抗羊IgM μ链单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途制造技术

本发明专利技术公开了抗羊IgMμ链单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途。本发明专利技术以分泌型IgM蛋白为靶蛋白，克隆获得IgMμ链基因的完整开放阅读框，亚克隆至原核表达载体，利用镍柱纯化重组蛋白，并对6‑8周龄的雌性BALB/c小鼠进行免疫，当抗体滴度在1∶10000以上时，对免疫小鼠脾细胞的单细胞悬液与对数生长期的骨髓瘤细胞进行融合，筛选获得分泌抗羊IgMμ链的单克隆抗体的杂交瘤细胞株；向6‑8周龄的经产BALB/c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，注射7天左右收集腹水，protein G/A琼脂糖珠纯化腹水，获得纯度较高的抗羊IgMμ链的单克隆抗体。本发明专利技术提供的单克隆抗体效价高，可用于羊IgM免疫球蛋白的检测，并且有望实现对多种羊病的早期筛查与监测，具有广泛的应用范围和社会需求。

Sheep IgM mu chain monoclonal antibody, hybridoma cell line secreting the antibody and uses thereof

The invention discloses a sheep IgM mu chain monoclonal antibody, a hybridoma cell line secreting the antibody and the use thereof. The secreted IgM protein as the target protein, the cloned IgM gene chain complete open reading frame was subcloned into prokaryotic expression vector, the recombinant protein was purified by nickel column, and the 6 8 week old female BALB/c mice were immunized, when the antibody titer in 1: 10000, fusion the spleen cells of mice immunized with single cell suspension and the logarithmic phase of myeloma cells, screening of hybridoma cell lines secreting monoclonal antibody against sheep IgM chain; 6 to 8 weeks of age multiparous BALB/c mice by intraperitoneal injection of hybridoma cells injected for 7 days to collect ascites, protein G/A agarose Zhuhai purified from ascites monoclonal antibodies, anti goat IgM chain with high purity. The monoclonal antibody provided by the invention has high potency and can be used for detecting the IgM immunoglobulin of sheep, and is hopeful to realize early screening and monitoring for a variety of sheep diseases, and has wide application range and social demand.

【技术实现步骤摘要】
抗羊IgMμ链单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途
本专利技术涉及一种抗羊IgMμ链单克隆抗体，还涉及分泌该抗体的杂交瘤细胞株及其用途，属于生物

技术介绍
IgM是免疫球蛋白之一，分泌型IgM为五聚体，是分子量最大的Ig(约900KD)，主要存在于血液中，占血清免疫球蛋白总量的5％～10％。IgM是抗原初次刺激机体后体液免疫应答中最早出现的抗体，是机体抗感染的“先锋部队”；具有很强的细胞毒活性和细胞溶解活性，是抗血管内感染的第一线抗体，IgM抗体一般为保护性抗体，对防止菌血症起主要作用。在生物进化中，IgM也是出现最早的Ig。在胚胎发育晚期，胎儿就开始具有产生IgM的能力，但是IgM不能通过胎盘。一旦发生感染，机体就快速产生IgM，但持续时间不长，IgM的半衰期短，仅5.1天，而且在感染的早期即已产生。此外，由于IgM在结合补体和活化补体后可通过补体活化片段发挥调理吞噬的作用的能力均较IgG强。因此，血清中检出特异性IgM抗体水平标志着机体近期发生了感染，对某些传染病的早期诊断具有较高的临床价值。随着科技的发展，流通方式日趋走向多元化和频繁化，造成多种传染病跨地区、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株能够稳定分泌抗羊型IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为5D1，其特征在于所述的杂交瘤细胞株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为:CGMCC No.11283。

【技术特征摘要】
1.一株能够稳定分泌抗羊型IgMμ链单克隆抗体的杂交瘤细胞株，命名为5D1，其特征在于所述的杂交瘤细胞株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，其菌种保藏编号为:CGMCCNo.11283。2.一种由权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒙学莲，朱学亮，窦永喜，才学鹏，张志东，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃,62