，MMSET基因的表达调控机制、生物学功能和促进肿瘤侵袭转移的机制现在还不清楚，有许多问题还有待于进一步研究与探索。基于上述的研究发现，专利技术人通过研究发现，MMSET基因与甲状腺癌相关，同时提供一种快速的甲状腺癌检测的标志物以及相应的试剂盒显得尤为重要。
技术实现思路
根据第一方面，本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供微小核苷酸miR-27a-3p在制备诊断甲状腺癌的芯片中的应用。其中，miR-27a-3p的碱基序列为UUCACAGUGGCUAAGUUCCGC。本专利技术的第二个目的是，提供微小核苷酸miR-27a-3p在制备甲状腺癌预后的疾病进展的试剂盒中的应用。本专利技术的第三个目的是，提供微小核苷酸miR-27a-3p作为靶向降低MMSET表达的试剂在制备治疗甲状腺癌的药物中的应用。本专利技术提供了一种分离的寡核苷酸。根据本专利技术的实施例，所述寡核苷酸具有如SEQIDNO:1所示的序列。根据本专利技术的实施例，专利技术人确定了生物样本存在甲状腺癌的miRNA生物标志物，该miRNA生物标志物具有如SEQIDNO:1所示的序列，并且确定了该miRNA生物标志物与甲状腺癌的诊断/预后以及治疗过程密切相关。在本专利技术的最后一个方面，本专利技术提供了一种用于确定生物样本存在甲状腺癌的芯片以及相应的试剂盒。根据本专利技术的实施例，所述试剂盒包含探针，所述探针特异性识别具有如SEQIDNO:1所示序列的所述的寡核苷酸。利用根据本专利技术的实施例的试剂盒，能够有效地确定生物样品是否存在甲状腺癌。一种用于早期甲状腺癌诊断用试剂盒或生物芯片，包括上述特异表达miRNAs的逆转录引物和检测引物。逆转录引物的序列如SEQIDNO：2所示，前向检测引物的序列如SEQIDNO：3所示：反向检测引物如SEQIDNO：4所示：SEQIDNO:2：5’-CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAGGCGGAACT-3’；SEQIDNO：3：5’-ACACTCCAGCTGGGTTCACAGTGGCTAAGT-3'；SEQIDNO：4：5’-TGGTGTCGTGGAGTCG-3’。本专利技术可以直接将生物样本中提取分离出完整无降解的RNA，经过荧光标记，利用生物芯片杂交技术进行芯片扫描和分析，从而确定生物体是否存在甲状腺癌。本专利技术优点在于：本专利技术收集甲状腺癌患者和正常人的血浆对全基因组miR表达谱进行研究。研究结果揭示了一系列miRs与甲状腺癌相关，其中发现分子标记物miR-27a-3p作为靶向降低MMSET表达的分子在甲状腺癌中具有显著抑制癌细胞的生长的现象。为有效控制治疗甲状腺癌提供全新的治疗靶点和药物。附图说明图1甲状腺癌和正常细胞中MMSET和miR-27a-3pRNA相对表达量变化图具体实施方式实施例1甲状腺癌中差异miR分析1、样本的确定研究对象的一般资料本实验石蜡标本均取自2005年9月至2011年3月在哈尔滨医科大学附属肿瘤医院妇科接受手术治疗的标本，包括101例甲状腺癌标本，随机选择的41例同期因甲状腺良性结节于我院行结节切除术的正常甲状腺标本作为对照。全部病例在术前均未接受放疗、化疗、激素治疗及生物治疗，病例对应的临床病理资料完整，病理诊断均由有经验的病理科医生复核。本课题在实施前，己获哈尔滨医科大学医学伦理委员会审核批准。我们将本研究的101例甲状腺癌组织样本制作成组织芯片，通过测序其中RNA表达数据(RNAseq)，比较本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种微小核苷酸miR‑27a‑3p，其序列如SEQ ID NO：1所示。

【技术特征摘要】
1.一种微小核苷酸miR-27a-3p，其序列如SEQIDNO：1所示。2.miR-27a-3p在制备用于检测甲状腺癌的试剂盒中的应用，其特征在于：试剂盒中含有三种引物，三种引物序列分别如SEQIDNO：2-4所示，如果miR-27a-3p低表达，则提示患有甲状腺癌。3.miR-27a-3p在制...

【专利技术属性】
技术研发人员：申永智，肖娜，
申请(专利权)人：申永智，
类型：发明
国别省市：河南,41