重组酶突变体制造技术

本文呈现了重组酶以及使用该重组酶的方法和试剂盒，所述重组酶在模式化流动池表面上实现改善的重组酶介导的核酸(如具有单链衔接头区的PCR文库)扩增，从而实现改善的簇扩增。

Recombinase mutant

This paper presents the recombinant enzyme and using the recombinant enzyme method and kit, the recombinant nucleic acid enzyme in the mode of the recombinant enzyme mediated flow cell on the surface of the improvement of the guide (such as single stranded adaptor library area PCR) amplification, so as to realize the improvement of cluster expansion.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】重组酶突变体专利技术背景重组酶可用于重组酶介导的核酸扩增。例如，重组酶可以促进寡核苷酸靶向DNA靶标，允许通过聚合酶复制DNA。仍然需要具有改善性质的修饰的重组酶。序列表本申请与电子格式的序列表一起提交。该序列表作为一个创建于2014年09月26日，大小为98Kb的，命名为IP1264.TXT的文件提供。序列表的电子格式中的信息通过引用以其整体并入本文。专利技术概述本文呈现的是用于改善的重组酶介导的核酸扩增的重组酶。令人惊讶地，本专利技术人已经鉴定出某些改变的重组酶，其在将核酸接种(seeding)至模式化(patterned)流动池表面中具有实质改善的特点。在某些实施方案中，改变的重组酶改善在模式化流动池表面上接种无PCR文库(PCR-freelibrary)(如具有单链衔接头区的PCR文库)，从而实现改善的簇扩增。在某些实施方案中，所述重组酶是重组UvsX，且包含功能上等同于RB49UvsX氨基酸序列中Pro256的位置处的氨基酸取代。野生型RB49UvsX氨基酸序列如SEQIDNO：1所示。在某些实施方案中，所述重组UvsX包含氨基酸序列，该氨基酸序列包含与SEQIDNO：1至少本文档来自技高网...

【技术保护点】
重组UvsX，所述重组UvsX包含与SEQ ID NO:1至少60％、70％、80％、90％、95％、99％相同的氨基酸序列，所述重组UvsX包含在功能上等同于RB49 UvsX氨基酸序列中Pro256的位置处的氨基酸取代突变。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.09.29 US 62/057,0561.重组UvsX，所述重组UvsX包含与SEQIDNO:1至少60％、70％、80％、90％、95％、99％相同的氨基酸序列，所述重组UvsX包含在功能上等同于RB49UvsX氨基酸序列中Pro256的位置处的氨基酸取代突变。2.权利要求1的重组UvsX，其中所述取代突变包含突变为带电荷的残基。3.权利要求1的重组UvsX，其中所述取代突变包含突变为碱性残基。4.权利要求1的重组UvsX，其中所述取代突变包含与所述RB49UvsX氨基酸序列中Pro256Lys同源的突变。5.权利要求1-4中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX还包含在功能上等同于RB49UvsX氨基酸序列中His63的位置处的取代突变。6.权利要求5的重组UvsX，其中所述重组UvsX包含与RB49UvsX氨基酸序列中His63Ser同源的取代突变。7.权利要求1-6中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX还包含选自下组的突变：在C末端添加一个或多个谷氨酸残基；在C末端添加一个或多个天冬氨酸残基；及其组合。8.权利要求1-7中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX衍生自选自下组的肌病毒科(myoviridae)噬菌体：T4、T6、Rb69、Aeh1、KVP40、不动杆菌噬菌体(Acinetobacterphage)133、气单胞菌噬菌体(Aeromonasphage)65、噬蓝藻体P-SSM2、噬蓝藻体PSSM4、噬蓝藻体S-PM2、Rb32、弧菌噬菌体nt-1、Rb16、Rb43，和Rb49。9.权利要求1-7中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX衍生自选自下组的肌病毒科噬菌体：T2、Rb14、气单胞菌噬菌体25、phi-1、噬菌体31、噬菌体44RR2.8t、噬菌体Rb3、和噬菌体LZ2。10.重组UvsX，其包含SEQIDNO：2和22-35中任一个的氨基酸序列。11.重组UvsX，其包含对半保守域的取代突变，所述半保守域包含SEQIDNO：3-5中任一项的氨基酸序列，其中所述取代突变包含选自下组的突变：在位置7处取代为除Phe、Pro、Asp、Glu或Asn以外的任何残基。12.权利要求11的重组UvsX，其中所述突变包含突变为带电荷的残基。13.权利要求11的重组UvsX，其中所述突变包含在位置7处取代为Lys。14.重组UvsX，其包含对半保守域的取代突变，所述半保守域包含SEQIDNO：6-7中任一项的氨基酸序列，其中所述取代突变包含选自下组的突变：在位置12处突变为除Phe、Pro、Asp、Glu或Asn以外的任何残基。15.权利要求14的重组UvsX，其中所述突变包含突变为带电荷的残基。16.权利要求14的重组UvsX，其中所述突变包含在位置12处取代为Lys。17.权利要求10-15中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX还包含功能上等同于RB49UvsX氨基酸序列中His63的位置处的取代突变。18.权利要求17的重组UvsX，其中所述重组UvsX包含与RB49UvsX氨基酸序列中His63Ser同源的取代突变。19.权利要求10-18中任一项的重组UvsX，其中所述重组UvsX还包含选自下组的突变：在C末端添加一个或多个谷氨酸残基；在C末端添...

【专利技术属性】
技术研发人员：E博马蒂，MW凯林格，JM鲍特尔，
申请(专利权)人：伊卢米纳剑桥有限公司，
类型：发明
国别省市：英国,GB