结合至PD‑1的免疫试剂制造技术

本公开涉及对于程序性细胞死亡1(PD‑1)具有特异性的结合剂，并且涉及使用其治疗、预防和/或减轻传染病(例如，人免疫缺陷病毒(HIV))、癌症和/或自身免疫的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合至PD-1的免疫试剂相关申请本申请要求2014年8月5日提交的美国系列号62/033,177、2014年9月22日提交的美国系列号62/053,366和2014年12月17日提交的美国系列号62/093,368的优先权，其每一篇以它们的整体通过引用并入本公开。
本公开涉及对于程序性细胞死亡1(PD-1)(例如，人PD-1)具有特异性的结合剂和使用其治疗和/或预防感染(例如，被人免疫缺陷病毒(HIV)感染)、癌症和/或自身免疫(autoimmunity)的方法。
技术介绍
随着我们进入HIV流行的第四个十年，对于HIV发病机理的理解和开发出有效和安全的抗病毒药物已经取得了显著的进展。已经注册了超过30种抗病毒药物并且组合抗逆转录病毒疗法(ART)对于发病率和死亡率的影响已经是卓越的。但是，尽管以对ART的最佳坚持在患者中实现了HIV复制的长期抑制，但是HIV不可避免地在中断疗法之后出现反弹。此外，成功的疗法不诱导或使得恢复/发展病毒特异性免疫应答，该应答能够在没有ART的情况下控制HIV复制。因此，大部分HIV感染受试者需要终生ART，以控制HIV复制和相关的疾病。在血液中已经鉴定了潜在地被HIV感染的一群长期存活的中心记忆CD4T-细胞为HIV细胞库的重要组分和作为HIV持久性的主要原因。在存在以ART的充分HIV抑制的情况下该潜伏细胞库的寿命评估为约70年。但是，最近的研究已经表明存在于淋巴结中的两群CD4T-细胞用作HIV感染、复制和产生的主要CD4T-细胞区域。这两个CD4T-细胞群的特点在于表达PD-1和CXCR5并且包括PD-1+CXCR5+，即滤泡辅助性T细胞(Tfollicularhelpercells)(Tfh)和PD-1+CXCR5-CD4T-细胞群。已经提出了负责建立和维持HIV潜伏的细胞库的许多机制。一种机制是在可补充HIV细胞库的ART下持续的最小病毒复制。所以，ART不能诱导充分抑制HIV复制并且在ART下的“自然”HIV-1特异性免疫应答也不能完全抑制和消除持续进行的残留病毒复制。ART和HIV特异性免疫应答的失败提供了研究可选的干预以同样靶向持续的HIV细胞库的基本原理。过去已经研究了许多免疫学干预并且目前正被进一步开发，目标是实现HIV功能治愈，其中病毒复制被抑制，而不用持续的抗病毒疗法(9)。治疗性疫苗策略已经成为研究的主要的干预策略，但是结果已经显示出在实验动物模型和患者中的适度效力，除了基于CMV的载体HIV疫苗(在NHP模型中50％的效力；10)。最近的研究已经对于使用抗包膜广泛中和抗体(anti-envelopebroadneutralizingantibodies)(bNabs)作为HIV感染中治疗剂的可能性产生了有趣的结果(11,12)。此外，拮抗物PD-1Abs已经显示在HIV感染患者中恢复T-细胞功能并且已经提出了使用这些Abs作为治疗性策略，以加强HIV特异性T-细胞应答效力的可能性(13,14)。非常确定的是浸润肿瘤特异性CD8T-细胞就增生和介导细胞毒素活性的能力而言，它们是功能失调的。大部分浸润肿瘤特异性CD8T-细胞处在所谓的衰竭功能状态。负责浸润肿瘤特异性CD8T-细胞衰竭的主要机制是许多调节受体和尤其PD-1调节受体增加的表达。PD-1/PDL-1/2(PD-1配体)的阻断与CD8T-细胞从衰竭的恢复相关的观察已经提供了用于开发靶向衰竭的CD8T-细胞表达的PD-1分子的干预策略的基本原理。最近的研究使用具有拮抗物活性的PD-1抗体已经在患有晚期癌症相关疾病的患者中显示出了非常有希望的结果。研究已经显示在患有晚期黑素瘤、非小细胞肺癌和肾癌的患者中大量比例的应答，范围从18至40％。在这些研究中，抗PD-1抗体已经被单独使用或结合抗CTL-A4抗体使用。在这些初始研究之后，目前的研究在患有包括血液学肿瘤的各种肿瘤的患者中进行。本领域需要靶向PD-1的另外试剂和使用其的方法。本公开通过提供可用于靶向PD-1和表达其的细胞和/或组织的试剂和方法解决了那些需要。附图说明图1.A.小鼠PD-1。B.人PD-1。图2.CFSE试验，以评估抗PD1抗体对HIV特异性CD8T细胞的增殖的功能效果。图3.抗PD-1抗体对激活的CD4T-细胞上的细胞表面PD-1的浓度应答结合。图4.抗体类别。图5a-f.相对于对照的增殖(NEG和肽8)。图6a-b.在功能衰竭恢复试验中由结合不同的表位的抗PD-1抗体介导的HIV肽特异性CD8T-细胞增殖的恢复。图7.在功能衰竭恢复试验中由结合不同的PD-1表位的抗PD-1抗体的组合介导的HIV肽特异性CD8T-细胞增殖的增强恢复。图8.阻断PD-1和PD-L1的相互作用的第一结合剂与不阻断PD-1和PD-L1的相互作用的第二结合剂之间的协同作用。
技术实现思路
本公开涉及对于程序性细胞死亡1(PD-1)(例如，人PD-1)具有特异性的结合剂和使用其，比如治疗、预防和/或减轻感染(例如，被人免疫缺陷病毒(HIV))、癌症和/或自身免疫疾病的方法。也提供了鉴定与PD-1相互作用的结合剂的功能试验。也提供了结合剂，比如阻断PD-1和PD-L1的相互作用的第一结合剂与不阻断PD-1和PD-L1的相互作用的第二结合剂的组合，其协同用于救援(rescue)T细胞避免衰竭。专利技术详述本公开涉及体外和/或体内结合细胞表面上的程序性细胞死亡(PD-1)蛋白质(例如，美国专利号5,698,520(Honjo等)的SEQIDNO:1，图1A、图1B，该专利通过引用以其整体并入本文)(例如，人PD-1)的结合剂。结合剂也可通常在体外结合分离的PD-1多肽(例如，人PD-1)和/或其片段和/或衍生物。也提供了使用这种结合剂诊断、治疗、预防和/或减轻与存在表达PD-1的细胞相关的一种或多种疾病的方法。例如，结合剂可以是可以与PD-1的表位作用和/或结合PD-1的表位的抗体(例如，单克隆抗体)。本文所述的“结合剂”可包括例如PD-1的激动剂或拮抗物。激动剂结合剂是通常不能恢复T-细胞功能和/或PD-1的表达的结合剂。激动剂PD-1结合剂可用于治疗自身免疫性疾病和其中PD-1表达细胞参与疾病进展的其他疾病。而拮抗物结合剂是能够恢复T-细胞功能和/或PD-1的表达的结合剂。例如，PD-1拮抗物结合剂可能够从如已知在HIV感染和各种肿瘤中出现的功能衰竭中恢复PD-1表达T-细胞的功能。T细胞功能的恢复可通过例如测量这种细胞的增殖、细胞因子产生、细胞毒素活性或其他特征来确定。本文所述的结合剂的另一用途是选择性靶向和消除包含有复制能力的HIV的感染HIV的CD4T细胞群(例如，在潜伏和/或复制状态)。已知这种表达PD-1的PD-1表达细胞用作有复制能力的HIV的主要细胞库。用于消除这些CD4T-细胞群的潜在机制是使用本文所述的结合剂(例如，单特异性PD-1抗体和/或双特异性PD-1抗体)的抗体依赖性细胞毒性(ADCC)。在一些实施方式中，具有例如不同特异性(例如，识别不同的表位)的一种或多种PD-1拮抗结合剂可被组合，以诱导救援抗原特异性CD8T-细胞避免由在那些细胞中的PD-1表达而造成的功能衰竭(例如，恢复或改善增殖、细胞因子产生和/或细胞毒素活本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种结合程序性细胞死亡1(PD1)的结合剂，其包括选自SEQ ID NOS.1‑138和/或显示在表1A和/或1B中的至少一条氨基酸序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.05 US 62/033,177;2014.09.22 US 62/053,366;1.一种结合程序性细胞死亡1(PD1)的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.1-138和/或显示在表1A和/或1B中的至少一条氨基酸序列。2.权利要求1所述的结合剂，其是分离的单克隆抗体。3.权利要求1或2所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.1-23的至少一条重链CDR1氨基酸序列。4.权利要求1-3中任一项所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.24-46的至少一条重链CDR2氨基酸序列。5.权利要求1-4中任一项所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.47-69的至少一条重链CDR3氨基酸序列。6.权利要求1-5中任一项所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.70-92的至少一条轻链CDR1氨基酸序列。7.权利要求1-6中任一项所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.93-115的至少一条轻链CDR2氨基酸序列。8.权利要求1-7中任一项所述的结合剂，其包括选自SEQIDNOS.116-138的至少一条轻链CDR3氨基酸序列。9.权利要求1-8中任一项所述的结合剂，其包括选自下述的氨基酸序列：和/或，选自下述的氨基酸序列：10.权利要求9所述的结合剂，其包括氨基酸序列的组合，所述组合选自：SEQIDNOS.1、24、47、70、93和116；SEQIDNOS.2、25、48、71、94和117；SEQIDNOS.3、26、49、72、95和118；SEQIDNOS.4、27、50、73、96和119；SEQIDNOS.5、28、51、74、97和120；SEQIDNOS.6、29、52、75、98和121；SEQIDNOS.7、30、53、76、99和122；SEQIDNOS.8、31、54、77、100和123；SEQIDNOS.9、32、55、78、101和124；SEQIDNOS.10、33、56、79、102和125；SEQIDNOS.11、34、57、80、103和126；SEQIDNOS.12、35、58、81、104和127；SEQIDNOS.13、36、59、82、105和128；SEQIDNOS.14、37、60、83、106和129；SEQIDNOS.15、38、61、84、107和130；SEQIDNOS.16、39、62、85、108和131；SEQIDNOS.17、40、63、86、109和132；SEQIDNOS.18、41、64、87、110和133；SEQIDNOS.19、42、65、88、111和134；SEQIDNOS.20、43、66、89、112和135；SEQIDNOS.21、44、67、90、113和136；SEQIDNOS.22、45、68、91、114和137；以及，SEQIDNOS.23、46、69、92、115和138。11.权利要求1-10中任一项所述的结合剂，其源自人抗体、人IgG、人IgG1、人IgG2、人IgG2a、人IgG2b、人IgG3、人IgG4、人IgM、人IgA、人IgA1、人IgA2、人IgD、人IgE、犬抗体、犬IgGA、犬IgGB、犬IgGC、犬IgGD、鸡抗体、鸡IgA、鸡IgD、鸡IgE、鸡IgG、鸡IgM、鸡IgY、山羊抗体、山羊IgG、小鼠抗体、小鼠IgG、猪抗体和大鼠抗体。12.一种权利要求1-11中任一项的结合剂的衍生物。13.权利要求12所述的衍生物，其选自Fab、Fab2、Fab’单链抗体、Fv、单链单特异性抗体、双特异性抗体、三聚抗体、多特异性抗体、多价抗体、嵌合抗体、犬-人嵌合抗体、犬-小鼠嵌合抗体、包括犬Fc的抗体、人源化抗体、人抗体、犬化抗体、CDR移植抗体、鲨鱼抗体、纳米抗体和骆驼化抗体。14.权利要求1-13中任一项所述的结合剂或衍生物，或权利要求38-40中任一项所述的组合，包括至少第一和第二特异性，所述第一特异性针对PD-1并且所述第二特异性针对不同的抗原。15.权利要求14所述的结合剂或衍生物，其中所述第二特异性针对传染剂的抗原或肿瘤抗原。16.权利要求15所述的结合剂或衍生物，其中所述传染剂是人免疫缺陷病毒(HIV)。17.权利要求16所述的结合剂或衍生物，其中所述抗原是HIVenv。18.权利要求1-17中任一项所述的结合剂或其衍生物，包括可固定地与其连接的可检测的标签。19.权利要求18所述的结合剂，其中所述可检测的标签选自荧光素、DyLight、Cy3、Cy5、FITC、HiLyteFluor555、HiLyteFluor647、5-羧基-2,7-二氯荧光素、5-羧基荧光素、5-FAM、羟色胺、5-羟基色胺(5-HAT)、6-羧基荧光素(6-FAM)、FITC、6-羧基-1,4-二氯-2’,7’-二氯荧光素(TET)、6-羧基-1,4-二氯-2’,4’,5’,7’-四氯荧光素(HEX)、6-羧基-4’,5’-二氯-2’,7’-二甲氧基荧光素(6-JOE)、Alexafluor、Alexafluor350、Alexafluor405、Alexafluor430、Alexafluor488、Alexafluor500、Alexafluor514、Alexafluor532、Alexafluor546、Alexafluor555、Alexafluor568、Alexafluor594、Alexafluor610、Alexafluor633、Alexafluor635、Alexafluor647、Alexafluor660、Alexafluor680、Alexafluor700、Alexafluor750、BODIPY荧光团、BODIPY492/515、BODIPY493/503、BODIPY50...

【专利技术属性】
技术研发人员：G·潘塔莱奥，C·芬威克，
申请(专利权)人：马布奎斯特公司，
类型：发明
国别省市：瑞士,CH