一种CPP‑LUC嵌合蛋白及其在检测细胞内ATP中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种CPP‑LUC嵌合蛋白及其在检测细胞内ATP中的应用。本发明专利技术CPP‑LUC嵌合蛋白由包含穿膜肽基因和荧光素酶基因的CPP‑LUC载体原核表达得到。本发明专利技术CPP‑LUC嵌合蛋白利用穿膜肽能引导荧光素酶进入活细胞，在底物和ATP存在下由ATP驱动发光，且荧光强度和ATP的量成正比这一机制，将CPP‑LUC嵌合蛋白用于检测细胞内ATP，可免去ATP检测所需的细胞裂解等步骤，降低操作引起的误差，还能实现常规ATP检测所不能进行的活体检测和实时检测(成像)。本发明专利技术CPP‑LUC嵌合蛋白用于检测细胞内ATP时，具有操作简便、特异性好、灵敏度高的优点，还可将其制成ATP检测试剂盒，具有良好的应用前景和巨大的市场价值。

Application of a CPP LUC chimeric protein and detection of intracellular ATP in

The invention discloses a CPP LUC chimeric protein and its application in detecting cells in ATP. CPP LUC prokaryotic expression vector of the invention CPP LUC chimeric protein containing transmembrane peptide gene and luciferase gene. CPPs can guide the luciferase into living cells with the invention of CPP LUC chimeric protein, in the substrate and the presence of ATP driven by ATP and ATP light, and the fluorescence intensity is proportional to the amount of this mechanism, the CPP LUC chimeric protein for detection of intracellular ATP, to be needed to detect ATP cell lysis. Steps to reduce the error caused by the operation, but also can realize the conventional ATP detection cannot be carried out in vivo detection and real-time detection (imaging). The invention CPP LUC chimeric protein for detection of intracellular ATP, has the advantages of convenient operation, high sensitivity and good specificity, it can also be made into ATP kit, it has a good application prospect and huge market value.

【技术实现步骤摘要】
一种CPP-LUC嵌合蛋白及其在检测细胞内ATP中的应用
本专利技术属于生物化学检测
，更具体地说，涉及一种细胞穿膜肽引导的荧光素酶构建及其在细胞内ATP检测中的应用。
技术介绍
荧光素酶是灵敏、可靠的用于测定ATP的生物传感器，利用克隆的荧光素酶为探针对细胞内ATP浓度进行定量，广泛用于细胞活性检测、细胞毒性筛选和细胞增殖研究中。荧光素(D-luciferin)作为萤火虫荧光素酶(Luciferase)的底物，存在于多种发光生物中。在荧光素酶的催化和氧气、ATP、Ca2+/Mg2+的作用下，荧光素被氧化并释放黄绿色的光(562nm)。ATP普遍存在于包括微生物在内的一切活细胞内，又为荧光素酶直接作用的底物，在有氧条件下参与荧光素酶催化荧光素释放荧光的过程，并且释放的荧光强度与胞内ATP含量呈正相关。细胞死亡后，细胞内ATP迅速水解，而活细胞的ATP含量基本固定，因此所测得的荧光强度反应能够反应出活细胞的数量。对于细胞内的ATP检测，细胞裂解后ATP的提取过程不可避免，导致细胞内ATP测量不准确，并不利于高通量的药物筛选。
技术实现思路
本专利技术的目的在于：克服现有常规的ATP检本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种CPP‑LUC载体，其特征在于，其包含穿膜肽基因和荧光素酶基因，由共同的启动子单独表达或同时控制表达。

【技术特征摘要】
1.一种CPP-LUC载体，其特征在于，其包含穿膜肽基因和荧光素酶基因，由共同的启动子单独表达或同时控制表达。2.根据权利要求1所述的CPP-LUC载体，其特征在于，所述穿膜肽基因为TAT、VP-22、ANTP、Transportan、PEP-1、MPG、MAP、KALA、ppTG20、hCT(9-32)或Arg9。3.根据权利要求1所述的CPP-LUC载体，其特征在于，所述荧光素酶为红色萤火虫荧光素酶、绿色萤火虫荧光素酶或水母荧光素酶。4.一种CPP-LUC嵌合蛋白，其特征在于，由权利要求1～3中任意一条权利要求所述CPP-LUC载体原核表达得到。5.权利要求4所述CPP-LUC嵌合蛋白在检测细胞内ATP...

【专利技术属性】
技术研发人员：方志远，
申请(专利权)人：广州医科大学附属第五医院，
类型：发明
国别省市：广东,44