党参多糖COP‑W1及其制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种党参多糖COP‑W1及其制备方法及应用，本发明专利技术通过水提醇沉法提取，Sephacryl S‑200HR凝胶柱分离纯化等方案，得到了分子量为2.34×10

【技术实现步骤摘要】
党参多糖COP-W1及其制备方法及应用
本专利技术涉及药学
，尤其是一种党参多糖COP-W1及其制备方法及应用。
技术介绍
党参(CodonopsisRadix)为桔梗科党参属植物，有健脾益肺，养血生津之功效，主治于脾肺气虚，食少倦怠，咳嗽虚喘，气血不足，面色萎黄，心悸气短，津伤口渴，内热消渴等症。在亚洲中部和东部地区分布有42个党参物种，而在中国发现40种，主要分布于山西、陕西、四川、甘肃等省份。近年来的研究发现党参中的主要成分包括甾醇类、三萜类、党参苷类、内酯类、生物碱类和多糖。而多糖作为生物活性物质，能够抗病毒，并其可提高机体免疫力，并具有低毒和低耐药性等特点，已引起医药界的高度重视，显示了广阔的药用前景。近年来不断有实验对党参多糖进行研究分析，已发现其具有广泛的药理作用，包括抗肿瘤、调节机体免疫、抗病毒和抗氧化等等，而多糖的生物活性与其结构和理化性质紧密相关。为了探索其药理活性机制，则需要更加明确解析党参均一多糖的结构。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种党参多糖COP-W1；本专利技术的另一个目的是提供该党参多糖COP-W1的制备方法；本专利技术还有一个目的是提供党参多糖COP-W1在制备抗氧化剂中的应用。本专利技术是这样实现的：党参多糖COP-W1，分子量为2.34×104Da，由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖组成，甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖的摩尔比为20.3：1：1.3：36.1；其结构单元为：党参多糖COP-W1的制备方法，包括如下步骤：1)将干燥党参块根，剪切成1-2cm的小节，用7-8倍量工业酒精加热回流3-5次进行脱脂；2)将步骤1)中脱脂后的药渣用5-7倍量水提3次，温度为90℃，将水提液减压浓缩后，加入质量百分比为95％的乙醇至含醇量达80-82％，静置24h，弃去上清液，收集沉淀；3)将步骤2)中沉淀复溶后加胃蛋白酶至其含量为0.3-0.5％，于37℃下恒温水浴12h，去除沉淀，重复至紫外扫描无蛋白特征吸收峰；4)对步骤3)中上清液浓缩后加5-6倍量工业酒精，静置24h，收集沉淀，重复3次后进行冷冻干燥，得党参粗多糖粉末；5)将步骤4)中获得的党参粗多糖粉末用蒸馏水完全溶解后经SephacrylS-200HR凝胶柱分离，用0.2mol/L的NaCl溶液洗脱，再用苯酚硫酸法检测，收集洗脱曲线中的主峰部分；6)将步骤5)中收集的洗脱液浓缩后，采用SephadexG-25凝胶柱分离，蒸馏水洗脱，再用3500Da的透析袋透析2d脱盐，最后收集袋内的溶液进行浓缩冷冻干燥，得到党参多糖COP-W1。党参多糖COP-W1在制备抗氧化剂中的应用。本专利技术发现了通过水提醇沉法提取，SephacrylS-200HR凝胶柱分离纯化等方案，得到了分子量为2.34×104Da、由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖和半乳糖组成的具有分子量的党参均一多糖，得到的党参均一多糖具有抗氧化活性，可清除DPPH自由基，具有一定的应用前景。附图说明图1为党参粗多糖组分过SephacrylS-200HR柱的洗脱曲线；图2为COP-W1的HPGPC凝胶色谱图；图3为Dextran系列多糖分子量标准曲线；图4为六种标准单糖PMP衍生后HPLC谱图；图5为COP-W1PMP衍生后HPLC谱图；图6为COP-W1的IR谱图；图7为COP-W1甲基化后的总离子流色谱图；图8为2,3,4-Me3-Galp的质谱图；图9为2,3,4,6-Me4-Galp的质谱图；图10为3,4-Me2-Galp的质谱图；图11为2,3,6-Me3-Manp的质谱图；图12为2,3,6-Me3-Galp的质谱图；图13为2,4-Me2-Manp的质谱图；图14为2,4,6-Me3-Galp的质谱图；图15为2,3,4-Me3-Manp的质谱图；图16为COP-W1的1H谱图；图17为COP-W1的13C谱图；图18为COP-W1的HSQC谱图；图19为COP-W1的HMBC谱图；图20为COP-W1的1H-1HCOSY谱图；图21为Vc对DPPH自由基的清除率；图22为COP-W1和Vc对DPPH自由基的清除率对比图。具体实施方式本专利技术的实施例1：党参多糖COP-W1的制备1.党参粗多糖的提取：将干燥党参块根，剪切成1cm左右小节，用7倍量工业酒精加热回流3次，脱脂后的药渣用5倍量水提3次，温度为90℃，水提液减压浓缩，加入95％乙醇至含醇量达80％，静置24h，弃去上清液，收集沉淀；沉淀复溶后加胃蛋白酶至其含量为0.3％，于37℃下恒温水浴12h，去除沉淀，重复4次至紫外扫描无蛋白特征吸收峰；上清液浓缩后加5倍量工业酒精，静置24h，收集沉淀，重复3次后冷冻干燥，得党参粗多糖粉末。2.党参多糖的纯化：取党参粗多糖1g，用10mL水溶解，经SephacrylS-200HR柱分离，0.2mol/L的NaCl溶液洗脱，苯酚硫酸法检测，收集洗脱曲线中的主峰部分，浓缩后采用SephadexG-25凝胶柱分离，蒸馏水洗脱，再用3500Da的透析袋透析2d脱盐，之后冷冻干燥，得到党参多糖COP-W1。3.党参多糖COP-W1的纯度鉴定：高效液相色谱条件：Ultrahydrogel250色谱柱，流动相为0.2mol/L的NaNO3溶液，流速为0.6mL/min，柱温35℃，检测器为RID(示差折光检测器)。多糖COP-W1用适量水溶解，进样量为20μL，结果色谱图中呈单一对称峰，说明该组分为均一多糖。4.党参多糖COP-W1分子量的确定：取1mg分子量为1K、5K、12K、25K、50KDa的普鲁兰多糖分别溶于1mL水中，色谱条件同上，用高效液相分析。记录保留时间，以分子量的对数(logM)为纵坐标，保留时间(t)为横坐标，得标准曲线y＝2.544+0.6998x-0.0473x2，将COP-W1出峰时间代入曲线方程，得COP-W1的分子量为2.34×104Da。实施例2：党参均一多糖COP-W1的结构表征1.多糖组分分析：取少量的COP-W1经4mol/LCF3COOH在110℃条件下水解4h，水解反应结束后蒸干水解液，加100μL0.6mol/LNaOH溶液充分溶解，加200μL0.5mol/LPMP甲醇溶液(现用现配)，密封，漩涡混匀，于70℃水浴下反应100min，冷却，再加200μL0.3mol/LHCl溶液中和，加水至终体积为1mL，再用1mL氯仿萃取，收集上层水相，重复萃取3次，用0.22μm微孔滤膜过滤，取20μL进行HPLC分析，与标准单糖PMP衍生物出峰时间对照确定：COP-W1主要是甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖组成，摩尔比为20.3:1:1.3:36.1。2.多糖IR分析：样品采用KBr压片法进行IR扫描，从IR图中COP-W1呈现典型的多糖吸收特征，其中3446.35cm-1为O-H键的伸缩振动峰，2919.77cm-1为C-H键的伸缩振动峰，1457.96cm-1为C-H键的变角振动峰，1112.65cm-1为吡喃环中C-O键的伸缩振动峰，而1636.65cm-1为CO2或共生水引起的伸缩振动峰，875.68cm-1为β构型及甘露糖的特征峰，840.96cm-1为α构型的特征峰，需注意的是，在1720cm-1附近没有糖醛酸的特征吸收峰，说明本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种党参多糖COP‑W1，其特征在于：分子量为2.34×10

【技术特征摘要】
1.一种党参多糖COP-W1，其特征在于：分子量为2.34×104Da，由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖组成，甘露糖、鼠李糖、葡萄糖及半乳糖的摩尔比为20.3：1：1.3：36.1；其结构单元为：2.一种如权利要求1所述的党参多糖COP-W1的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将干燥党参块根，剪切成1-2cm的小节，用7-8倍量工业酒精加热回流3-5次进行脱脂；2)将步骤1)中脱脂后的药渣用5-7倍量水提3次，温度为90℃，将水提液减压浓缩后，加入质量百分比为95％的乙醇至含醇量达80-82％，静置24h，弃去上清液，收集沉淀；3)将步骤2)中沉淀复溶后加胃蛋白酶至其含量为0.3-0.5％，于37℃...

【专利技术属性】
技术研发人员：余兰，吴倩男，
申请(专利权)人：遵义医学院，
类型：发明
国别省市：贵州,52