一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法技术

本发明专利技术公开了一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：在接头制作的接头引物P7上引入能够阻止聚合酶延伸的Spacer修饰；在接头延伸步骤，聚合酶遇到P7模板链的Spacer位点后即终止延伸，留下一段5’突出末端；接下来的酶切步骤，内切酶去除包括Spacer位点在内的突出末端，产生完整的接头；而酶切不充分残留的未被酶切接头，仍然保留较长5’突出末端。

Improved method for making random label joint for two generation sequencing

The invention discloses an improved two generation sequencing method of making joint with random label, which is characterized in that: the introduction of Spacer modified to prevent the polymerase extension in joint P7 joint on the primer extension step; in the joint, Spacer met P7 template site polymerase chain after termination of extension, leaving a 5 'protruding end the next step; restriction endonuclease, Spacer locus, including removal of protruding ends, resulting in complete digestion and joint; inadequate residue has not been digested joints, still retain longer 5' protruding end.

【技术实现步骤摘要】
一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法
本专利技术涉及核酸测序
，具体涉及一种用于改进的二代测序用随机标签接头的工艺优化。
技术介绍
随着技术的成熟以及成本的降低，二代测序因其测序通量上的优势，在科研以及临床转化领域正在逐渐取代传统的一代测序以及常规的PCR分子检测方法。二代测序应用于临床目前还面临许多问题与挑战，其中一个突出问题就是测序较高的错误率。目前应用较广的二代测序平台主要有Illumina平台(HiSeq、MiSeq、NextSeq等)和Life的IonTorrent平台(PGM和Proton及衍生系列)，两类二代测序的的测序错误率还较高(Illumina平台0.1％，IonTorrent平台1％)。对于以肿瘤细胞突变为代表的体细胞突变(somaticmutation)检测来讲，由于肿瘤细胞之间的异质性，肿瘤样本中突变位点的比例可能非常低(1％)；而在液态活检中，肿瘤游离DNA的突变率甚至低于0.1％。由于较高的测序错误率背景，常规的二代测序平台无法检测出这些突变。目前主要通过分子标签(UMIuniquemoueculeidentifier)的方法来克服这一问题。分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：在接头制作的接头引物P7上引入能够阻止聚合酶延伸的Spacer修饰；在接头延伸步骤，聚合酶遇到P7模板链的Spacer位点后即终止延伸，留下一段5’突出末端；接下来的酶切步骤，内切酶去除包括Spacer位点在内的突出末端，产生完整的接头；而酶切不充分残留的未被酶切接头，仍然保留较长5’突出末端。

【技术特征摘要】
1.一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：在接头制作的接头引物P7上引入能够阻止聚合酶延伸的Spacer修饰；在接头延伸步骤，聚合酶遇到P7模板链的Spacer位点后即终止延伸，留下一段5’突出末端；接下来的酶切步骤，内切酶去除包括Spacer位点在内的突出末端，产生完整的接头；而酶切不充分残留的未被酶切接头，仍然保留较长5’突出末端。2.如权利要求1所述的一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：Spacer修饰的种类包括dSpacer，C3Spacer，C6Spacer，C12Spacer，Spacer9或Spacer18等。3.如权利要求1所述的一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：Spacer修饰的个数为1个-5个；2个以上的Spacer跟第一个Spacer串联，或分布于突出末端序列中。4.如权利要求1所述的一种改进的二代测序用随机标签接头制作方法，其特征在于：随机标签接头包括随机标签接头A、随机标签接头B和随机标签接头C，随机标签接头A、随机标签接头B和随机标签接头C分别由接头引物P5分别与Spacer修饰的接头引物P7-A、接头引物P7-B和接头引物P7-C合成而得到，其中：接头引物P5为SEQIDNO：01：ACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT接头引物P7-A为FFFFF(Spacer)EEEEEJJJJJNNNNNNNNNNNN连接在SEQIDNO：02的5’端所得；SEQIDNO：02：AGATCGGAAGAGCACACGTCTGAACTCCAGTCAC接头引物P7-B为FFFFF(Spacer)EEEEEKKKKKNNNNNNNNNNNN连接在SEQIDNO：02的5’端所得；接头引物P7-C为FFFFF(Spacer)EEEEELLLLLNNNNNNNNNNNN连接在SEQIDNO：02的5’端所得；所述FFFFF为突出末端序列，Spacer为Spacer修饰位点，EE...

【专利技术属性】
技术研发人员：金保雷，李旭超，施伟杰，葛会娟，阮力，郑立谋，
申请(专利权)人：厦门艾德生物医药科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35