五种食源性病原菌微流控芯片快速检测技术及试剂盒制造技术

本发明专利技术属于食品卫生安全快速检测领域；本发明专利技术通过提供五种针对大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌特定基因片段具有特异性的引物组，固定有上述引物组微流控芯片，及包含有上述扩增反应液的试剂盒对样本中大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌和副溶血弧菌进行检测；本方案提供的五种食源性病原菌微流控芯片快速检测技术及试剂盒具有灵敏度高、特异性强、方便快捷、适用范围广等优点，可解决食源性病原体的现场快速检测和基层普及应用难题；特别是现场检测及战时野外应用。同时，还拥有试剂消耗量小、污染小、成本低、且便携等诸多优点。

Rapid detection technique and kit for five kinds of foodborne pathogenic bacteria microfluidic chip

The invention belongs to the field of rapid detection of food safety and health; the present invention provides five kinds of primers for group of Escherichia coli O157:H7, Staphylococcus aureus, Salmonella, Listeria bacteria and Vibrio parahaemolyticus Lester specific gene fragment is specific, fixed with the group of primers of microfluidic chip, and includes the reaction liquid the kit of Escherichia coli samples O157:H7, Staphylococcus aureus, Salmonella, Listeria bacteria Lester and Vibrio parahaemolyticus were detected; five kinds of food borne pathogens in this scheme provides microfluidic chip technology and rapid detection kit has the advantages of high sensitivity, strong specificity, convenient and applicable to a wide range of advantages the scene, rapid detection and basic popularization and application to solve the problem of foodborne pathogens; especially the on-site inspection and field application in wartime. At the same time, it also has many advantages, such as small reagent consumption, little pollution, low cost, portability and so on.

【技术实现步骤摘要】
五种食源性病原菌微流控芯片快速检测技术及试剂盒
本专利技术属于食品卫生安全快速检测领域。涉及微流控芯片快速检测技术和环介导等温扩增（Loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）技术；涉及大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、副溶血弧菌五种食源性致病菌特定基因保守序列具有的特异性引物和引物组；还涉及将引物和引物组用于等温扩增法检测大肠杆菌O157:H7、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、单增李斯特菌、副溶血弧菌五种食源性致病菌的检测方法和检测试剂盒。
技术介绍
近年来我国食品安全频频出现问题，由病原微生物引起的食源性疾病是影响食品安全的最主要的因素之一。常见细菌性食物中毒的病原微生物有：致病性大肠杆菌（特别是出血性大肠杆菌O157:H7）；沙门氏菌属；志贺氏菌；致病性弧菌（包括：霍乱弧菌、副溶血性弧菌）；金黄色葡萄球菌及其肠毒素；近年来发现导致细菌性食物中毒的微生物越来越多，包括单核增生李斯特菌、空肠弯曲菌等。食源性致病菌检测执行标准中主要检测方法为培养法、ELLISA法和PCR法。其中培养法是采用最广泛的方法，结果准确。但耗时本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括扩增反应液、微流控芯片阵列、阴性对照物和阳性对照物，其中所述微流控芯片阵列设有大肠杆菌O157:H7检测芯片、金黄色葡萄球菌检测芯片、沙门氏菌检测芯片、单增李斯特菌检测芯片、副溶血弧菌检测芯片、阳性对照检测芯片、阴性对照检测芯片；所述大肠杆菌O157:H7检测芯片上设有大肠杆菌O157:H7引物组，所述金黄色葡萄球菌检测芯片上设有金黄色葡萄球菌引物组，所述沙门氏菌检测芯片上设有沙门氏菌引物组，所述单增李斯特菌检测芯片上设有单增李斯特菌引物组，所述副溶血弧菌检测芯片上设有副溶血弧菌引物组；所述阳性对照检测芯片和所述阴性对照检...

【技术特征摘要】
1.一种五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述试剂盒包括扩增反应液、微流控芯片阵列、阴性对照物和阳性对照物，其中所述微流控芯片阵列设有大肠杆菌O157:H7检测芯片、金黄色葡萄球菌检测芯片、沙门氏菌检测芯片、单增李斯特菌检测芯片、副溶血弧菌检测芯片、阳性对照检测芯片、阴性对照检测芯片；所述大肠杆菌O157:H7检测芯片上设有大肠杆菌O157:H7引物组，所述金黄色葡萄球菌检测芯片上设有金黄色葡萄球菌引物组，所述沙门氏菌检测芯片上设有沙门氏菌引物组，所述单增李斯特菌检测芯片上设有单增李斯特菌引物组，所述副溶血弧菌检测芯片上设有副溶血弧菌引物组；所述阳性对照检测芯片和所述阴性对照检测芯片上同时设有大肠杆菌O157:H7引物组、金黄色葡萄球菌引物组、沙门氏菌引物组、单增李斯特菌引物组、副溶血弧菌引物组。2.根据权利要求1所述的五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述大肠杆菌O157:H7引物组由下列引物成：正向外引物F3GCTATACCACGTTACATTTTG反向外引物B3ACTACTCAACCTTCCCACCTTC正向内引物FIPGCTCTTTAAACAGACTGCACATTCGTTGACTAAATCTTATCTGG反向内引物BIPCTACTACAGCTGAAGCTTTACGCGAAATCCCCTTACAATTTGCC正向环引物LFAGGTTCCGCTATTCAGCATTAAAT。3.根据权利要求1所述的五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述金黄色葡萄球菌引物组由下列引物成：正向外引物F3GTACGGTTACAGATAGCATG反向外引物B3GAAAGGCATTACGAGTTCTTGA正向内引物FIPGTTTCATAACCTTCAGCAAGCTTTCCATACAGTCATTTTCAAGA反向内引物BIPAAAGTCATTGCAGCTTGCTTACTTCGATCACTGGACGACG正向环引物LFAACTCATAGTTTACAACA反向环引物LBGTAAATTTAATGAAAGTGTTCA。4.根据权利要求1所述的五种食源性病原菌微流控芯片快速检测试剂盒，其特征在于：所述单增李斯特菌引物组由下列引物构成：正向外引物F3ACGTTTCCCCGGTTACTGT反向外引物B3ATTCCTTCTGAACCTTTGG正向内引物FIPCATAATAATCGGCTTCAATCACGCTCTTTAATCTGGCATT反向内引物BIPGCCACGTTCGGGCAATTCGTTAAAACTGGATTACCTTGACA正向环引物LFAGACGGCTCCAACTGATCG反向环引物LBATAGCCTTTATTTGGGTT。5.根据权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：屈彬彬，苏海峰，高亚平，吴国君，
申请(专利权)人：北京百康芯生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11