一种代代花萼多糖及其制备方法与应用技术

本发明专利技术属于中药领域，公开了一种代代花萼多糖及其制备方法与应用。本发明专利技术通过热水回流提取、脱色处理和醇沉等步骤，从代代的花萼中提取到代代花萼粗多糖。通过将代代花萼粗多糖进一步纯化，得到精制多糖。本发明专利技术的粗多糖和精制多糖具有抗氧化、抗肿瘤和免疫增强活性，且使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于中药的
，具体涉及一种代代花萼多糖及其制备方法与应用。
技术介绍
多糖是除了蛋白质和核酸以外的一类重要的生物高分子化合物。现代药理研究表明多糖具有多种生理活性，包括抗氧化、抗肿瘤、抗病毒、降血脂、延缓衰老、增强免疫功能等。免疫调节作用是多糖最重要的生物活性功能，一直是人们研究的热点。免疫细菌多糖和人工合成的化合物，其不良反应和副作用已引起人们广泛注意。而大多数高等植物来源的多糖均为无不良反应的物质，不会对机体产生较大的副作用，因此，从植物中分离的多糖在生物医学上引起极大关注。目前已对百余种植物多糖进行了活性相关的研究报道。研究表明植物多糖可通过与免疫细胞表面的多种受体结合、激活不同的信号通路来调控动物机体内的免疫系统，包括：刺激巨噬细胞、T/B淋巴细胞、自然杀伤细胞的分泌或增殖；调节细胞因子的释放；促进抗体的分泌；激活补体系统等。对这些活性物质的作用机制也在不断发展，其中多糖对非特异性诱导的免疫机制更受到人们的重视。植物多糖是最理想的免疫候选药物。代代(CitrusaurantiumL.var.amaraEngl)是芸香科柑橘属植物酸橙的一个变种，代代花是其花蕾的干品，具有良好的药理作用，常用于治疗气郁不舒、脘腹胀痛、积食不化、恶心呕吐等。目前国内外对代代花的研究主要以其挥发油类化合物为主，主要采用水蒸气蒸馏法提炼精油，并广泛应用于化妆品、香精、香料等行业中。而对代代花多糖的研究报道几乎没有。大多数天然活性多糖是无毒副作用的天然绿色产品。随着研究的不断深入，天然多糖越来越成为食品、保健品、医药等领域的研究热点。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足和缺点，本专利技术的首要目的在于提供一种代代花萼粗多糖和精制多糖的制备方法。本专利技术的另一目的在于提供上述制备方法制备得到的代代花萼粗多糖和精制多糖。本专利技术的再一目的在于提供上述代代花萼粗多糖和精制多糖的应用。本专利技术的目的通过下述方案实现：一种代代花萼粗多糖的制备方法，包含如下步骤：(1)将代代(CitrusaurantiumL.var.amaraEngl)花萼粉碎后过筛，得到代代花萼粗粉；蒸馏水加热回流提取代代花萼粗粉，然后将提取液离心，并将上清液减压浓缩，得到浓缩的代代花萼粗多糖溶液；(2)将多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，脱色处理，过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(3)在浓缩糖液中加入沉淀剂进行沉淀，然后离心，弃去上清液，收集沉淀物并干燥，得到代代花萼粗多糖(记为CAVAPs)。步骤(1)中热水回流提取的次数为2～4次；步骤(1)中所述加热回流的温度为75～100℃；所述热水回流每次提取的时间为2～4h；步骤(1)中所述热水回流提取的水料比为15:1～30:1(质量比)。步骤(1)和(2)中所述减压浓缩的温度为40～60℃。步骤(1)中所述的离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为8～12min；所述过滤的次数为2～4次。步骤(2)所述脱色处理的条件为于40～60℃水浴2～4h；步骤(2)中所述大孔吸附树脂选用为D354FD树脂；步骤(2)中所述大孔吸附树脂的预处理的方法为：将大孔吸附树脂先用蒸馏水浸泡12～24h，然后先用质量分数为3％～5％的盐酸溶液浸泡0.5～3h，蒸馏水洗至中性，再用质量分数为3％～5％的氢氧化钠溶液浸泡0.5～3h，蒸馏水洗至中性，得到经过预处理的大孔吸附树脂。步骤(3)中所述沉淀剂为无水乙醇或体积分数为90％～100％的乙醇溶液；步骤(3)中所述沉淀的温度为0～4℃。步骤(3)中所述沉淀剂的加入量为浓缩糖液体积的3～5倍；步骤(3)中所述沉淀的时间为8～24h。步骤(3)中所述离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为12～15min；步骤(3)中所述干燥的温度为40～60℃，干燥至恒重。一种代代花萼粗多糖(CAVAPs)，通过上述制备方法制备得到。所述代代花萼精制多糖通过将上述代代花萼粗多糖(CAVAPs)进一步纯化得到；所述代代花萼精制多糖为六种代代花萼精制多糖(记为CP-I、CP-II、CP-III、CP-IV、CP-V和CP-VI)所述的代代花萼精制多糖(CP-I)为均一组分，其分子量(Mn)为1.3×104Da；具体为13169Da；所述的代代花萼精制多糖(CP-II)为均一组分，其分子量(Mn)为7.5×103Da；具体为7538Da；所述的代代花萼精制多糖(CP-III、CP-IV、CP-V和CP-VI)非均一组分。所述的代代花萼精制多糖(记为CP-I、CP-II、CP-III、CP-IV、CP-V和CP-VI)通过如下步骤制备得到：(1)将经过预处理的DEAE-52树脂于40～60℃旋转蒸发除气泡后转入Z型层析柱中，用恒流泵泵送蒸馏水以使填料装柱均匀，平衡后流速5～10s/滴；(2)将代代花萼粗多糖配制成多糖溶液，转入层析柱中，依次用蒸馏水、0.05mol/LNaCl、0.1mol/LNaCl、0.15mol/LNaCl、0.2mol/LNaCl和0.3mol/LNaCl溶液洗脱，流速5～10s/滴，分别收集各流份，苯酚-硫酸法跟踪检测洗脱液，测定490nm下的吸光度，绘制洗脱曲线，同一吸收峰内的洗脱液合并；然后旋蒸浓缩，真空冷冻干燥，经过DEAE-52离子交换柱层析后得到六个组分，其中，蒸馏水洗脱得到的精制多糖命名为CP-I，0.05mol/LNaCl洗脱得到的精制多糖命名为CP-II，0.1mol/LNaCl洗脱得到的精制多糖命名为CP-III，0.15mol/LNaCl洗脱得到的精制多糖命名为CP-IV，0.2mol/LNaCl洗脱得到的精制多糖命名为CP-V，0.3mol/LNaCl洗脱得到的精制多糖命名为CP-VI。步骤(1)中所述的DEAE-52树脂预处理的方法为：将DEAE-52树脂用水4～30℃浸泡12～24h；再用0.5mol/L的盐酸溶液浸泡0.5～2h；0.5mol/L的NaOH溶液浸泡0.5～2h，过滤，水洗至中性，得到经过预处理的DEAE-52树脂；步骤(2)中所述的旋蒸浓缩的温度为40～60℃；所述代代花萼粗多糖或精制多糖在制备抗癌、抗氧化、免疫增强药物中的应用。所述代代花萼粗多糖或精制多糖可作为新型的抗癌、抗氧化、免疫增强药物。一种免疫增强药物，含有上述代代花萼粗多糖或精制多糖；本专利技术的原理：植物来源的多糖具有抗氧化、抗肿瘤和增强免疫功能等多种生物活性。多糖尤其能通过调节巨噬细胞的免疫功能体现出各种有益的药理作用。本专利技术通过体外实验发现和确证植物粗多糖或精制多糖具有抗氧化、抗肿瘤和免疫增强活性，且使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。本专利技术相对于现有技术具有如下的优点及效果：(1)本专利技术首次发现代代花萼粗多糖(CAVAPs)对DPPH自由基具有一定的清除和抑制作用；(2)本专利技术首次发现代代花萼粗多糖(CAVAPs)对人乳腺癌细胞MCF-7和肺癌细胞HCC827具有一定的增殖抑制作用；(3)本专利技术首次发现代代花萼粗多糖(CAVAPs)和精制多糖(CP-I、CP-II、CP-III、CP-IV、CP-V和CP-VI)能显本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)将代代花萼粉碎后过筛，得到代代花萼粉；蒸馏水加热回流提取代代花萼粉，然后将提取液离心，并将上清液减压浓缩，得到浓缩的代代花萼粗多糖溶液；(2)将多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，脱色处理，过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(3)在浓缩糖液中加入沉淀剂进行沉淀，然后离心，弃去上清液，收集沉淀物并干燥，得到代代花萼粗多糖。

【技术特征摘要】
1.一种代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：包含如下步骤：(1)将代代花萼粉碎后过筛，得到代代花萼粉；蒸馏水加热回流提取代代花萼粉，然后将提取液离心，并将上清液减压浓缩，得到浓缩的代代花萼粗多糖溶液；(2)将多糖溶液和经过预处理的大孔吸附树脂混合，脱色处理，过滤出多糖溶液，并用水反复洗出树脂中吸附的多糖，将脱色后的多糖溶液合并，减压浓缩，得到浓缩糖液；(3)在浓缩糖液中加入沉淀剂进行沉淀，然后离心，弃去上清液，收集沉淀物并干燥，得到代代花萼粗多糖。2.根据权利要求1所述代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述加热回流的温度为75～100℃；所述热水回流提取的时间为2～4h；所述热水回流提取的次数为2～4次；步骤(2)所述脱色处理的条件为于40～60℃水浴2～4h；步骤(3)中所述沉淀剂为无水乙醇或体积分数为90～100％的乙醇溶液；所述的沉淀的温度为0～4℃。3.根据权利要求1所述代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：步骤(2)中所述的大孔吸附树脂选用为D354FD树脂；步骤(2)中所述大孔吸附树脂的预处理的方法为：将大孔吸附树脂先用蒸馏水浸泡12～24h，然后先用质量分数为3～5％的盐酸溶液浸泡0.5～3h，蒸馏水洗至中性，再用质量分数为3～5％的氢氧化钠溶液浸泡0.5～3h，蒸馏水洗至中性，得到经过预处理的大孔吸附树脂。4.根据权利要求1所述代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述沉淀剂的加入量为浓缩糖液体积的3～5倍；步骤(3)中所述沉淀的时间为8～24h；步骤(1)中所述的热水回流提取的水料比即质量比为15:1～30:1；步骤(1)和(2)中所述的减压浓缩的温度为40～60℃。5.根据权利要求1所述代代花萼粗多糖的制备方法，其特征在于：步骤(1)中所述离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为8～12min；所述过滤的次数为2～4次；步骤(3)中所述离心的转速为3000～5000r/min；所述离心的时间为12～15min；步骤(3)中所述干燥的温度为40～60℃。6.一种由权利要求1～5任一项所述的制备方法得到的代代花萼粗多...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜建国，申春燕，宋德幸，
申请(专利权)人：华南理工大学，
类型：发明
国别省市：广东;44