结合CSF1R的抗体制造技术

提供了结合CSF1R的抗体。还提供了能够形成结合CSF1R的抗体的抗体重链和轻链。提供了编码针对CSF1R的抗体的多核苷酸。还提供了编码抗体重链和轻链的多核苷酸。提供了使用针对CSF1R的抗体的治疗方法。这些方法包括但不限于治疗类风湿性关节炎、骨质缺失和多发性硬化症的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
提供了结合CSFlR的抗体。还提供了能够形成结合CSFlR的抗体的抗体重链和轻链。此外，提供了包含一个或多个特定的互补决定区(CDR)的抗体、重链和轻链。提供了编码针对CSFlR的抗体的多核苷酸。还提供了编码抗体重链或轻链的多核苷酸。提供了使用针对CSFlR的抗体的治疗方法。这些方法包括但不限于治疗类风湿性关节炎、骨质缺失和多发性硬化症的方法。背景集落刺激因子I受体(本文中称为CSFlR ;本领域还称为FMS、FIM2, C-FMS和CD115)是一种带有N端胞外结构域(ECD)和具有酪氨酸激酶活性的C端胞内结构域的单程跨膜受体。CSFl或白细胞介素34配体(本文中称为IL34 ;Lin等，Science 320:807-11(2008))与CSFlR的配体结合导致受体二聚化、CSFlR蛋白酪氨酸激酶活性上调、CSFlR酪氨酸残基磷酸化和下游信号传导事件。CSFl和IL34两者都刺激单核细胞存活、增殖以及分化成巨噬细胞。已经发现许多肿瘤细胞分泌CSFl，CSFl通过CSFlR活化单核细胞/巨噬细胞。已经证明肿瘤内的CSFl水平与肿瘤内的肿瘤相关性巨噬细胞(TAM)水平有关。已经发现高水平的TAM与较差的患者预后有关。此外，已经发现，例如在小鼠的人乳癌异种移植物中，CSFl促进肿瘤生长和发展成转移。参见，例如Paulus等，Cancer Res.66:4349-56 (2006)。此外，CSFlR似乎在骨转移(bone metastasis)的溶骨性骨破坏(osteolytic bonedestruction)中作为抑制该破坏的受体酪氨酸激酶活性小分子抑制剂发挥作用。参见，例如 Ohno 等，Mol.CancerTher.5:2634-43 (2006)。还发现CSFl和其受体涉及各种炎症性和自体免疫性疾病。参见，例如Hamilton，Nat.Rev.8 =533-44(2008)。例如，已经发现来自患有类风湿性关节炎的关节的滑膜内皮细胞产生CSF1，表明CSFl和其受体在该疾病中具有作用。用抗体阻断CSFlR活性在关节炎小鼠模型中产生积极的临床效果，包含骨和软骨的破坏减少以及巨噬细胞数减少。参见，例如Kitaura 等，J.Clin.1nvest.115:3418-3427 (2005)。成熟分化的骨髓系细胞如巨噬细胞、小神经胶质细胞和破骨细胞促进各种疾病(如类风湿性关节炎、多发性硬化症和骨质缺失疾病)的病理学。分化的骨髓系细胞来源于周边血液单核细胞中间体。CSFlR刺激促进单核细胞从骨髓前体的发育，促进单核细胞增殖和存活以及促进周边血液单核细胞分化成分化的骨髓系细胞如巨噬细胞、小神经胶质细胞和破骨细胞。因此，CSFlR刺激促进分化的骨髓系细胞的增殖、存活、活化和成熟，且在病理学环境中，CSFlR刺激促进分化的骨髓系细胞介导疾病病理学的能力。 CSFlR信号传导的其它拮抗剂因此将可用于治疗各种CSFlR相关性疾病，如癌症、炎症性病状和自体免疫性疾病。概述本专利技术人专利技术了一组针对人CSFlR胞外结构域(CSF1R E⑶)的新抗体(包括人源化抗体)。Fab噬菌体展示库由经过人CSFlR E⑶-Fe融合蛋白免疫的小鼠脾脏制的。通过淘选该库分离出表达与CSF-1RE⑶-Fe结合的Fab的1056个噬菌体克隆。当1056个Fab被表达为纯化的蛋白质时，发现668个与CSFlR E⑶结合。在所述668个结合Fab中，只有121个Fab阻断CSFl和/或IL34与CSFlR的结合。这些Fab中只有33个同时阻断CSFl和IL34与CSFlR的结合。通过测序，所述33个Fab代表19组独特的序列。选择对人CSFlRECD具有低于纳摩尔浓度亲和力的11个Fab来制备嵌合抗体用于进一步研究。基于人和食蟹猴CSFlR结合亲和力、对CSFl和IL34与CSFlR结合的阻断以及对配体诱导的CSFlR磷酸化的抑制，选择三个嵌合抗体用于人源化，并且基于这三个嵌合抗体制备了十六个人源化抗体。十六个人源化抗体中的十四个对人CSFlR ECD保持低于纳摩尔浓度的结合亲和力。参见，例如表5。这些人源化抗体同时阻断配体CSFl和IL34与人CSFlR的结合，并且许多还同时阻断CSFl和IL34与食蟹猴CSFlR的结合。参见，例如表4。对于治疗性药物开发，与人和食蟹猴抗原两者的结合具有相似的亲和力的抗体是有利的。选择所述三个嵌合抗体选用于人源化部分是因为它们对人和食蟹猴CSFlR ECD具有相似的结合亲和力。然而，人源化之后，嵌合抗体之一(0302)的大部分人源化型式失去了对食蟹猴CSFlR E⑶的显著结合亲和力，不过它们保持对人CSFlR E⑶的强结合亲和力。参见，例如表3。0301和0311的人源化型式对人和食蟹猴CSFlR E⑶都保持相似的强结合，其中对两个物种的结合亲和力差异小于约2倍。基于CSFlR结合亲和力、配体抑制和免疫原性潜力，选择三个人源化抗体用于其它研究。所述三个人源化抗体是来源于人源化之后未显著丧失食蟹猴CSFlR结合亲和力的两个嵌合抗体。这三个人源化抗体抑制人CSFlR的配体诱导的磷酸化，并且还阻断原代人单核细胞中的配体诱导的增 殖和存活反应。参见，例如表6和7，以及附图说明图10和11。因此，这些抗体可用于治疗涉及例如原代人单核细胞中的配体诱导的增殖和存活反应的疾病。用抗CSFlR抗体阻断CSFlR诱导的反应应该抑制分化的骨髓系细胞的增殖、存活、活化、成熟，并且减弱其介导疾病病理学的能力。此外，用抗CSFlR抗体阻断CSFlR诱导的反应应该抑制周边血液单核细胞中间体分化成分化的骨髓系细胞，降低介导病理学的分化的骨髓系细胞的数目。因此，本文中描述的人源化抗CSFlR抗体可用于通过抑制分化的骨髓系细胞介导疾病病理学的能力来治疗具有显著症状的慢性疾病。所述人源化抗体还可用于通过在疾病的缓解阶段期间抑制从周边血液单核细胞分化而来的新病理学介导性骨髓系细胞的发育，由此降低病理学介导性细胞的数目和其新的形成，从而治疗性质上为复发和缓解型的慢性疾病。在一些实施方案中，提供包含重链和轻链的分离的抗体，其中所述抗体与CSFlR结合。在一些实施方案中，所述重链和/或轻链具有以下结构。在一些实施方案中，重链包含与选自SEQ ID NO:9、11、13和39至45的序列具有至少90 %、至少95 %、至少97 %、至少99 %或100 %同一性的序列。在一些实施方案中，轻链包含与选自SEQ ID N0:10、12、14和46至52的序列具有至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一性的序列。在一些实施方案中，重链包含与选自SEQ ID ΝΟ:9、11、13和39至45的序列具有至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一性的序列，并且轻链包含与选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序列具有至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一性的序列。在一些实施方案中，HC⑶R1、HC⑶R2和HC⑶R3包含选自以下序列的一组序列:(a) SEQ ID N0:15、16 和 17 ； (b) SEQ ID N0:21、22 和 23 ;以及(c) SEQ ID N0:本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2010.05.04 US 61/331,1771.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述重链包含与选自SEQ ID N0:9、ll、13和39至45的序列具有至少90%同一性的序列，并且其中所述抗体与集落刺激因子I受体(CSFlR)结合。2.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含与选自SEQIDNO:9、11、13和39至45的序列具有至少95%同一性的序列。3.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含与选自SEQIDNO:9、11、13和39至45的序列具有至少97%同一性的序列。4.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含与选自SEQIDNO:9、11、13和39至45的序列具有至少99%同一性的序列。5.如权利要求1所述的抗体，其中所述重链包含选自SEQID N0:9、ll、13和39至45的序列。6.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序列具有至少90%同一性的序列。7.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序列具有至少95%同一性的序列。8.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序列具有至少97%同一性的序列。9.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序列具有至少99%同一性的序列。10.如权利要求1至5中任一项所述的抗体，其中所述轻链包含选自SEQID NO:10、12、14和46至52的序 列。11.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述轻链包含与选自SEQ ID NO:10,12,14和46至52的序列具有至少90%同一性的序列，并且其中所述抗体与集落刺激因子I受体(CSFlR)结合。12.如权利要求11所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQIDNO:10、12、14和46至52的序列具有至少95%同一性的序列。13.如权利要求11所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQIDNO:10、12、14和46至52的序列具有至少97%同一性的序列。14.如权利要求11所述的抗体，其中所述轻链包含与选自SEQIDNO:10、12、14和46至52的序列具有至少99%同一性的序列。15.如权利要求11所述的抗体，其中所述轻链包含选自SEQIDN0:10、12、14和46至52的序列。16.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述重链包含:(i)包含选自SEQ ID NO:15,21和27的序列的重链(HC)CDRl ； (ii)包含选自SEQ ID NO:16、22和28的序列的HCCDR2;以及(iii)包含选自SEQ ID NO: 17、23和29的序列的HC CDR3，其中所述抗体与CSFlR结合。17.如权利要求16所述的抗体，其中所述HC⑶R1、HC⑶R2和HC⑶R3包含选自以下序列的一组序列:(a) SEQ ID NO: 15、16 和 17 ;(b) SEQ ID NO:21、22 和 23 ;以及(c) SEQ IDNO:27,28 和 29。18.如权利要求16或权利要求17所述的抗体，其中所述轻链包含:(i)包含选自SEQID NO: 18、24和30的序列的轻链(LC)CDRl ；(ii)包含选自SEQ ID NO: 19、25和31的序列的LC CDR2 ;以及(iii)包含选自SEQ ID NO:20、26和32的序列的LC CDR3。19.如权利要求18所述的抗体，其中所述LC⑶R1、LC⑶R2和LC⑶R3包含选自以下序列的一组序列:(a) SEQ ID NO: 18、19 和 20 ;(b) SEQ ID NO:24、25 和 26 ;以及(c) SEQ IDNO:30,31 和 32。20.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述轻链包含:(i)包含选自SEQ ID NO:18、24和30的序列的轻链(LC)CDRl ； (ii)包含选自SEQ ID NO: 19、25和31的序列的LCCDR2 ;以及(iii)包含选自SEQ ID NO:20、26和32的序列的LC CDR3 ;并且其中所述抗体与CSFlR结合。21.如权利要求20所述的抗体，其中所述LC⑶R1、LC⑶R2和LC⑶R3包含选自以下序列的一组序列:(a) SEQ ID NO: 18、19 和 20 ;(b) SEQ ID NO:24、25 和 26 ;以及(c) SEQ IDNO:30,31 和 32。22.—种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述抗体包含: (a)包含与SEQID NO:9具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:10具有至少95%同一性的序列的轻链； (b)包含与SEQID NO: 11具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:12具有至少95%同一性的序列的轻链； (c)包含与SEQID NO:13具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:14具有至少95%同一性的序列的轻链；(d)包含与SEQID NO:39具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少95%同一性的序列的轻链； (e)包含与SEQID NO:40具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少95%同一性的序列的轻链； (f)包含与SEQID NO:41具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少95%同一性的序列的轻链； (g)包含与SEQID NO:39具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少95%同一性的序列的轻链； (h)包含与SEQID NO:40具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少95%同一性的序列的轻链； (i)包含与SEQID NO:41具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少95%同一性的序列的轻链；以及 (j)包含与SEQ ID NO:42具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少95%同一性的序列的轻链； (k)包含与SEQ ID NO:42具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少95%同一性的序列的轻链； (I)包含与SEQ ID NO:42具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50具有至少95%同一性的序列的轻链； (m)包含与SEQ ID NO:43具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少95%同一性的序列的轻链； (η)包含与SEQ ID NO:43具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少95%同一性的序列的轻链； (ο)包含与SEQ ID NO:43具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50具有至少95%同一性的序列的轻链； (P)包含与SEQ ID NO:44具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51具有至少95%同一性的序列的轻链； (q)包含与SEQ ID NO:44具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52具有至少95%同一性的序列的轻链； (r)包含与SEQ ID NO:45具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51具有至少95%同一性的序列的轻链；或 (s)包含与SEQ ID NO:45具有至少95%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52具有至少95%同一性的序列的轻链。23.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述抗体包含: (a)包含与SEQID NO:9具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:10具有至少97%同一性的序列的轻链； (b)包含与SEQID NO: 11具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:12具有至少97%同一性的序列的轻链； (c)包含与SEQID NO:13具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:14具有至少97%同一性的序列的轻链； (d)包含与SEQID NO:39具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少97%同一性的序列的轻链； (e)包含与SEQID NO:40具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少97%同一性的序列的轻链； (f)包含与SEQID NO:41具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少97%同一性的序列的轻链； (g)包含与SEQID NO:39具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少97%同一性的序列的轻链； (h)包含与SEQID NO:40具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少97%同一性的序列的轻链； (i)包含与SEQID NO:41具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少97%同一性的序列的轻链；以及 (j)包含与SEQ ID NO:42具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少97%同一性的序列的轻链； (k)包含与SEQ ID NO:42具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少97%同一性的序列的轻链； (I)包含与SEQ ID NO:42具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50具有至少97%同一性的序列的轻链； (m)包含与SEQ ID NO:43具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少97%同一性的序列的轻链； (η)包含与SEQ ID NO:43具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少97%同一性的序列的轻链； (ο)包含与SEQ ID NO:43具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50具有至少97%同一性的序列的轻链； (P)包含与SEQ ID NO:44具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51具有至少97%同一性的序列的轻链； (q)包含与SEQ ID NO:44具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52具有至少97%同一性的序列的轻链； (r)包含与SEQ ID NO:45具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51具有至少97%同一性的序列的轻链；或 (s)包含与SEQ ID NO:45具有至少97%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52具有至少97%同一性的序列的轻链。24.一种分离的抗体，包含重链和轻链，其中所述抗体包含: (a)包含与SEQID NO:9具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:10具有至少99%同一性的序列的轻链； (b)包含与SEQID NO: 11具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:12具有至少99%同一性的序列的轻链；(c)包含与SEQID NO:13具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:14具有至少99%同一性的序列的轻链； (d)包含与SEQID NO:39具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少99%同一性的序列的轻链； (e)包含与SEQID NO:40具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少99%同一性的序列的轻链； (f)包含与SEQID NO:41具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46具有至少99%同一性的序列的轻链； (g)包含与SEQID NO:39具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少99%同一性的序列的轻链； (h)包含与SEQID NO:40具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少99%同一性的序列的轻链； (i)包含与SEQID NO:41具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47具有至少99%同一性的序列的轻链； (j)包含与SEQ ID NO:42具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少99%同一性的序列的轻链； (k)包含与SEQ ID NO:42具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少99%同一性的序列的轻链； (I)包含与SEQ ID NO:42具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50具有至少99%同一性的序列的轻链； (m)包含与SEQ ID NO:43具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48具有至少99%同一性的序列的轻链； (η)包含与SEQ ID NO:43具有至少99%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49具有至少99%同一性的序列的轻链； (ο)包含与SEQ ID NO:43具有至少99%...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·王，M·瓦斯克兹，
申请(专利权)人：戊瑞治疗有限公司，
类型：
国别省市：