CFAP20基因在骨质疏松症诊断中的应用制造技术

本发明专利技术公开了CFAP20基因可以作为骨质疏松症早期诊断的分子标志物。本发明专利技术利用高通量测序和QPCR实验研究了骨质疏松症患者中的差异表达基因。本发明专利技术的研究成果表明可以通过检测血液中CFAP20基因表达情况来判断受试者是否患有骨质疏松症，该检测方法可用于骨质疏松症的早期诊断，具有及时性、准确性的特点。

The application of CFAP20 gene in the diagnosis of osteoporosis

The invention discloses a CFAP20 gene which can be used as a molecular marker for the early diagnosis of osteoporosis. The present invention utilizes high throughput sequencing and QPCR experiments to study differentially expressed genes in patients with osteoporosis. Research results of this invention that can judge whether the subjects with osteoporosis by detecting the expression of CFAP20 gene in the blood, the detection method can be used for early diagnosis of osteoporosis, has the characteristics of timeliness, accuracy.

【技术实现步骤摘要】
CFAP20基因在骨质疏松症诊断中的应用
本专利技术属于分子诊断领域，涉及一种用于骨质疏松症诊断的分子标志物，具体涉及血液中的分子标志物-CFAP20基因在制备诊断骨质疏松症的产品中的应用。
技术介绍
骨质疏松症是一种以骨量减少、骨微结构破坏、骨脆性增加、易于骨折为特征的一种常见的代谢性骨病。它是由于破骨细胞增多/过度活化导致的骨吸收过多，或成骨细胞减少/功能缺陷导致的骨形成减少，从而骨丢失过多所致，是危害中老年人最主要的疾病之一。骨质疏松症的检测包括实验室检查指标的检测和辅助检测。实验室检查指标：骨质疏松症患者部分血清学生化指标可以反应骨转换(包括骨形成和骨吸收)状态，在骨的高转换状态(例如Ⅰ型骨质疏松症)下，这些指标可以升高，也可用于监测治疗的早期反应。但其在骨质疏松症中的临床意义仍有待于进一步研究。这些生化测量指标包括：骨特异的碱性磷酸酶(Bone-specificalkalinephosphatase，反应骨形成)、抗酒石酸酸性磷酸酶(tartratedresistantacidphosphatse，反应骨吸收)、骨钙素(Osteocalcin，反应骨形成)、Ⅰ型原胶原肽(TypeIprocollagenpeptidase，反应骨形成)、尿吡啶啉(Urinarypyridinoline)和脱氧吡啶啉(Urinarydeoxypyridinoline，反应骨吸收)、Ⅰ型胶原的N-C-末端交联肽(cross-linkedN-andC-telopeptideoftypeIcollagen，反应骨吸收)。正如前面所提到的，使用生化指标检测骨质疏松症的精确度不够。辅助检查：包括骨影像学检查和骨密度检测。辅助检查的对象一般都是骨质疏松症的晚期患者，不能用于早期骨质疏松症患者的筛查。基于现有技术中检测骨质疏松症的手段的局限性，寻找骨质疏松早期诊断及预后相关的特异性分子标志物对实现骨质疏松的早期诊断及个体化治疗具有深远意义。
技术实现思路
为了弥补现有技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种可用于骨质疏松症(Osterarthritis，OA)早期诊断的分子标志物。本专利技术通过实验证明，在正常人和骨质疏松症患者的血液中中，CFAP20基因表达存在差异，据此认为CFAP20可以作为诊断骨关节炎的marker。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：本专利技术提供了检测CFAP20基因表达的产品在制备诊断骨质疏松症的工具中的应用。进一步，上面所提到的检测CFAP20基因表达的产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测CFAP20基因表达以诊断骨质疏松症的产品。进一步，所述用RT-PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增CFAP20基因的引物；所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增CFAP20基因的引物；所述用免疫检测诊断骨质疏松症的产品包括：与CFAP20蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断骨质疏松症的产品包括：与CFAP20基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断骨质疏松症的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CFAP20蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CFAP20基因的核酸序列杂交的探针。在本专利技术的具体实施方案中，所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增CFAP20基因的引物的序列如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。优选地，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸或高通量测序平台。其中，高通量测序平台是一种特殊的诊断工具，检测CFAP20基因表达的产品可以应用于该平台实现对CFAP20基因的表达情况的检测。随着高通量测序技术的发展，对一个人的基因表达谱的构建将成为十分便捷的工作。通过对比疾病患者和正常人群的基因表达谱，容易分析出哪个基因的异常与疾病相关。因此，在高通量测序中获知CFAP20基因的异常与骨质疏松症相关也属于CFAP20基因的用途，同样在本专利技术的保护范围之内。本专利技术还提供了一种诊断骨质疏松症的工具，所述诊断工具包括芯片、试剂盒、试纸、或高通量测序平台。其中，所述芯片包括基因芯片、蛋白质芯片；所述基因芯片包括固相载体以及固定在固相载体的寡核苷酸探针，所述寡核苷酸探针包括用于检测CFAP20基因转录水平的针对CFAP20基因的寡核苷酸探针；所述蛋白质芯片包括固相载体以及固定在固相载体的CFAP20蛋白的特异性抗体；所述基因芯片可用于检测包括CFAP20基因在内的多个基因(例如，与骨质疏松症相关的多个基因)的表达水平。所述蛋白质芯片可用于检测包括CFAP20蛋白在内的多个蛋白质(例如与骨质疏松症相关的多个蛋白质)的表达水平。通过将多个与骨质疏松症的标志物同时检测，可大大提高骨质疏松症诊断的准确率。其中，所述试剂盒包括基因检测试剂盒和蛋白免疫检测试剂盒；所述基因检测试剂盒包括用于检测CFAP20基因转录水平的试剂；所述蛋白免疫检测试剂盒包括CFAP20蛋白的特异性抗体。进一步，所述试剂包括使用RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交或芯片方法检测CFAP20基因表达水平过程中所需的试剂。优选度，所述试剂包括针对CFAP20基因的引物和/或探针。根据CFAP20基因的核苷酸序列信息容易设计出可以用于检测CFAP20基因表达水平的引物和探针。与CFAP20基因的核酸序列杂交的探针可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合体、PNA或其它衍生物。所述探针的长度没有限制，只要完成特异性杂交、与目的核苷酸序列特异性结合，任何长度都可以。所述探针的长度可短至25、20、15、13或10个碱基长度。同样，所述探针的长度可长至60、80、100、150、300个碱基对或更长，甚至整个基因。由于不同的探针长度对杂交效率、信号特异性有不同的影响，所述探针的长度通常至少是14个碱基对，最长一般不超过30个碱基对，与目的核苷酸序列互补的长度以15-25个碱基对最佳。所述探针自身互补序列最好少于4个碱基对，以免影响杂交效率。所述高通量测序平台包括检测CFAP20基因表达水平的试剂。所述试纸包括试纸载体和固定在试纸载体上的寡核苷酸，所述寡核苷酸能够检测CFAP20基因的转录水平。进一步，所述CFAP20蛋白的特异性抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体。所述CFAP20蛋白的特异性抗体包括完整的抗体分子、抗体的任何片段或修饰(例如，，嵌合抗体、scFv、Fab、F(ab’)2、Fv等。只要所述片段能够保留与CFAP20蛋白的结合能力即可。用于蛋白质水平的抗体的制备时本领域技术人员公知的，并且本专利技术可以使用任何方法来制备所述抗体。在本专利技术的具体实施方案中，所述针对CFAP20基因的引物序列如下：正向引物序列如SEQIDNO.3所示，反向引物如SEQIDNO.4所示。用于诊断骨质疏松症的CFAP20基因及其表达产物的来源包括但不限于血液、组织液、尿液、唾液、脊髓液等可以获得基因组DNA的体液。在本专利技术的具体实施方案中，用于诊断骨质疏松症的CFAP20基因及其表达产物的来源是血液。在本专利技术的上下文中，“CFAP20基因”包括CFAP20基因以及CFAP20基因的任何功能等同物的多核苷酸。CFAP20基因包括与目前国际公共核酸本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测CFAP20基因表达的产品在制备诊断骨质疏松症的工具中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测CFAP20基因表达的产品在制备诊断骨质疏松症的工具中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述产品包括：通过RT-PCR、实时定量PCR、免疫检测、原位杂交、芯片或高通量测序平台检测CFAP20基因表达水平以诊断骨质疏松症的产品。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述用RT-PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增CFAP20基因的引物；所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括一对特异扩增CFAP20基因的引物；所述用免疫检测诊断骨质疏松症的产品包括：与CFAP20蛋白特异性结合的抗体；所述用原位杂交诊断骨质疏松症的产品包括：与CFAP20基因的核酸序列杂交的探针；所述用芯片诊断骨质疏松症的产品包括：蛋白芯片和基因芯片；其中，蛋白芯片包括与CFAP20蛋白特异性结合的抗体，基因芯片包括与CFAP20基因的核酸序列杂交的探针。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述用实时定量PCR诊断骨质疏松症的产品至少包括的一对特异扩增CFAP20基因的引物如SEQIDNO.3和SEQIDNO.4所示。5.一种用于诊断骨质疏松症的工具，其特征在于，所述工具能够通过检测样本中CFAP20基因的表...

【专利技术属性】
技术研发人员：娄志国，苗芳，
申请(专利权)人：泰山医学院，
类型：发明
国别省市：山东,37