NFYB基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途制造技术

本发明专利技术为NFYB基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途，提供了以NFYB基因和或基因的表达产物一种新的急性心肌梗死风险预测和诊断治疗靶点，利用NFYB基因及其表达产物制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，具有重要的临床应用意义和开发价值。

Use of the NFYB gene as a marker for risk prediction of acute myocardial infarction

The invention relates to NFYB gene as acute myocardial infarction risk prediction markers in use, provides the expression product of NFYB gene and gene or an acute myocardial infarction risk prediction and diagnosis of new therapeutic targets, and its expression product preparation of acute myocardial infarction risk prediction markers and diagnostic agents using NFYB gene with clinical the application and development of important value significance.

【技术实现步骤摘要】
NFYB基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途
：本专利技术提供一种预测和诊疗急性心肌梗死的标记物，进一步讲是提供了NFYB基因作为标记物表达产物和生物制剂在制备急性心肌梗死预测和诊疗药物中用途，属于基因诊断和生物医药领域。
技术介绍
：冠状动脉粥样硬化性心脏病（CAD）是由环境因素与遗传因素共同作用而导致的最常见心血管疾病，是一种多基因相互作用的复杂疾病，其发生与发展是在环境因素和遗传因素共同作用的基础之上，多重危险因素作用的结果。已知的危险因素，如高血压、血脂异常、血糖升高、吸烟等长期积累，结合遗传背景最终将导致急性心血管事件（如，急性心肌梗死，AMI）的发生，常常危及患者生命。因此，临床上需要有效的风险预测方法，对高危人群给予有效识别，从而更早的干预，来降低急性心血管事件的发生，改善病人预后。基因组中编码的遗传信息是稳定的，大多数情况下是不可变的。然而研究表明，大约有25000个基因在RNA水平的表达是高度可变的，可以反应机体短期内的生理和病例变化。近年来随着基因芯片技术的发展，基因表达分析已经广泛应用于疾病的研究。在其他医学领域的研究已经表明，外周全血或外周血单核细胞的基因表达对疾病具有显著的预测价值，外周全血或外周单个核细胞基因表达的改变已被证实对CAD有显著的预测价值。基因表达分析可以为疾病近期风险预测提供新的生物标志物。由NFYB基因编码的NFYB亚基是NFY的重要组成部分，在NFY的调控中起到必不可少的作用。既往研究表明，由NFY调控表达的基因广泛参与了甘油三酯、脂肪酸、酮体代谢和胆固醇合成等重要的脂类代谢相关通路，在现有研究中未见对NFYB与心肌梗死的相关报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供NFYB基因作为急性心肌梗死风险预测标记物中的用途，所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测NFYB基因和或基因的表达产物。进一步的，所述的NFYB基因和或基因的表达产物在急性心肌梗死外周血中低表达。进一步的，所述的NFYB基因和或基因的表达产物的表达水平荧光定量检测方法。本专利技术的目的在于所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测NFYB基因和或基因的表达产物进一步的，采用荧光定量试剂盒、基因芯片、酶联免疫、抗体杂交方法外周血中基因的表达检测方法和相关的生物制剂。本专利技术的目的在于所述急性心肌梗死风险预测和诊断制剂检测NFYB基因和或基因的表达产物进一步的，包含本NFYB基因和或表达产物用于急性心肌梗死风险预测和诊断的生物制剂。本专利技术中荧光定量PCR检测中使用的引物对P，其序列如下：上游引物序列：5’ATGACAATGGATGGTGACAGTTC3’下游引物序列：5’CTAGCCACGTTTGCTATTGGA3’。本专利技术中荧光定量PCR检测体系及反应条件：荧光定量PCR反应体系：20ul反应体系，每个反应包括:10ulSYBRPremixExTaqTM，上、下游引物各0.5ul(浓度为10umol/L)，无核酸酶的双蒸水8ul，cDNA模板1ul。权利要求3中所述的荧光定量PCR反应条件：应用实时荧光定量PCR系统扩增。反应条件为95℃预变性10分钟；40个循环：95℃变性15秒,60℃退火20秒,72℃20延伸秒；溶解曲线和扩增曲线95℃1分钟，55℃30秒,95℃30秒。以GAPDH基因为内参基因，所有样本至少重复测量三次，结果取均值。本专利技术进行的外周血急性心肌梗死差异基因表达谱分析结果显示：在急性心肌梗死病人的外周血白细胞中存在着大量差异表达的基因。其中，NFYB基因在急性心肌梗死病人外周血中呈现显著低表达。专利技术人在前期研究成果的基础之上，通过扩大样本量，来进一步验证NFYB基因在急性心肌梗死发病过程中的差异表达，并分析NFYB基因促进急性心肌梗死发病的可能机制。本专利技术的积极效果在于：提供了以NFYB基因和或基因的表达产物一种新的急性心肌梗死风险预测和诊断治疗靶点，利用NFYB基因及其表达产物制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，具有重要的临床应用意义和开发价值。附图说明图1是NFYB基因荧光定量PCR的特异性引物的溶解曲线和NFYB基因荧光定量PCR扩增曲线；A是荧光定量特异性引物的溶解曲线，B是荧光定量PCR扩增曲线；图2实施例2中NFYB基因RT-PCR扩增目的片段电泳图，其中，泳道1，2是RT-PCR产物，泳道3是DL500DNAladdermarker；图3是NFYB基因mRNA相对表达量；其中**代表P<0.01。具体实施方式结合实例具体实例，进一步阐述本专利技术，仅用于解释本专利技术，而不能理解为对本专利技术的限制。本领域的普通技术人员可以理解，在不脱离本专利技术的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型。本专利技术主要采用荧光定量PCR筛选出急性心肌梗死相关基因，结合分子生物学实验和临床病例关联分析，证实了是急性心肌梗死诊治标志物。病例的收集选取2014年11月-2016年7月于吉林大学中日联谊医院心血管内科住院治疗，根据世界卫生组织发布的缺血性心脏病命名和诊断标准，明确诊断为冠心病的病人85例为冠心病组。并同时符合：冠状动脉造影术证实冠状动脉主要血管（左主干、前降支、回旋支和右冠状动脉）及其主要分支中至少一支狭窄大于或等于50%。根据冠状动脉造影结果，按照Gensini评分系统对冠状动脉血管病变严重程度进行评分，分值越高病变约严重。对照为经冠状动脉造影术证实冠状动脉主要血管（左主干、前降支、回旋支和右冠状动脉）及其主要分支均无明显狭窄的非冠心病者84例（非冠心病组）。本专利技术医疗效果的排除标准：1.非心肌缺血相关的心肌损伤：心脏挫伤、手术、消融、起搏、或除颤仪除颤、伴心脏受累的横纹肌溶解症、心肌炎、心脏毒性药物等。2.多因素或不确定的心肌损伤：严重心力衰竭、应激性心肌病、严重肺栓塞或肺动脉高压、败血症和危重病人、肾功能衰竭、严重的急性神经系统疾病，如卒中、蛛网膜下腔出血、浸润疾病，如淀粉样变、结节病、剧烈运动等。3.合并有严重感染性疾病、恶性肿瘤。4.正在患有的、慢性的或复发性的传染性疾病史。5.（活动性或潜伏性）结核感染史或证据。6.患有免疫系统疾病和（或）正在服用激素。怀疑或证实处于免疫缺陷状态的患者7.临床资料或者冠脉造影资料不全者。详细记录临床资料，包括：用药史、血脂水平、空腹血糖水平、坐位血压水平、体质指数（BMI）、冠状动脉造影资料、冠心病家族史、吸烟史，以及合并其它临床疾病情况（如高血压、糖尿病）等。二、急性心肌梗死患者组及对照组外周血中NFYB基因表达情况：外周血采集、总RNA提取及cDNA合成留取各研究对象晨起空腹外周静脉血4ml，利用血液总RNA提取试剂盒（RNAsimpleTotalRNAKit，天根生化科技有限公司，北京），依据试剂盒说明书对已获取的外周血进行总RNA提取，并利用1.5%琼脂糖电泳及紫外分光光度计（Nanodrop2000）对RNA的质量及浓度进行检测。合格的RNA样本A260/A280值在1.9和2.1之间，且A260/A230值大于2。琼脂糖凝胶电泳可见明亮的28S和18SrRNA条带，且28SrRNA条带亮度约为18SrRNA的两倍。采用反转录试剂盒（TOYOBOReverTraAceqPRCRTkit，上海本文档来自技高网...

【技术保护点】
NFYB基因基因及其表达产物在制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂中的用途。

【技术特征摘要】
1.NFYB基因基因及其表达产物在制备急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂中的用途。2.由NFYB基因及其表达产物制备的急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂，其特征在于：所述急性心肌梗死风险预测标记物和诊断制剂采用常规PCR相对定量，荧光定量试剂盒、酶联免疫方法、蛋白杂交、基因芯片检测受试者或急性心肌梗死患者外周血中基因的表达水平。3.根据权利要求2所述的急性心肌梗死风险预测和诊断的检测方法，其特征在于：以受试者或急性心肌梗死患者外周血提取基因组DNA为模板，荧光定量检测NFYB基因mRNA表达水平使用的特异性检测基因的引物对P序列，其序列如下所示：上游引物序列：5’ATGACAATGGATGGTGACAGTTC3’下游引物序列：5’CTAGCCACGTTTGCTATTGGA3’。4.根据权利要求1所述的急性心肌梗死...

【专利技术属性】
技术研发人员：孟繁波，杨丽萍，谭卜川，刘谦，张文，刘龙，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22