一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR-T治疗载体及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR‑T治疗载体，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子(SEQ ID NO.14)、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体；OCTS嵌合受体结构域包括：CD8 leader嵌合受体信号肽(SEQ ID NO.15)、PSMA单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.16)、PSMA单链抗体重链VH(SEQ ID NO.17)、PDL1单链抗体轻链VL(SEQ ID NO.18)、PDL1单链抗体重链VH(SEQ ID NO.19)、抗体内铰链Inner‑Linker(SEQ ID NO.20)、单链抗体间铰链Inter‑Linker(SEQ ID NO.21)、CD8 Hinge嵌合受体铰链(SEQ ID NO.22)、CD8 Transmembrane嵌合受体跨膜区(SEQ ID NO.23)、TCR嵌合受体T细胞激活域(SEQ ID NO.26)以及嵌合受体共刺激因子区域。此外，本发明专利技术还公开了该载体的构建方法及其在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。

【技术实现步骤摘要】
一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR-T治疗载体及其构建方法和应用
本专利技术属于医学生物领域，具体涉及一种载体，尤其涉及一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR-T治疗载体。此外，本专利技术还涉及该载体的构建方法和应用。
技术介绍
肿瘤免疫治疗的理论基础是免疫系统具有识别肿瘤相关抗原、调控机体攻击肿瘤细胞(高度特异性的细胞溶解)的能力。1950年代，Burnet和Thomas提出了“免疫监视”理论，认为机体中经常会出现的突变的肿瘤细胞可被免疫系统所识别而清除，为肿瘤免疫治疗奠定了理论基础[BurnetFM.Immunologicalaspectsofmalignantdisease.Lancet,1967；1:1171-4]。随后，各种肿瘤免疫疗法包括细胞因子疗法、单克隆抗体疗法、过继免疫疗法、疫苗疗法等相继应用于临床。2013年一种更先进的肿瘤免疫疗法---CAR-T疗法成功用于临床，并表现了前所未有的临床疗效。CAR-T，全称是ChimericAntigenReceptorT-CellImmunotherapy，嵌合抗原受体T细胞免疫疗法。该疗法是通过转基因的手段，将启动子、抗原识本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR‑T治疗载体，其特征在于，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体；所述慢病毒骨架质粒包括：用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQ ID NO.1所示；用于质粒复制的原核复制子pUC Ori序列，如SEQ ID NO.2所示；用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40 Ori序列，如SEQ ID NO.3所示；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；ZsGreen1绿色荧光蛋白，如SEQ ID NO.11所示；IRES核糖体结合序列，如SEQ ID NO.12所示；用于增强转基因的表达效率的eWP...

【技术特征摘要】
1.一种基于OCTS技术的前列腺癌CAR-T治疗载体，其特征在于，包括慢病毒骨架质粒、人EF1α启动子、OCTS嵌合受体结构域和PDL1单链抗体；所述慢病毒骨架质粒包括：用于目的菌株大量扩增的含氨苄青霉素抗性基因AmpR序列，如SEQIDNO.1所示；用于质粒复制的原核复制子pUCOri序列，如SEQIDNO.2所示；用于增强真核细胞内的复制的病毒复制子SV40Ori序列，如SEQIDNO.3所示；用于慢病毒包装的慢病毒包装顺式元件；ZsGreen1绿色荧光蛋白，如SEQIDNO.11所示；IRES核糖体结合序列，如SEQIDNO.12所示；用于增强转基因的表达效率的eWPRE增强型土拨鼠乙肝病毒转录后调控元件，如SEQIDNO.13所示；所述人EF1α启动子的序列如SEQIDNO.14所示；所述OCTS嵌合受体结构域包括：如SEQIDNO.15所示的CD8leader嵌合受体信号肽、如SEQIDNO.16所示的PSMA单链抗体轻链VL、如SEQIDNO.17所示的PSMA单链抗体重链VH、如SEQIDNO.18所示的PDL1单链抗体轻链VL、如SEQIDNO.19所示的PDL1单链抗体重链VH、如SEQIDNO.20所示的抗体内铰链Inner-Linker、如SEQIDNO.21所示的单链抗体间铰链Inter-Linker、如SEQIDNO.22所示的CD8Hinge嵌合受体铰链、如SEQIDNO.23所示的CD8Transmembrane嵌合受体跨膜区、如SEQIDNO.26所示的TCR嵌合受体T细胞激活域以及嵌合受体共刺激因子区域；所述嵌合受体共刺激因子区域选自4-1BB、ICOS、CD27、OX40、CD28、MYD88、IL1R1、CD70、TNFRSF19L、TNFRSF27、TNFRSF1OD、TNFRSF13B、TNFRSF18、CD134等肿瘤坏死因子超家族中的任意一种或多种的组合。2.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述慢病毒包装顺式元件采用第二代慢病毒载体或第三代慢病毒载体；所述第二代慢病毒载体包括：如SEQIDNO.5所示的慢病毒5terminalLTR、如SEQIDNO.6所示的慢病毒3terminalSelf-InactivatingLTR、如SEQIDNO.7所示的Gag顺式元件、如SEQIDNO.8所示的RRE顺式元件、如SEQIDNO.9所示的env顺式元件、如SEQIDNO.10所示的cPPT顺式元件；所述第三代慢病毒载体包括：如SEQIDNO.5所示的慢病毒5terminalLTR、如SEQIDNO.6所示的慢病毒3terminalSelf-InactivatingLTR、如SEQIDNO.7所示的Gag顺式元件、如SEQIDNO.8所示的RRE顺式元件、如SEQIDNO.9所示的env顺式元件、如SEQIDNO.10所示的cPPT顺式元件，以及如SEQIDNO.4所示的RSV启动子。3.如权利要求1所述的载体，其特征在于，所述如SEQIDNO.16所示的PSMA单链抗体轻链VL、如SEQIDNO.17所示的PSMA单链抗体重链VH、如SEQIDNO.18所示的PDL1单链抗体轻链VL、如SEQIDNO.19所示的PDL1单链抗体重链VH、如SEQIDNO.20所示的抗体内铰链Inner-Linker、如SEQIDNO.21所示的单链抗体间铰链Inter-Linker采用串联连接方式或者转角连接方式；所述串联连接方式具体为：PDL1单链抗体轻链VL与PSMA单链抗体轻链VL采用单链抗体间铰链Inter-Linker连接，PDL1单链抗体轻链VL与PDL1单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接，PSMA单链抗体轻链VL与PSMA单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接；所述转角连接方式具体为：PSMA单链抗体轻链VL与PSMA单链抗体重链VH采用抗体内铰链Inner-Linker连接，PDL1单链抗体轻链VL与PSMA单链抗体重链VH采用单链抗体间铰链Inter-...

【专利技术属性】
技术研发人员：祁伟，俞磊，康立清，林高武，余宙，
申请(专利权)人：上海优卡迪生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海,31