用于mRNA检测的试剂及用途制造技术

本发明专利技术提供用于mRNA检测的试剂及用途，所述mRNA检测的试剂包括基因引物和内参引物；本发明专利技术的用途为：制备判别结合潜伏性感染和活动性结核的产品。有益的技术效果：本发明专利技术产品能区分活动性结核感染与潜伏感染、健康人群及其他非结核感染者，检测灵敏度和特异性大于85％；对艾滋病病毒联合感染的病人检查灵敏度大于80％；对结核菌培养阳性的儿童患者检测灵敏度大于70％。操作简便，检测时间小于8小时。

Reagents and uses for mRNA detection

The present invention provides a kit for detecting mRNA and use the reagent of the mRNA gene primers and internal primers; the use of the invention is prepared with discrimination of latent infection and active tuberculosis products. Useful technical effect: the product of the invention can distinguish between active tuberculosis infection and latent infection, health and other non tuberculosis infection, the sensitivity and specificity of greater than 85%; patient sensitivity to HIV co infection is higher than 80%; the detection sensitivity to Mycobacterium tuberculosis culture positive patients of more than 70% children. The operation time is less than 8 hours.

【技术实现步骤摘要】
用于mRNA检测的试剂及用途
本专利技术属于检测
，具体为用于mRNA检测的试剂及用途。
技术介绍
结核病(Tuberculosis,TB)是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染性疾病，据世界卫生组织(WHO)估计，2014年全球新发结核病患者960万例，每年因结核病死亡的患者约150万人,目前我国是世界上仅次于印度的第二大结核病高负担国家，全国每年新发生活动性肺结核患者超过120万,死亡人数达13万。尽管目前已有有效的抗结核药物，但结核病仍然是当前感染性疾病的头号杀手。由于结合病患者症状不典型，结核病的预防控制主要依赖于早期的发现与治疗。然而，目前缺乏有效的早期筛查与快速诊断的方法。痰结核分枝杆菌微生物检查特异性高，是当前诊断活动性肺结核的金标准，但存在敏感度低，耗时长的缺点；结核分枝杆菌基因检测，虽然耗时短，但从痰标本进行的基因检测灵敏度却大不相同；细胞免疫学方法结核菌素皮试(TST)和结核菌干扰素释放试验(IGRA)均不能有效的区分活动性结核患者和结核菌潜伏感染者。针对现今诊断活动性结核病的检测技术存在严重不足，不能满足临床和结核病预防控制的要求，WHO在2010年12月提出新的结核诊断产品技术建议：1)为提高检测准确率，建议使用非痰液样本(如血液)进行检测。2)应对艾滋病联合感染的病人检查灵敏度大于80％，对结核菌培养阳性的儿童患者检测灵敏度大于66％3)操作简单。鉴于以上情况，为了满足临床和结核病预防控制的要求，本专利技术人进行了一些广泛的研究，提供了GBP1基因、DUSP3基因、KLF2基因、ID3基因、P2RY14基因、IFITM3基因、FCGR1A基因、GBP5基因或KLRB1基因9种可以作为血液结合诊断标志物的基因。可通过检测该9种基因的表达水平有效的区分活动性结核患者和结核菌潜伏感染者。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种试剂，能够对上述9种基因(GBP1基因、DUSP3基因、KLF2基因、ID3基因、P2RY14基因、IFITM3基因、FCGR1A、GBP5基因或KLRB1基因)进行采样与检测，即提供一种可作为判别结合潜伏感染和活动性结合的分子标志物。为解决上述技术问题，本专利技术通过如下技术方案实现：本专利技术提供用于mRNA检测的试剂，包括基因引物，基因引物包括：特异性扩增GBP1基因的引物、特异性扩增DUSP3基因的引物、特异性扩增KLF2基因的引物、特异性扩增ID3基因的引物、特异性扩增P2RY14基因的引物、特异性扩增IFITM3基因的引物、特异性扩增FCGR1A基因的引物、特异性扩增GBP5基因引物或特异性扩增KLRB1基因的引物。本试剂对的检测灵敏度和特异性大于85％；操作简便，检测时间小于8小时。进一步说，所述特异性扩增GBP1基因引物序列为：GBP1-F5’-TGGCAGAGCAACAGAAAATG-3’GBP1-R5’-GCTCACTGAGAAGGCTTCTATTT-3’；所述特异性扩增DUSP3基因引物序列为：DUSP3-F5’-CCTCAGCGCTTACTTTGAAAGG-3’DUSP3-R5’-GAGCACCCGGCCATTCT-3’；所述特异性扩增KLF2基因引物序列为：KLF2-F5’-CGGCAAGACCTACACCAAGAG-3’KLF2-R5’-CGTCTGAGCGCGCAAACT-3’；所述特异性扩增ID3基因引物序列为：ID3-F5’-CCCTGGACCCCCTGATG-3’ID3-R5’-CCTTTTGTCGTTGGAGATGACA-3’；所述特异性扩增P2RY14基因引物序列为：P2RY14-F5’-AATCTTAAAAGGCCTCTGCCTT-3’P2RY14-R5’-AGGTTCTGAGAGCAGGATTCAT-3’；所述特异性扩增IFITM3基因引物序列为：IFITM3-F5’-CGTCTGGTCCCTGTTCAACAC-3’IFITM3-R5’-CCATCTTCCTGTCCCTAGACTTC-3’；所述特异性扩增FCGR1A基因引物序列为：FCGR1A-F5’-AAGCGCAGCCCTGAGTTG-3’FCGR1A-R5’-TGCCAGATAGAAAAGGACATGAAA-3’；所述特异性扩增GBP5基因引物序列为：GBP5-F5’-GCTGGCAGAGCAACAGAAAA-3’GBP5-R5’-CGTGCTGGAGCTCACTGAGA-3’所述特异性扩增KLRB1基因引物序列为：KLRB1-F5’-TCTTCCTCGGGATGTCTGTCA-3’KLRB1-R5’-GACAAGGAGAATAATCCCAGCACAG-3’。进一步说，本用于实时荧光定量PCR判别法的试剂，还包括4种内参引物，分别为：特异性扩增GAPDH内参引物、特异性扩增ACTB内参引物、特异性扩增B2M内参引物和特异性扩增RPLP0内参引物。进一步说，所述特异性扩增GAPDH内参引物为：GAPDH-F5’-TTTGGTATCGTGGAAGGACT-3’GAPDH-R5’-CATCACGCCACAGTTTCCC-3’所述特异性扩增ACTB内参引物为：ACTB-F5’-CCTGGCACCCAGCACAAT-3’ACTB-R5’-GCCGATCCACACGGAGTACT-3’所述特异性扩增B2M内参引物为：B2M-F5’-TCTCGCTCCGTGGCCTTAG-3’B2M-R5’-CTGCTGGATGACGTGAGTAAACC-3’所述特异性扩增RPLP0内参引物为：RPLP0-F5’-TGAAGTGCTTGATATCACAGAGGAA-3’RPLP0-R5’-AGACAGACACTGGCAACATTGC-3’。进一步说，用于mRNA检测的试剂的用途：用于制备判别结合潜伏性感染和活动性结核的产品。进一步说，用于mRNA检测的试剂的用途：用于制备采用实时荧光定量PCR判别法的产品。进一步说，用于mRNA检测的试剂的用途：用于制备采用实时荧光定量PCR判别法的试剂盒，该试剂盒可以检测GBP1基因、DUSP3基因、KLF2基因、ID3基因、P2RY14基因、IFITM3基因、GBP5基因或KLRB1基因的表达情况，从而为诊断是否患有活动性结核病提供参考信息。有益的技术效果本专利技术提供了一种试剂，能够精确且同时对GBP1基因、DUSP3基因、KLF2基因、ID3基因、P2RY14基因、IFITM3基因、FCGR1A基因、GBP5基因或KLRB1基因进行采样、表征和锁定特异标志基因，使结核诊断更加准确快速。采用本专利技术的试剂可制备用于判别结合潜伏感染和活动性结合的产品。本专利技术产品能够区分活动性结核感染与潜伏感染、健康人群及其他非结核感染者，检测灵敏度和特异性大于85％；对艾滋病病毒联合感染的病人检查灵敏度大于80％；对结核菌培养阳性的儿童患者检测灵敏度大于70％。操作简便，检测时间小于8小时。采用本专利技术而制成的产品包括：用实时荧光定量PCR检测判别结合潜伏感染和活动性结合的产品。采用本专利技术(并采用实时荧光定量PCR方法)制备判别结合潜伏感染和活动性结合病的产品时，至少优选包括一对特异性扩增GBP1基因的引物、特异性扩增DUSP3基因的引物、特异性扩增KLF2基因的引物、特本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于mRNA检测的试剂，包括基因引物，其特征在于，基因引物包括：特异性扩增GBP1基因的引物、特异性扩增DUSP3基因的引物、特异性扩增KLF2基因的引物、特异性扩增ID3基因的引物、特异性扩增P2RY14基因的引物、特异性扩增IFITM3基因的引物、特异性扩增FCGR1A基因的引物、特异性扩增GBP5基因引物或特异性扩增KLRB1基因的引物；本试剂对的检测灵敏度和特异性大于85％；操作简便，检测时间小于8小时。

【技术特征摘要】
1.用于mRNA检测的试剂，包括基因引物，其特征在于，基因引物包括：特异性扩增GBP1基因的引物、特异性扩增DUSP3基因的引物、特异性扩增KLF2基因的引物、特异性扩增ID3基因的引物、特异性扩增P2RY14基因的引物、特异性扩增IFITM3基因的引物、特异性扩增FCGR1A基因的引物、特异性扩增GBP5基因引物或特异性扩增KLRB1基因的引物；本试剂对的检测灵敏度和特异性大于85％；操作简便，检测时间小于8小时。2.根据权利要求1所述的用于mRNA检测的试剂，其特征在于，所述特异性扩增GBP1基因引物序列为：GBP1-F5’-TGGCAGAGCAACAGAAAATG-3’GBP1-R5’-GCTCACTGAGAAGGCTTCTATTT-3’；所述特异性扩增DUSP3基因引物序列为：DUSP3-F5’-CCTCAGCGCTTACTTTGAAAGG-3’DUSP3-R5’-GAGCACCCGGCCATTCT-3’；所述特异性扩增KLF2基因引物序列为：KLF2-F5’-CGGCAAGACCTACACCAAGAG-3’KLF2-R5’-CGTCTGAGCGCGCAAACT-3’；所述特异性扩增ID3基因引物序列为：ID3-F5’-CCCTGGACCCCCTGATG-3’ID3-R5’-CCTTTTGTCGTTGGAGATGACA-3’；所述特异性扩增P2RY14基因引物序列为：P2RY14-F5’-AATCTTAAAAGGCCTCTGCCTT-3’P2RY14-R5’-AGGTTCTGAGAGCAGGATTCAT-3’；所述特异性扩增IFITM3基因引物序列为：IFITM3-F5’-CGTCTGGTCCCTGTTCAACAC-3’IFITM3-R5’-CCATCTTCCTGTCCCTAGACTTC-3’；所述特异性扩增FCGR1A基因引物序列为：FCGR1A-F5’-AAGCGCAGCCCTGAGTTG-3’FCGR1A-R5’-TGCCAGATAGAAAAGGACATGAAA-3’；所述特异性扩增GB...

【专利技术属性】
技术研发人员：喻德华，毛玉，
申请(专利权)人：深圳优圣康医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44