检测饲料中蛋白质的方法技术

本发明专利技术公开了一种检测饲料中蛋白质的方法；旨在提供一种检测时间短、分析数据准确的蛋白质检测方法，其技术要点包括下述步骤：1)样品消化；2)氨的蒸馏；3)蒸馏步骤的检验；4)滴定；5)空白测定；6)计算；属于化学检测技术领域。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种蛋白质的测定方法，具体地说，是一种检测饲料中蛋白质的方法，属于化学检测

技术介绍
家禽、水产等动物对饲料蛋白质的需要实际上是对氨基酸的需要。外源添加氨基酸以调整饲料中的氨基酸平衡，是提高饲料蛋白质利用效率、节约蛋白质资源、降低饲料成本的最佳途径。蛋白质是鉴定饲料质量时必测的常规营养指标。目前饲料厂普遍采用的标准方法其实质仍是凯氏定氮法，但是由于粗蛋白质测定过程相对较复杂，很多饲料企业在实际检测过程中当出现结果异常时不知道如何去分析；有些操作过程不严密，导致检测结果不准确，在饲料的生产和销售过程中，政府的各个监督部门对其进行抽检时出现了不合格的现象，给生产企业造成损失。笔者根据自己的实践经验，总结了饲料蛋白质测定准确度进行了多次的试验，在此和大家进行控讨。蛋白质的化学组成是一类重要的高分子有机化合物。不同的蛋白质，具有不同的生理功能。它是各种α-氨基酸通过酰胺键连成的长链分子。组成蛋白质的主要元素是碳、氢、氧和氮。某些蛋白质还含有硫和磷，有些特殊的蛋白质含有微量元素如铁、锌、铜、锰、碘、钼等。蛋白质组成单位是氨基酸，蛋白质是氨基酸的多聚物。蛋白质经酸、碱或蛋白酶水解后的尾产物是氨基酸。不同排列顺序及不同组合的氨基酸，构成不同形式的蛋白质。如何提高饲料中粗蛋白质测定准确度，先看是用什么原料做成的饲料，构成的蛋白质是什么形式，采用哪种检测方法。1860年由德国Weende试验站Henneberg和Stohmann首倡，延用至今已有近130年历史，是粗略地评定营养价值的基本方法。6种饲料常规成分都不是纯粹的化学物质，面是在规定的测试条件下得出的类似成分近似值，无氮浸出物则是通过计算求出。一般蛋白质中含氮16％。因此，将饲料的含量氮量乘以6.25即视为其蛋白质的含量。但6.25这个系数并不完全适用于所有饲料蛋白质，如谷实类应为5.46～5.95，大豆及其制品应为5.71，乳制品应为6.38，花生仁及花生饼应为5.46等。另一方面，饲料中的含苞欲放氮化合物并非全部以蛋白质的形态存在，不同品种的饲料含氮物中还含苞欲放有不等量的氨基酸、酰胺、含氮有机碱类及氨化物等。因此，用凯氏法测出的数值(氮×6.25)可以认为是被国际上公允的“粗蛋白质”这一模糊概念的近似值。传统的测定方法是采用凯罗道尔氏(Kjeldahlj.1849-1900)首倡的定氮法。以浓硫酸加催化剂水解饲料样品，使之形成硫酸铵，再与碱反应生成氨，然后导入定量的酸标准液中滴定，间接计算出氮的含量，再乘以系数即得。从凯氏定氮法、自动定氮仪法、双缩脲法同时对饲料中的粗蛋白质进行测定，并对结果进行了分析比较，结果表明:凯氏定氮法测定所用的时间较长，测得结果比较稳定；自动定氮仪同国标法相比，结果偏高，相对偏差较小，但实验成本高；双缩脲法测定结果偏低，偏差较大，但操作简单，效率高，更适合饲料厂等企业的快速测定.
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术提供的目的是提供一种检测饲料中蛋白质的方法，该方法检测时间短、分析数据准确法。为解决上述技术问题，本专利技术提供的技术方案是这样的：一种检测饲料中蛋白质的方法，依次包括下述步骤：分析步骤：1)样品消化试样的消煮：称取试样0.5g～1g准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入1g混合催化剂，再加入10g混合液与试样混合均匀，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，在410℃加热直至溶液呈透明的蓝绿色澄清透明后，然后再继续加热15min；2)氨的蒸馏将试样消煮液冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却。将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内；然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL。降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏；3)蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按照步骤2)所述的方法，测得硫酸铵含量为21.19％±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确；4)滴定用蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点；5)空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按上述方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL；消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL；6)计算式中：V1—滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V0—滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；C—盐酸标准溶液浓度，mol/L；m—样品重量，g；V—试样分解液总体积，mL；V2—试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140—每毫克当量氮的克数；6.25—氮换算成蛋白质的平均系数。与现有技术相比，本专利技术提供的技术方案测得饲料中粗蛋白质含量和用中华人民共和国国家标准《GB/T6432-1994》测定饲料中粗蛋白质含量比较，测得结果无显著差异，重复性符合国家标准规定的范围。但本法具有分析速度快、分析数据准确等优势。但是从时间上缩短了90min。由此可见本法可对饲料中的蛋白质含量进行有效监控。具体实施方式下面结合具体实施方式，对本专利技术的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本专利技术的任何限制，任何在本专利技术权利要求保护范围内所做的有限次的修改，仍在本专利技术的权利要求保护范围之内。实施例11、仪器设备：与国家标准《GB/T6432-1994》方法所用仪器设备相同。2、试剂：混合液：量取100mL蒸馏水倒入烧杯中，慢慢加入浓硫酸200mL，冷却后再加入30％过氧化氢300mL，混合备用。混合催化剂：称取分析纯硫酸铜10g，硫酸钾100g，硒粉0.2g，放入研钵中研细全部通过40目筛，混匀后备用。其它试剂与国家标准《GB/T6432-1994》方法所用试剂相同。3、试样的选取和制备：选取具有代表性的试样用四分法缩减至200g，粉碎后全部通过40目筛，装于密封容器中，防止试样成分的变化。4、分析步骤：4.1样品消化4.1.1试样的消煮：称取试样0.5g～1g(含氮量5～80mg)准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入1g混合催化剂，再加入10g混合液，与试样混合均匀，2...

【技术保护点】
一种检测饲料中蛋白质的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：分析步骤：1)样品消化试样的消煮：称取试样0.5g～1g准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入1g混合催化剂，再加入10g混合液与试样混合均匀，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，在410℃加热直至溶液呈透明的蓝绿色澄清透明后，然后再继续加热15min；2)氨的蒸馏将试样消煮液冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却；将蒸馏装置的冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内；然后小心地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再加热蒸馏，直至流出液体积为100mL；降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗均需流入锥形瓶内，然后停止蒸馏；3)蒸馏步骤的检验精确称取0.2g硫酸铵，代替试样，按照步骤2)所述的方法，测得硫酸铵含量为21.19％±0.2％，否则应检查加碱、蒸馏和滴定各步骤是否正确；4)滴定用蒸馏后的吸收液立即用0.1mol/L或0.02mol/L盐酸标准溶液滴定，溶液由蓝绿色变成灰红色为终点；5)空白测定称取蔗糖0.5g，代替试样，按上述方法进行空白测定，消耗0.1mol/L盐酸标准溶液的体积不得超过0.2mL；消耗0.02mol/L盐酸标准溶液体积不得超过0.3mL；6)计算式中：V1—滴定试样时所需标准酸溶液体积，mL；V0—滴定空白时所需标准酸溶液体积，mL；C—盐酸标准溶液浓度，mol/L；m—样品重量，g；V—试样分解液总体积，mL；V2—试样分解液蒸馏用体积，mL；0.0140—每毫克当量氮的克数；6.25—氮换算成蛋白质的平均系数。...

【技术特征摘要】
1.一种检测饲料中蛋白质的方法，其特征在于，依次包括下述步骤：
分析步骤：
1)样品消化
试样的消煮：称取试样0.5g～1g准确至0.0002g，放入凯氏烧瓶中，加入1g
混合催化剂，再加入10g混合液与试样混合均匀，将凯氏烧瓶置于电炉上加热，
开始小火，待样品焦化，泡沫消失后，在410℃加热直至溶液呈透明的蓝绿色澄
清透明后，然后再继续加热15min；
2)氨的蒸馏
将试样消煮液冷却，加入60～100mL蒸馏水，摇匀，冷却；将蒸馏装置的
冷凝管末端浸入装有25mL硼酸吸收液和2滴混合指示剂的锥形瓶内；然后小心
地向凯氏烧瓶中加入50mL氢氧化钠溶液，轻轻摇动凯氏烧瓶，使溶液混匀后再
加热蒸馏，直至流出液体积为100mL；降下锥形瓶，使冷凝管末端离开液面，
继续蒸馏1～2min，并用蒸馏水冲洗冷凝管末端，洗均需流入锥形瓶内，然后停
止蒸馏；
3)蒸馏步骤的检验<...

【专利技术属性】
技术研发人员：李德光，吕立盈，李春燕，聂少姬，伍焕铭，陈东红，麦丰，黄敏，
申请(专利权)人：梧州市产品质量检验所，
类型：发明
国别省市：广西;45