本发明专利技术公开一种鲍鱼肌肉多糖及其制备方法和应用，所述多糖主要由葡萄糖及甘露糖组成，分子量为3200Da，其主链是由葡萄糖通过1→4糖苷键和1→6糖苷键构成，侧链是由1→6糖苷键组成，糖残基为α构型。本发明专利技术提取的鲍鱼肌肉多糖具有良好的抑制乳腺癌和肝癌细胞生长繁殖的活性，对鲍鱼的产品开发，将起到多元化综合利用。
Abalone muscle polysaccharide and preparation method and application thereof
The invention discloses a abalone polysaccharide and preparation method and application thereof, wherein the polysaccharide was composed of glucose and mannose. The molecular weight of 3200Da, the main chain is 4 and 1, 6 of the glycosidic bond glycosidic bond composed of glucose by 1, and the side chain is composed of 1 to 6 of the glycosidic bond, residual sugar for a configuration. The abalone muscle polysaccharide extracted by the invention has good activity of inhibiting the growth and reproduction of the breast cancer and the liver cancer cells, and the product development of the abalone can be diversified and utilized comprehensively.
【技术实现步骤摘要】
一种鲍鱼肌肉多糖及其制备方法与应用
本专利技术涉及一种多糖，尤其涉及一种从鲍鱼肌肉提取的新型多糖及其制备工艺和应用。
技术介绍
鲍鱼被誉为海洋人参，蛋白、多糖等营养物质和生物活性成分有助于促进人体健康。由于鲍鱼来源的多糖具有良好的抗氧化、增强免疫调节、抗肿瘤和抗凝血活性等功能，因此近年来从鲍鱼提取多糖已引起广泛的关注。中国专利公开号CN102898538A公开一种鲍鱼内脏酸性多糖及含有其的保健品和应用，其鲍鱼内脏多糖主要是由鼠李糖、葡萄糖醛酸和半乳糖构成，可以用作一种保肝护肝的功能因子。然而，有关鲍鱼肌肉多糖的结构和功能却鲜有报道。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种鲍鱼肌肉多糖，所述多糖从鲍鱼肌肉中提取，具有良好的抑制乳腺癌和肝癌细胞生长繁殖的活性。本专利技术还提供了所述鲍鱼肌肉多糖的制备工艺和应用。本专利技术的内容为：一种鲍鱼肌肉多糖，主要由葡萄糖及甘露糖组成，分子量为3200Da，其主链是由葡萄糖通过1→4糖苷键和1→6糖苷键构成，侧链是由1→6糖苷键组成，糖残基为α构型，具体结构为：本专利技术还提供了所述鲍鱼肌肉多糖的制备方法，步骤为：1、鲍鱼肌肉去除表面杂质后，与2-4倍重量冷水混合搅碎，然后在10-30℃下搅拌萃取0.5-2h，通过5000rpm离心15-30min除去不溶物后，获得上清液。2、将步骤1获得的上清液用氢氧化钠调整pH至9.0，然后先后加入上清液质量体积比的1-2g/L碱性蛋白酶和1-2g/L胶原酶，在45-55℃下酶解1-3h。3、用盐酸将步骤2获得的上清液的pH调整至6.0-7.0，再分别加入液体质量体积比的1-2g/L中性蛋白酶和1-2g/L木瓜蛋白酶，在45-55℃下酶解1-3h。4、酶解结束后，通过旋蒸浓缩后，往浓缩液中加入无水酒精，使溶液中的酒精浓度达到20-40％，于常温下静置30-60min后，过滤除去沉淀。5、在步骤4获得的滤液中继续缓慢添加无水酒精，使溶液中的酒精浓度达到80％，放在4℃下静置8-16h可以获得鲍鱼肌肉重量5-6％的沉淀物。6、上述沉淀物用5-10倍沉淀物重量的蒸馏水溶解后，加入溶液质量体积比的5-20g/L的活性炭，在30-40℃下脱色1-3h后，通过5000rpm离心15-30min、过滤除去活性炭后，利用DEAE-52阴离子交换柱分离，收集水洗分离组分，再利用Sephadex-G交联葡聚糖凝胶层析纯化，最后通过冷冻干燥获得鲍鱼肌肉多糖，纯度为92％。本专利技术还提供了上述鲍鱼肌肉多糖在治疗乳腺癌药品和保健品中的应用。本专利技术还提供了上述鲍鱼肌肉多糖在治疗肝癌药品和保健品中的应用。本专利技术的有益效果：本专利技术提取的鲍鱼肌肉多糖为3200Da的葡聚糖，易于合成；具有良好的抑制乳腺癌和肝癌细胞生长繁殖的活性；本专利技术明确了鲍鱼肌肉多糖的分子结构，可以为合成提供参考；本专利技术采用冷水浸提，提取多糖后的鲍鱼肌肉残渣还可以用于其他产品开发，将起到多元化综合利用。【附图说明】图1是鲍鱼肌肉多糖甲基化前(a)和甲基化后(b)的红外图谱；图2是鲍鱼肌肉多糖的1HNMR谱图；图3是鲍鱼肌肉多糖的13CNMR谱图；图4是鲍鱼肌肉多糖的HSQC谱图；图5是鲍鱼肌肉多糖的COSY谱图；图6是鲍鱼肌肉多糖的TOCSY谱图；图7是鲍鱼肌肉多糖的HMBC谱图；图8是鲍鱼肌肉多糖的ROESY谱图；图9是鲍鱼肌肉多糖主链分子结构图；图10是鲍鱼肌肉多糖对人体肝癌细胞(HepG2细胞)生长抑制的影响；图11是鲍鱼肌肉多糖对人体乳腺癌细胞(MDA-MB-231细胞)生长抑制的影响。【具体实施方式】以下通过具体实施例对本专利技术作进一步详细说明，以下对于具体实施方案的描述仅用于解释本专利技术，并不限定本专利技术。实施例11、1kg的鲍鱼肌肉去除表面杂质后，与4L冷水混合搅碎，然后在10℃下搅拌萃取2h，通过5000rpm离心15min除去不溶物后，获得4.5L的上清液。2、将步骤1获得的上清液用氢氧化钠调整pH至9.0，然后先后加入4.5g碱性蛋白酶和4.5g胶原酶，在50℃下酶解2h。3、用盐酸将步骤2获得的上清液的pH调整至6.5，再分别加入4.5g中性蛋白酶和4.5g木瓜蛋白酶，在50℃下酶解2h。4、酶解结束后，通过旋蒸浓缩至0.5L，往浓缩液中加入0.33L的无水酒精，于常温下静置30min后，过滤除去沉淀。5、在步骤4获得的滤液中继续缓慢添加1.67L的无水酒精，放在4℃下静置8h可以获得50g左右的沉淀物。6、上述沉淀物用0.50L的蒸馏水溶解后，加入5g的活性炭，在30℃下脱色3h后，通过5000rpm离心15min、过滤除去活性炭后，利用DEAE-52阴离子交换柱分离，收集水洗分离组分，再利用Sephadex-G交联葡聚糖凝胶层析纯化，最后通过冷冻干燥获得10g鲍鱼肌肉多糖，纯度为92％。7、采用苯酚-硫酸法，以半乳糖作为标准品进行检测鲍鱼肌肉多糖的总糖含量；采用凯氏定氮法测量蛋白含量；单糖组成采用高效液相色谱法测定；多糖结构采用核磁共振(NMR)进行分析；多糖对肿瘤细胞的抑制作用通过四唑盐(MTT)比色法进行检测。实施例21、1kg的鲍鱼肌肉去除表面杂质后，与2L冷水混合搅碎，然后在20℃恒温箱里搅拌萃取30min，通过5000rpm离心30min除去不溶物后，获得2.5L的上清液。2、将步骤1获得的上清液用氢氧化钠调整pH至9.0，然后先后加入5.0g碱性蛋白酶和5.0g胶原酶，在45℃下酶解1h。3、用盐酸将步骤2获得的上清液的pH调整至6.0，再分别加入5.0g中性蛋白酶和5.0g木瓜蛋白酶，在45℃下酶解1h。4、酶解结束后，通过旋蒸浓缩至0.4L，往浓缩液中加入0.1L的无水酒精，于常温下静置60min后，过滤除去沉淀。5、在步骤4获得的滤液中继续缓慢添加1.5L的无水酒精，放在4℃下静置16h可以获得60g左右的沉淀物。6、上述沉淀物用0.30L的蒸馏水溶解后，加入3g的活性炭，在35℃下脱色1h后，通过5000rpm离心30min、过滤除去活性炭后，利用DEAE-52阴离子交换柱分离，收集水洗分离组分，再利用Sephadex-G交联葡聚糖凝胶层析纯化，最后通过冷冻干燥获得11g鲍鱼肌肉多糖，纯度为92％。7、采用苯酚-硫酸法，以半乳糖作为标准品进行检测鲍鱼肌肉多糖的总糖含量；采用凯氏定氮法测量蛋白含量；单糖组成采用高效液相色谱法测定；多糖结构采用核磁共振(NMR)进行分析；多糖对肿瘤细胞的抑制作用通过四唑盐(MTT)比色法进行检测。实施例31、1kg的鲍鱼肌肉去除表面杂质后，与3L冷水混合搅碎，然后在30℃恒温箱里搅拌萃取30min，通过5000rpm离心25min除去不溶物后，获得3.5L的上清液。2、将步骤1获得的上清液用氢氧化钠调整pH至9.0，然后先后加入1.75g碱性蛋白酶和1.75g胶原酶，在55℃下酶解3h。3、用盐酸将步骤2获得的上清液的pH调整至7.0，再分别加入1.75g中性蛋白酶和1.75g木瓜蛋白酶，在55℃下酶解3h。4、酶解结束后，通过旋蒸浓缩至0.3L，往浓缩液中加入0.13L的无水酒精，于常温下静置60min后，过滤除去沉淀。5、在步骤4获得的滤液中继续缓慢添加0.77L的无水酒精，放在4℃下静置12h可以获得60g左右的沉淀本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鲍鱼肌肉多糖，其特征在于：所述多糖主要由葡萄糖及甘露糖组成，分子量为3200Da，其主链是由葡萄糖通过1→4糖苷键和1→6糖苷键构成，侧链是由1→6糖苷键组成，糖残基为α构型，具体结构为：
【技术特征摘要】
1.一种鲍鱼肌肉多糖，其特征在于：所述多糖主要由葡萄糖及甘露糖组成，分子量为3200Da，其主链是由葡萄糖通过1→4糖苷键和1→6糖苷键构成，侧链是由1→6糖苷键组成，糖残基为α构型，具体结构为：2.一种权利要求1所述的鲍鱼肌肉多糖的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)、鲍鱼肌肉去除表面杂质后，与2-4倍重量冷水混合搅碎，然后在10-30℃下搅拌萃取0.5-2h，通过5000rpm离心15-30min除去不溶物后，获得上清液；(2)、将步骤1获得的上清液用氢氧化钠调整pH至9.0，然后先后加入上清液质量体积比的1-2g/L碱性蛋白酶和1-2g/L胶原酶，在45-55℃下酶解1-3h；(3)、用盐酸将步骤2获得的上清液的pH调整至6.0-7.0，再分别加入液体质量体积比的1-2g/L中性蛋白酶和1-2g/L木瓜蛋白酶，在45-55℃下酶解1-3h；...
【专利技术属性】
技术研发人员：翁武银，王军玲，陈俊，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建,35
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