检测茄匍柄霉菌的引物对及其应用制造技术

本发明专利技术公开了检测茄匍柄霉菌的引物对及其应用。本发明专利技术公开的检测茄匍柄霉菌的引物对由名称分别为Stem‑g7F和Stem‑g7R的单链DNA组成；Stem‑g7F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.1的单链DNA；Stem‑g7R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA。利用本发明专利技术的引物对检测茄匍柄霉菌的灵敏度提高了1000倍，达4.285×10

Detection of tomato Stemphylium botryosum primer and its application

The invention discloses a detection eggplant Stemphylium botryosum primer and its application. The invention discloses a primer detection eggplant Stemphylium botryosum of single stranded DNA by name were Stem g7F and Stem g7R Stem g7F; nucleotide sequence is a single stranded DNA sequence of SEQ ID No.1; Stem g7R nucleotide sequence is a single stranded DNA sequence of SEQ ID No.2 the. Using a primer on detection sensitivity of eggplant Stemphylium botryosum increased 1000 times, up to 4.285 x 10

【技术实现步骤摘要】
检测茄匍柄霉菌的引物对及其应用
本专利技术涉及生物
中，检测茄匍柄霉菌的引物对及其应用。
技术介绍
番茄(LycopersiconesculentumMill)，是茄科番茄属一年或多年生草本植物，原产南美洲，是世界上广泛栽培的蔬菜作物，我国南北方广泛栽培。番茄病害种类复杂，主要包括各类真菌病害、细菌病害和病毒病，其中真菌病害种类比较多，早疫病、晚疫病、灰霉病、叶霉病等均是生产中比较常见的番茄病害，而对于番茄灰叶斑病发生的报道比较少见。番茄灰叶斑病在世界范围内均有发生，在温暖潮湿地区发生严重。美国、以色列、新西兰等地均报道过由匍柄霉菌引起的番茄叶斑病，给当地番茄生产造成了巨大的经济损失。近年来随着进口番茄品种在国内的大面积推广，番茄灰叶斑病发生越来越重。2002年，在山东鱼台种植的日光温室番茄中，病棚率达到了43％，且到了第二年病棚率达到90％以上，番茄减产率达到20％左右，危害严重的棚室减产80％以上。番茄灰叶斑病由匍柄属真菌(Stemphylium)引起，该病在幼叶及老叶上均可出现。发病初期叶面布满圆形或不规则形小点，病斑中央浅褐色，周围深褐色，后期易破裂穿孔。叶片边缘也可以发病，沿叶缘呈不规则形病斑，随着扩展，病斑连城片状，深褐色，随叶片变干，斑点渐褪为灰白至灰褐色，症状变化很快，危害严重时导致全株叶片变黄。匍柄属真菌(Stemphylium)是丝状分生孢子一类常见真菌，可以引起多种植物的病害，到目前为止，世界上已经报道的大约150种，我国记载40种以上。引起我国番茄灰叶斑病的主要是匍柄属真菌的两个种，茄匍柄霉菌(Stemphyliumsolani)和番茄匍柄霉菌(Stemphyliumlycopersici)，近几年调查研究发现，茄匍柄霉菌成为危害番茄的主要种，其菌丝分枝、分隔，灰褐色，分生孢子梗分化不明显，单生或2-3根束生，圆柱状，褐色，光滑。分生孢子顶生，多单生，倒棍棒状，褐色，光滑，砖格状分隔，一般有1-5个横隔，数个纵隔膜，在分生孢子中间隔膜处缢缩。常用的番茄灰叶斑病鉴定检测方法主要是形态鉴定法，通过镜检的方式，观察分生孢子的形态，确定病害危害的种类，这个结果比较准确，但也还存在一些问题，在病害发生初期，显症之前，并没有产孢，通过传统的镜检方式无法准确判断病害的种类，而此时是药剂防治的一个关键时期，这个时期用药，能起到事半功倍的效果。目前急需一种可以快速茄匍柄霉菌尤其可以在感染病原菌初期检测茄匍柄霉菌的方法。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是如何检测茄匍柄霉菌(Stemphyliumsolani)。为解决上述技术问题，本专利技术首先提供了可以用于检测或辅助检测茄匍柄霉菌或检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害引物对，所述引物对由名称分别为Stem-g7F和Stem-g7R的单链DNA组成；所述Stem-g7F为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.1的单链DNA；所述Stem-g7R为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.2的单链DNA。所Stem-g7F和所述Stem-g7R的摩尔比可为1:1。所Stem-g7F和所述Stem-g7可独立包装，也可包装在一起。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了可以用于检测或辅助检测茄匍柄霉菌或检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害的系统，所述系统包括所述引物对。上述系统还可包括进行荧光定量PCR所需的试剂和/或仪器。所述进行荧光定量PCR所需的试剂可为天根生化科技(北京)有限公司的2×SYBRMix。所述进行荧光定量PCR所需的仪器可为Real-timePCR仪，如AppliedBiosystems7500RealTimePCRSystem(美国，ABI)。上述系统可由所述引物对与所述进行荧光定量PCR所需的试剂和/或仪器组成。所述系统可为包括相关试剂的试剂或试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述引物对的下述任一应用：X1、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌产品中的应用；X2、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害产品中的应用。X3、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌中的应用；X4、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述系统的下述任一应用：X1、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌产品中的应用；X2、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害产品中的应用。X3、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌中的应用；X4、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害中的应用。所述产品可为试剂或试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了所述引物对的制备方法，所述方法包括：将所述引物对的两条单链DNA分别进行包装。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测或辅助检测茄匍柄霉菌的方法，所述方法包括：以待测样品的基因组DNA为模板，用所述引物对进行荧光定量PCR，根据荧光定量PCR反应体系中物质的变化确定所述待测样品是否含有茄匍柄霉菌或是否为茄匍柄霉菌。所述荧光定量PCR反应体系中物质的变化可通过扩增曲线确定：所述荧光定量PCR反应体系的扩增曲线为S型扩增曲线，所述待测样品含有或候选含有茄匍柄霉菌或为或候选为茄匍柄霉菌；所述荧光定量PCR反应体系的扩增曲线非S型扩增曲线，所述待测样品不含有或候选不含有茄匍柄霉菌或非或候选非茄匍柄霉菌。所述荧光定量PCR反应体系中物质的变化也可通过检测反应产物的大小确定：所述荧光定量PCR反应产物含有150bp的DNA片段，所述待测样品含有或候选含有茄匍柄霉菌或为或候选为茄匍柄霉菌；所述荧光定量PCR反应产物不含有150bp的DNA片段，所述待测样品不含有或候选不含有茄匍柄霉菌或非或候选非茄匍柄霉菌。所述反应产物的大小可通过电泳检测。所述150bp的DNA片段可体现在100-200bp间有一条带。为解决上述技术问题，本专利技术还提供了检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害的方法，所述方法包括：以待测样品的基因组DNA为模板，用所述引物对进行荧光定量PCR，根据荧光定量PCR反应体系中物质的变化确定所述待测样品的病害是否为茄匍柄霉菌所致病害。所述荧光定量PCR反应体系中物质的变化可通过扩增曲线确定：所述荧光定量PCR反应体系的扩增曲线为S型扩增曲线，所述待测样品的病害为或候选为茄匍柄霉菌所致病害；所述荧光定量PCR反应体系的扩增曲线非S型扩增曲线，所述待测样品的病害不为或候选不为茄匍柄霉菌所致病害。所述荧光定量PCR反应体系中物质的变化也可通过检测反应产物的大小确定：所述荧光定量PCR反应产物含有150bp的DNA片段，所述待测样品的病害为或候选为茄匍柄霉菌所致病害；所述荧光定量PCR反应产物不含有150bp的DNA片段，所述待测样品的病害不为或候选不为茄匍柄霉菌所致病害。所述反应产物的大小可通过电泳检测。所述150bp的DNA片段可体现在100-200bp间有一条带。上文中，所述引物对的两条链在所述荧光定量PCR反应体系中的浓度均可为0.2μM。所述荧光定量PCR反应的退火温度可为60℃。所述退火条件具体可为60℃退火32s。所述荧光定量PCR反应的反应条件可为：95℃预变性15min，95℃变性10s，60℃退火32s，40个循环。本专利技术的检测茄匍柄霉菌引物对特异性好、鉴定快速：环境中，尤其是日光温室内，微生物种类繁多，茄匍柄霉菌在侵染番本文档来自技高网...

【技术保护点】
引物对，由名称分别为Stem‑g7F和Stem‑g7R的单链DNA组成；所述Stem‑g7F为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.1的单链DNA；所述Stem‑g7R为核苷酸序列是序列表中SEQ ID No.2的单链DNA。

【技术特征摘要】
1.引物对，由名称分别为Stem-g7F和Stem-g7R的单链DNA组成；所述Stem-g7F为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.1的单链DNA；所述Stem-g7R为核苷酸序列是序列表中SEQIDNo.2的单链DNA。2.用于检测或辅助检测茄匍柄霉菌或检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害的系统，包括权利要求1所述的引物对。3.根据权利要求2所述的系统，其特征在于：所述系统还包括进行荧光定量PCR所需的试剂和/或仪器。4.权利要求1所述引物对的下述任一应用：X1、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌产品中的应用；X2、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害产品中的应用。X3、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌中的应用；X4、在检测或辅助检测茄匍柄霉菌所致病害中的应用。5.权利要求2或3所述的系统的下述任一应用：X1、在制备检测或辅助检测茄匍柄霉菌产品中的应用；X2、...

【专利技术属性】
技术研发人员：李宝聚，谢学文，曹金强，石延霞，柴阿丽，
申请(专利权)人：中国农业科学院蔬菜花卉研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11