结合AXL的抗体制造技术

本发明专利技术涉及抗‑AXL抗体、免疫偶联物、组合物以及使用此类抗‑AXL抗体、免疫偶联物或组合物治疗癌症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合AXL的抗体专利
本专利技术涉及结合AXL的抗体、免疫偶联物、包含此类抗体或免疫偶联物的组合物、以及所述抗体和免疫偶联物的用途。
技术介绍
哺乳动物受体酪氨酸激酶(RTK)的TAM亚族由AXL、Tyro3和Mer组成。AXL是104-140kDa的跨膜蛋白，其具有转化能力[1]。AXL可以通过结合其配体，维生素K依赖性生长停滞特异因子6(Gas6)，而被活化。Gas6结合至AXL导致AXL二聚化、自磷酸化以及后续的细胞内信号通路的活化，如PI3K/AKT、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、STAT和NF-κB级联[2]。在癌症细胞中，AXL提高肿瘤细胞运动性、侵袭、迁移，并且涉及上皮间质转化(EMT)[3]。此外，已经认为AXL表达涉及对化学疗法和靶向疗法的抵抗力，如表皮生长因子受体(EGFR)靶向疗法(Wilson2014,Brand2013,Zhang2012)或B-raf(BRAF)通路的抑制剂(Muller,2014)。TAM受体家族成员的细胞外结构域由两个N-末端免疫球蛋白(Ig)样结构域和两个纤维连接蛋白III型(FNIII)重复序列的组合构成[1]。配体Gas6结合至AXL的Ig样结构域I和II[14]。已经在多种癌症中报道了AXL的上调，包括胃癌、前列腺癌、卵巢癌和肺癌[1]。此外，AXL在乳腺癌和胰腺癌中过表达，并且与更高的转移频率以及较差的总体存活率显著相关[2]。RTK的靶向抑制可能与抗肿瘤和/或转移疗法同样有效。此类对AXL和/或配体Gas6的靶向抑制包括小分子和抗-AXL抗体[3]。已经描述了抗-AXL抗体通过下调受体表达来减弱非小细胞肺癌异种移植的体内生长，从而降低肿瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡[4]。此外，已经描述了多种阻断配体Gas6与AXL结合的单克隆抗体[2]、[5]和[7]。之前已经描述了抗-AXL抗体[8]-[13]。然而，依然需要具有改善的抗肿瘤活性的抗-AXL抗体。专利技术概述本专利技术的目标是提供抗-AXL抗体。因此，在一个方面，本专利技术涉及结合AXL的抗体，其中所述抗体不与配体生长停滞特异6(Gas6)竞争结合AXL。在另一方面，本专利技术涉及双特异性抗体，其包含根据本专利技术的抗体的第一结合区，和结合不同于所述第一抗原结合区的靶标或表位的第二结合区。在另一方面，本专利技术涉及免疫偶联物，其包含根据本专利技术的抗体或双特异性抗体，和治疗部分，如细胞毒性剂、化疗药物、细胞因子、免疫抑制剂、抗生素或放射性同位素。在另一方面，本专利技术涉及组合物，其包含根据本专利技术的抗体、双特异性抗体或免疫偶联物。在另一方面，本专利技术涉及药物组合物，其包含根据本专利技术的抗体、双特异性抗体或免疫偶联物，以及药学上可接受的载体。在另一方面，本专利技术涉及核酸构建体，其编码根据本专利技术的抗体。在另一方面，本专利技术涉及表达载体，其包含一个或多个根据本专利技术的核酸构建体。在另一方面，本专利技术涉及宿主细胞，其包含根据本专利技术的载体。在另一方面，本专利技术涉及杂交瘤，其生产根据本专利技术的抗体。在另一方面，本专利技术涉及根据本专利技术的抗体、双特异性抗体或免疫偶联物用作药物。在另一方面，本专利技术涉及根据本专利技术的抗体、双特异性抗体或免疫偶联物用于治疗癌症。在另一方面，本专利技术涉及治疗癌症的方法，其包括向有需要的个体施用根据本专利技术的抗体、双特异性抗体、免疫偶联物、组合物或药物组合物。在另一方面，本专利技术涉及诊断疾病的方法，所述疾病的特征在于表达AXL的细胞的涉入或积聚，所述方法包括向个体施用根据本专利技术的抗体、双特异性抗体、免疫偶联物、组合物或药物组合物，任选地其中所述抗体用可检测试剂标记，并且其中表达AXL的细胞的量与疾病相关或指示该疾病。在另一方面，本专利技术涉及用于抑制表达AXL的肿瘤细胞的生长和/或增殖的方法，其包括向有需要的个体施用根据本专利技术的抗体、双特异性抗体、免疫偶联物、组合物或药物组合物。在另一方面，本专利技术涉及用于生产根据本专利技术的抗体的方法，所述方法包括步骤：a)培养根据本专利技术的宿主细胞或杂交瘤，以及b)从培养液中纯化所述抗体。在另一方面，本专利技术涉及诊断组合物，其包含根据本专利技术的抗体或双特异性抗体。在另一方面，本专利技术涉及用于检测样品中AXL抗体或表达AXL的细胞的存在的方法，其包括步骤：a)使所述样品与根据本专利技术的抗体、双特异性抗体、免疫偶联物接触（在允许所述抗体、双特异性抗体或免疫偶联物与AXL之间形成复合物的条件下）；以及b)分析是否已经形成复合物。在另一方面，本专利技术涉及用于检测样品中AXL抗原或表达AXL的细胞的存在的试剂盒，其包括：i)根据本专利技术的抗体、双特异性抗体或免疫偶联物；以及ii)所述试剂盒的使用说明。在另一方面，本专利技术涉及抗独特型抗体，其结合根据本专利技术的抗-AXL抗体。附图简述图1：抗-AXL抗体与用以下转染的HEK293细胞的结合曲线：(A)人AXL-ECD，(B)食蟹猴AXL-ECD，或(C)小鼠AXL-ECD。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)，如实施例2中所述。图2：抗-AXL抗体与小鼠-人AXL嵌合体的结合如实施例3中所述进行。测试了以下智人AXL(hsAXL)和小家鼠AXL(mmAXL)嵌合蛋白：(A)hsAXL和模拟物，(B)hsAXL-mmECD，(C)hsAXL-mmIg1，(D)hsAXL-mmIg2，(E)hsAXL-mmFN1，(F)hsAXL-mmFN2。图3：在A431细胞中，抗-AXL抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。如实施例4中所述测定了在A431细胞中由抗-AXL抗体引起的抗体依赖性细胞介导的细胞毒性。图4：AXL抗体-药物偶联物(AXL-ADC)的结合特性。如实施例5中所述测定了AXL-ADC与用人AXL瞬时转染的HEK293T细胞的结合。所显示的数据是一个代表性实验的平均荧光强度(MFI)。图5：由AXL抗体-药物偶联物诱导的体外细胞毒性。如实施例6中所述测定了由AXL抗体-药物偶联物诱导的细胞毒性。图6：允许结合AXL的抗体VH和VL变体。比对了具有相同VL或VH区的抗体，并且分别鉴定了VH(图A-D)或VL(图E)序列中的差异并在图中用方框标明。CDR区用下划线标明。图7：如实施例8中所述测定了LCLC-103H细胞中由ADC诱导的细胞毒性。图8：如实施例9中所述，在治疗性LCLC-103H异种移植模型中MMAE偶联的AXL抗体的抗肿瘤活性。图9：使用AXL单克隆抗体的集合如实施例10中所述进行冷冻PAXF1657肿瘤切片(胰腺癌PDX模型)的免疫组织化学染色。图10：(A)用AXL-ADC治疗性治疗后的平均肿瘤尺寸（PAXF1657模型）。未偶联的AXLHumab(C)和未靶向的ADC(D)未显示出抗肿瘤活性，表明AXL-ADC的治疗能力依赖于MMAE的细胞毒性活性并且依赖于靶向结合，误差线表示S.E.M.。图11：抗-AXL抗体与小鼠-人AXL嵌合体的结合如实施例11中所述进行。测试了以下智人AXL(hsAXL)和小家鼠AXL(mmAXL)嵌合蛋白：(A)hsAXL和模拟物，(B)hsAXL-mmECD，(C)hsAXL-mmIg1，(D)hsAXL-mmIg2，(E)hsAXL-mmFN1，(F)hsAXL-mmFN2。图12：人Gas6(hGas6)与A431细胞的本文档来自技高网...

【技术保护点】
结合AXL的抗体，其中所述抗体不与配体生长停滞特异6(Gas6)竞争结合AXL。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.07.11 DK PA201400380;2014.09.01 DK PA201400481.结合AXL的抗体，其中所述抗体不与配体生长停滞特异6(Gas6)竞争结合AXL。2.根据权利要求1的抗体，其中在存在Gas6的情况下的与AXL的最大抗体结合为在不存在Gas6的情况下的结合的至少90%，如至少95%，如至少97%，如至少99%，如至少100%，如通过实施例2中公开的方法所测定的。3.根据权利要求1至2的抗体，其中在存在Gas6的情况下的与AXL的最大抗体结合为在不存在Gas6的情况下的结合的至少90%，如至少95%，如至少97%，如至少99%，如至少100%，如通过竞争测定法所测定的，其中所述结合AXL的抗体与所述Gas6之间的竞争在与Gas6预温育或不与Gas6预温育的A431细胞上测定。4.根据权利要求1至3中任一项的抗体，其中所述抗体对人AXL的结合亲和力(KD)的范围在0.3x10-9至63x10-9M，并且其中所述结合亲和力使用生物膜层干涉技术使用可溶性AXL细胞外结构域进行测量。5.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中所述抗体对AXL的解离速率为9.7x10-5至4.4x10-3s-1，并且其中所述解离速率通过生物膜层干涉技术使用可溶性重组AXL细胞外结构域进行测量。6.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中AXL是如SEQIDNO:130中指定的人AXL。7.根据权利要求1至5中任一项的抗体，其中AXL是如SEQIDNO:147中指定的食蟹猴AXL。8.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中AXL是如SEQIDNO:130中指定的人AXL和如SEQIDNO:147中指定的食蟹猴AXL。9.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中所述抗体包含至少一个结合区，所述至少一个结合区包含分别选自以下的可变重链(VH)CDR1、CDR2和CDR3序列：a)SEQIDNo:36、37和38[107]；b)SEQIDNo:93、94和95[613]；c)SEQIDNo:93、126和127[613/608-01/610-01/620-06]；d)SEQIDNo:46、47和48[148]；e)SEQIDNo:57、58和59[171]；f)SEQIDNo:78、79和80[187]；g)SEQIDNo:46、119和120[148/140]；h)SEQIDNo:51、52和53[154]；i)SEQIDNo:72、73和75[183]；j)SEQIDNo:72、74和75[183-N52Q]；k)SEQIDNo:114、115和116[733]；l)SEQIDNo:123、124和125[171/172/181]；m)SEQIDNo:108、109和110[726]；n)SEQIDNo:108、121和122[726/187]；o)SEQIDNo:41、42和43[140]；p)SEQIDNo:62、63和64[172]；q)SEQIDNo:67、68和69[181]；r)SEQIDNo:51、52和54[154-M103L]；s)SEQIDNo:78、79和80[187]；t)SEQIDNo:83、84和85[608-01]；u)SEQIDNo:88、89和90[610-01]；v)SEQIDNo:98、99和100[613-08]；w)SEQIDNo:103、104和105[620-06]；以及x)SEQIDNo:108、109和111[726-M101L]。10.根据权利要求9的抗体，其中所述VHCDR1、CDR2和CDR3选自a)、d)、g)或k)。11.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中所述至少一个结合区包含可变重链(VH)区和可变轻链(VL)区，其中所述VH区包含CDR1、CDR2和CDR3序列，其中所述VH区包含CDR1、CDR2和CDR3序列，所述至少一个结合区与选自以下的序列具有至少95%，如至少97%，如至少99%，如100%的序列同一性：a)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:36、37和38的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:39、GAS和40的CDR1、CDR2和CDR3序列[107]；b)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:46、47和48的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列[148]；c)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:114、115和116的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:117、DAS和118的CDR1、CDR2和CDR3序列[733]；d)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:51、52和53的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列[154]；e)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:51、52和54的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列[154-M103L]；f)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:57、58和59的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列[171]；g)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:62、63和64的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:65、GAS和66的CDR1、CDR2和CDR3序列[172]；h)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:67、68和69的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:70、GAS和71的CDR1、CDR2和CDR3序列[181]；i)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:72、73和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列[183]；j)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:72、74和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列[183-N52Q]；k)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:78、79和80的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:81、AAS和82的CDR1、CDR2和CDR3序列[187]；l)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:83、84和85的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:86、GAS和87[608-01]；m)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:88、89和90的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:91、GAS和92[610-01]；n)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列[613]；o)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:98、99和100的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:101、DAS和102[613-08]；p)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:103、104和105的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:106、GAS和107[620-06]；q)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:108、109和110的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列[726]；r)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:108、109和111的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列[726-M101L]；s)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:41、42和43的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:44、AAS和45的CDR1、CDR2和CDR3序列[140]；t)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:128、XAS（其中X为D或G）和129的CDR1、CDR2和CDR3序列[613/613-08]；u)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:46、119和120的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列[148/140]；v)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:123、124和125的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列[171/172/181]；以及w)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:121、109和122的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列[726/187]；以及x)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:93、126和127的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列[613/608-01/610-01/620-06]。12.根据前述权利要求中任一项的抗体，其中所述至少一个结合区包含选自以下的VH区和可变轻链（VL）区：a)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:36、37和38的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:39、GAS和40的CDR1、CDR2和CDR3序列[107]；b)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:46、47和48的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列[148]；c)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:114、115和116的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:117、DAS和118的CDR1、CDR2和CDR3序列[733]；d)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:51、52和53的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列[154]；e)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:51、52和54的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:55、GAS和56的CDR1、CDR2和CDR3序列[154-M103L]；f)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:57、58和59的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:60、GAS和61的CDR1、CDR2和CDR3序列[171]；g)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:62、63和64的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:65、GAS和66的CDR1、CDR2和CDR3序列[172]；h)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:67、68和69的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:70、GAS和71的CDR1、CDR2和CDR3序列[181]；i)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:72、73和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列[183]；j)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:72、74和75的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:76、ATS和77的CDR1、CDR2和CDR3序列[183-N52Q]；k)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:78、79和80的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:81、AAS和82的CDR1、CDR2和CDR3序列[187]；l)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:83、84和85的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:86、GAS和87[608-01]；m)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:88、89和90的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:91、GAS和92[610-01]；n)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:96、GAS和97的CDR1、CDR2和CDR3序列[613]；o)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:98、99和100的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:101、DAS和102[613-08]；p)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:103、104和105的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:106、GAS和107[620-06]；q)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:108、109和110的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列[726]；r)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:108、109和111的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:112、AAS和113的CDR1、CDR2和CDR3序列[726-M101L]；s)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:41、42和43的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:44、AAS和45的CDR1、CDR2和CDR3序列[140]；t)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:93、94和95的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:128、XAS（其中X为D或G）和129的CDR1、CDR2和CDR3序列[613/613-08]；u)VH区，其包含分别具有SEQIDNo:46、119和120的CDR1、CDR2和CDR3序列；以及VL区，其包含分别具有SEQIDNo:49、AAS和50的CDR1、CDR2和CDR3序列[148/140]；...

【专利技术属性】
技术研发人员：E布雷伊，D萨蒂恩，EN范登布林克，D维兹尔，RN德乔恩，P帕伦，R范蒂克休泽恩拉德斯马，
申请(专利权)人：根马布股份公司，
类型：发明
国别省市：丹麦,DK