利用互相猝灭的荧光标记物的基于纳米孔的聚合物分析制造技术

本发明专利技术涉及用于确定移位穿过纳米孔的聚合物的单体序列的方法。聚合物的单体被荧光标记物标记以使在游离溶液中毗邻单体的荧光标记物基本上互相猝灭，并且其中纳米孔将其孔洞内的荧光标记物束缚为束缚状态，其中没有可检测荧光信号能够生成。通过在每个单体离开纳米孔并且从束缚状态转变成和毗邻的荧光标记物的猝灭状态时激发其荧光标记物，荧光信号可由离开的荧光标记物生成以允许其单体被鉴定，因此允许当聚合物移位穿过纳米孔时单体序列被从荧光信号的序列确定。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】利用互相猝灭的荧光标记物的基于纳米孔的聚合物分析背景在过去十年间开发的DNA测序技术已经彻底改革了生物科学，例如Lemer等人，TheAuk,127:4-15(2010)；Metzker,NatureReviewsGenetics,11:31-46(2010)；Holt等人，GenomeResearch,18:839-846(2008)；并且具有彻底改革医疗实践的许多方面的可能性，例如Voelkerding等人,ClinicalChemistry,55:641-658(2009)；Anderson等人,Genes,1:38-69(2010)；Freeman等人,GenomeResearch,19:1817-1824(2009)；Tucker等人,Am.J.HumanGenet.,85:142-154(2009)。然而，要实现这种可能性，仍然存在许多必须解决的挑战，包括减少每次运行测序的成本、简化样品制备、减少运行时间、增加读段长度、改善数据分析等等，例如，Baker,NatureMethods,7:495-498(2010)；Kircher等人,Bioessays,32:524-536本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种确定至少一种多核苷酸的核苷酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：使至少一个单链多核苷酸移位穿过纳米孔，其中所述单链多核苷酸的核苷酸被荧光标记物标记以使毗邻核苷酸的荧光标记物在游离溶液中处于猝灭状态，并且其中所述纳米孔迫使所述纳米孔中的所述荧光标记物进入其中基本上没有可检测信号生成的束缚状态；在每个核苷酸离开所述纳米孔后并且在与毗邻核苷酸形成猝灭状态之前激发每个核苷酸的荧光标记物；测量由离开的荧光标记物生成的荧光信号以鉴定所述荧光标记物附接的核苷酸；以及由荧光信号的序列确定所述多核苷酸的核苷酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.10 US 62/062,2561.一种确定至少一种多核苷酸的核苷酸序列的方法，所述方法包括以下步骤：使至少一个单链多核苷酸移位穿过纳米孔，其中所述单链多核苷酸的核苷酸被荧光标记物标记以使毗邻核苷酸的荧光标记物在游离溶液中处于猝灭状态，并且其中所述纳米孔迫使所述纳米孔中的所述荧光标记物进入其中基本上没有可检测信号生成的束缚状态；在每个核苷酸离开所述纳米孔后并且在与毗邻核苷酸形成猝灭状态之前激发每个核苷酸的荧光标记物；测量由离开的荧光标记物生成的荧光信号以鉴定所述荧光标记物附接的核苷酸；以及由荧光信号的序列确定所述多核苷酸的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的方法，其中所述多核苷酸的核苷酸被FRET对的第二成员标记，每个第二成员产生指示其所附接的核苷酸的FRET信号，并且其中所述多核苷酸的核苷酸按顺序经过与所述纳米孔毗邻放置的所述FRET对的第一成员，以使每个第二成员在离开所述纳米孔后在所述FRET对的所述第一成员的FRET距离之内通过；并且其中所述激发的步骤包括将所述第一成员暴露于第一波长的光束以使FRET在处于所述FRET距离内的所述FRET对的所述第一成员和第二成员之间发生，以生成指示离开所述纳米孔的核苷酸的第二波长的FRET信号。3.如权利要求2所述的方法，其中所述纳米孔被布置在固相膜中并且其中所述FRET对的所述第一成员附接至毗邻所述纳米孔的所述固相膜。4.如权利要求2所述的方法，其中所述纳米孔是蛋白质纳米孔并且其中所述FRET对的所述第一成员附接至所述蛋白质纳米孔。5.如权利要求2至A4所述的方法，其中所述FRET对的所述第一成员是供体并且所述FRET对的所述第二成员是受体。6.如权利要求5所述的方法，其中所述供体是量子点。7.如权利要求5所述的方法，其中所述受体是荧光有机染料。8.如权利要求5所述的方法，其中所述暴露的步骤包括将所述供体暴露于来自于全内反射激发的倏逝波。...

【专利技术属性】
技术研发人员：马丁·胡伯，
申请(专利权)人：昆塔波尔公司，
类型：发明
国别省市：美国,US