一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法及其应用。本发明专利技术一般地涉及生物医药检测技术领域，具体地说涉及一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法及其在毕赤酵母表达外源蛋白检测中的应用。所述毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法为将含有空表达载体的毕赤酵母全宿主蛋白溶液按分子量进行抗原分组，分别免疫动物，合并所得抗体，制得毕赤酵母宿主蛋白抗体。利用该方法制备所得抗体覆盖面全、免疫原性强，利用该抗体建立的ELISA检测方法检测结果特异性强、稳定可靠、检测灵敏度高。

Preparation method of Pichia pastoris host protein antibody and application thereof

The invention relates to a preparation method of an antibody of Pichia pastoris host protein and an application thereof. The invention generally relates to the technical field of biological medicine detection, in particular to a preparation method of an antibody of a host protein of Pichia pastoris and its application in the detection of exogenous proteins in Pichia pastoris. The preparation method of Pichia pastoris host protein antibody for containing the empty expression vector of Pichia pastoris whole host antigen protein solution were grouped according to molecular weight, were immunized animal, with the prepared antibody, Pichia pastoris host protein antibody. The antibody prepared by the method has the advantages of full coverage and strong immunogenicity, and the ELISA detection method established by the antibody has strong specificity, stable and reliable detection sensitivity and high detection result.

【技术实现步骤摘要】
一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法及其应用
本专利技术涉及生物医药检测
，具体的说涉及一种宿主蛋白抗体的制备方法及其应用，更具体的说涉及一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法及其在表达外源蛋白检测中的应用。
技术介绍
自上世纪80年代，由PhillipsPetroleum公司和SalkInstituteBiotechnology/IndustrialAssociates公司联合开发毕赤酵母表达系统以来，已经有超过1000种外源蛋白在该系统中得到了表达。毕赤酵母表达系统经过近三十年的发展，已基本成为非常完善的外源基因表达系统，具有易于高密度发酵，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、phytase、albumin、antibody、collagen等多种外源基因，大量的实例已经证实该系统为高效、实用、简便，以提高表达量并保持产物生物学活性为突出特征的外源基因表达系统，而且非常适宜于扩大为工业规模，目前还有多种该系统表达的治疗性蛋白处于开发之中。毕赤酵母表达系统在生物工程领域将发挥越来越重要的作用，促进更多外源基因在该系本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法，其特征在于：含有空表达载体的毕赤酵母全宿主蛋白溶液按分子量进行抗原分组，分别免疫动物，合并所得抗体，制得毕赤酵母宿主蛋白抗体。

【技术特征摘要】
1.一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法，其特征在于：含有空表达载体的毕赤酵母全宿主蛋白溶液按分子量进行抗原分组，分别免疫动物，合并所得抗体，制得毕赤酵母宿主蛋白抗体。2.一种毕赤酵母宿主蛋白抗体的制备方法，所述制备方法包含以下步骤：1）转化空表达载体的毕赤酵母进行培养和诱导表达，发酵液过滤收集上清；2）上清经纯化，浓缩除菌，制得毕赤酵母全宿主蛋白溶液；3）全宿主蛋白溶液按照分子量进行抗原分组；4）抗原组分别免疫动物，合并抗体，制得毕赤酵母宿主蛋白抗体。3.根据权利要求2所述的制备方法，步骤1）所述毕赤酵母空表达载体优选为pPICZα-A，毕赤酵母优选X33菌株；培养与诱导表达过程与含目的基因的基因工程毕赤酵母培养诱导表达过程相同，目的基因优选人血白蛋白基因。4.根据权利要求3所述的制备方法，步骤2）上清纯化步骤与含目的基因的基因工程毕赤酵母上清纯化步骤相同或是纯化步骤的一部分，纯化步骤优选进行阳离子交换层析，层析树脂优...

【专利技术属性】
技术研发人员：王志明，赵伟，王雪，段迎霞，贺丞，潘永刚，刘艳玲，段月娇，高健，段宝玲，
申请(专利权)人：华北制药集团新药研究开发有限责任公司，
类型：发明
国别省市：河北,13