一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法，将合成的Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK的基因片段插入到pLent‑C‑GFP载体将所述质粒转染293T细胞，包装成携带有Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK编码基因的慢病毒，将所述携带有Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK编码基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞，得到安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰的T细胞，该发明专利技术豁免正常细胞，在保证疗效的同时降低“脱靶效应”，提高安全。

【技术实现步骤摘要】
一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法及其应用
本专利技术涉及及生物与新医药
，更具体的说，是一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法及其应用。
技术介绍
癌胚抗原(carcinoembryonicantigen，CEA)是一种高表达多种恶性肿瘤的酸性糖蛋白，如表达95％以上的结肠直肠癌，90％左右的胃癌、胰腺癌，80％以上的非小细胞性肺癌，50％左右的乳腺癌。因此CEA已被公认为肿瘤标志物之一，使之成为肿瘤靶向治疗和诊断的最佳靶位之一。传统的治疗CEA肿瘤方法包括手术、放疗、化疗等远不能满足广大癌症患者的要求，每年因CEA肿瘤而死亡的人数是全部肿瘤死亡人数的60％以上，是人类健康的严重威胁。而以癌胚抗原嵌合抗原受体(chimericantigenreceptorCAR)修饰T细胞(CAR-T)过继性地靶向免疫治疗已成为CEA肿瘤治疗的富有希望的疗法。目前CAR-T技术已在急性白血病、非霍奇金淋巴瘤、胰腺癌、乳腺癌、肾癌、结肠癌等多种恶性肿瘤的治疗上有着显著的疗效，但也引起了“脱靶效应”和“细胞因子风暴”等不良反应。因此，在保证CAR-T细胞治疗效果的前提本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法，其特征在于：将Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK核苷酸合成，将合成的Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK的基因片段插入到pLent‑C‑GFP载体(Invitrogen)NotI‑AsiSI位点，经测序正确后，构建成质粒，将所述质粒转染293T细胞，包装成携带有Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑HSV‑TK编码基因的慢病毒，将所述携带有Leader‑scFv(CEA)‑CD8‑CD137‑CD3ζ‑T2A‑H...

【技术特征摘要】
1.一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法，其特征在于：将Leader-scFv(CEA)-CD8-CD137-CD3ζ-T2A-HSV-TK核苷酸合成，将合成的Leader-scFv(CEA)-CD8-CD137-CD3ζ-T2A-HSV-TK的基因片段插入到pLent-C-GFP载体(Invitrogen)NotI-AsiSI位点，经测序正确后，构建成质粒，将所述质粒转染293T细胞，包装成携带有Leader-scFv(CEA)-CD8-CD137-CD3ζ-T2A-HSV-TK编码基因的慢病毒，将所述携带有Leader-scFv(CEA)-CD8-CD137-CD3ζ-T2A-HSV-TK编码基因的慢病毒感染单核细胞诱导的异质T淋巴细胞，得到安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰的T细胞。2.如权利要求1所述的一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法，其特征在于：所述Leader-scFv(CEA)-CD8-CD137-CD3ζ-T2A-HSV-TK的基因片段为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。3.如权利要求1所述的一种安全型抗CEA嵌合抗原受体修饰T细胞的制备方法，其特征在于，所述单核细胞诱导的异质T淋巴细胞制备如下：取患者自体外周血，分离外周血单个核细胞，用重组干扰素...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明录，强邦明，张传鹏，姜夕锋，王立新，金海锋，韩国英，卢永灿，韩庆梅，万磊，
申请(专利权)人：山东兴瑞生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37