快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法及定量分析方法技术

本发明专利技术公开了一种快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法及其定量分析方法，步骤如下：1)将食用油稀释后，加入磁性四氧化三铁微球对其中的阿维菌素类农药残留进行磁性固相萃取；2)步骤1)完成萃取后固液分离，所得固体产物即为吸附有阿维菌素类农药残留的磁性四氧化三铁微球，经洗涤、解吸、复溶后，所得溶液即为快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液；3)采用外标法经液相色谱‑串联质谱进行定量分析。本发明专利技术的前处理过程可以去除食用油中的大量基质，净化效果好，农药的回收率很好，结合液相色谱‑串联质谱对农药进行分离检测，大大提高了农药的分离效率，检测灵敏度和准确性高，且重现性好。

【技术实现步骤摘要】
快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法及定量分析方法
本专利技术属于快速分析检测
，特别涉及一种快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法及定量分析方法。
技术介绍
阿维菌素类化合物是具有大环内酯结构的杀虫剂，被广泛应用于农业和家畜业生产中。在我国，最常用的阿维菌素类物质主要是阿维菌素(ABA)、甲氨基阿维菌素(EMA)苯甲酸盐和伊维菌素(IVM)。ABA是由放线菌中阿维链霉菌发酵产生，是EMA苯甲酸盐和IVM的前体。EMA苯甲酸盐和IVM分别通过修饰ABA末端的二糖和还原C22、C23位间的不饱和双键获得。然而，科学家们通过动物实验已经证实：阿维菌素类药物对于包括人类在内的哺乳动物具有一定毒性，虽然不会引起基因突变和癌症，但是可能具有胚胎毒性。阿维菌素类药物具有较高的正辛醇-水分配系数(Ko/w)，其中，阿维菌素的logKo/w达到了4.4，因此在油料作物加工过程中其残留的阿维菌素类农药很容易转移到最终的食用油产品中，对人体的健康产生了严重的威胁。我国已立法规定蔬菜和食用油中阿维菌素的最大残留量(MRL)应在10～100μg/kg内(GB/T2763-2014)，因此，为了满足监管需要，建立食用油中简单、有效、灵敏的方法用于阿维菌素类药物的分析是具有重要的意义。与其它的水果和蔬菜等农产品相比，食用油的基质中含有大量的内源性干扰物，如甘油三脂、生育酚等，这些干扰物质一方面会对目标物的定性定量检测产生干扰，同时也会减少色谱柱和仪器的使用寿命，因此必须采取合适的样品前处理技术去除这些干扰物。通常，将一个原始样品处理为可直接用于色谱仪器上机测定的状态占整个分析时间的三分之二，因此样品前处理技术的先进与否直接决定了整个分析方法的优劣。食用油中农药残留检测的前处理方法一般包括两个重要的步骤：目标分析物从样品中的提取以及提取液的净化，通常采用液液萃取的方法进行提取，提取液经离心或静置分层后，取上层有机相进行下一步的净化操作，该过程会消耗大量的有机溶剂，步骤繁多，不利于大批样品高通量的检测。例如：Huang等在对食用油中ABA和IVM分析时，采用液液萃取(LLE)和低温沉淀净化方法用于除去共萃取干扰物，其前处理思路仍然是首先将食用油中阿维菌素类物质进行提取，使得该方法涉及多步萃取和净化过程，冷冻过程需要消耗大量时间，费时费力。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术中的不足，提供一种快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，可以实现快速的相分离，3种阿维菌素类农药的萃取过程只需一步即可完成，大大简化了前处理操作过程。为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：一种快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，包括如下步骤：1)将食用油稀释后，加入磁性四氧化三铁微球对其中的阿维菌素类农药残留进行磁性固相萃取；2)步骤1)完成萃取后固液分离，所得固体产物即为吸附有阿维菌素类农药残留的磁性四氧化三铁微球，经清洗、解吸、复溶后，所得溶液即为快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液。按上述方案，所述阿维菌素类农药包括阿维菌素(ABA)、甲氨基阿维菌素(EMA)苯甲酸盐和伊维菌素(IVM)。按上述方案，所述稀释溶剂采用正己烷，其他非极性溶剂例如石油醚、正戊烷、正庚烷等也适用，但是不能采用中等极性和强极性的溶剂，例如二氯甲烷、乙酸乙酯等，这是由于四氧化三铁萃取阿维菌素是基于极性相互作用的正相机理，极性上样溶剂会减弱吸附力，导致萃取效率降低。优选地，食用油的质量和稀释溶剂的体积比值在0.01～2范围内。按上述方案，所述食用油和磁性四氧化三铁的质量比在0.5～10范围内。优选地，磁性四氧化三铁微球的制备过程如下：FeCl3·6H2O溶解在乙二醇中，加入醋酸钠和乙二胺，在200℃的高压釜中反应8h，即可得到黑色的磁性Fe3O4固体。按上述方案，萃取时间不少于1min，优选1～3min。按上述方案，清洗溶剂采用正己烷-乙酸乙酯混合溶剂。其中，乙酸乙酯含量越高，清洗溶剂的极性越大，可以更好地除去食用油中的基质组分，然而过高的乙酸乙酯也会导致分析物的回收率降低，故本专利技术选择乙酸乙酯在混合溶剂中的体积比在5％～20％之间，混合溶剂的体积用量与食用油质量比值在5～20范围内。按上述方案，所述解吸溶剂为强极性的质子性溶剂甲醇，可以很好地破坏吸附剂与阿维菌素类农药之间的氢键和其他极性相互作用，其他溶剂(例如丙酮、乙腈、二氯甲烷等)解吸效果没有甲醇好，选择解吸溶剂甲醇的体积用量与食用油质量比值在10～30范围内。按上述方案，所述解吸的时间不小于1min，优选1～3min。优选地，所述解吸后经吹干后再复溶。复溶溶剂通常采用乙腈-水混合溶剂，能够将目标物有效溶解即可。本专利技术在上述快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法基础上，进一步提供快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的定量分析方法，即将快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液采用外标法液相色谱-串联质谱进行定量分析。具体包括如下步骤：(1)按照本专利技术所述前处理方法，制备快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液；(2)采用空白基质匹配的校准曲线，将阿维菌素类农药在空白食用油基质中配制成一系列浓度的标准溶液，并用液相色谱-串联质谱进行分析，然后每一种农药以其浓度为横坐标，其对应的峰面积为纵坐标，绘制每种农药的校准曲线；(3)将本专利技术所得快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液用液相色谱-串联质谱进行分析，分别根据出峰时间和定性定量离子对确定农药具体类别，并将其峰面积分别代入对应农药的校准曲线，从而得到待测液中阿维菌素类农药残留的各含量，进而计算得到食用油中阿维菌素类农药残留的各含量。按上述方案，所述校准曲线的浓度线性范围在2～5000μg/kg。按上述方案，所述标准溶液的配制方法为：采用不含待测农药的空白食用油样品按照本专利技术所述前处理方法处理，得空白食用油基质；然后采用该空白食用油基质将阿维菌素类农药配制成一系列浓度的标准溶液，标准溶液中每种农药的浓度均在线性范围内。其中，标准溶液可以是一种阿维菌素类农药的单标，也可以是多种阿维菌素类农药的混标。按上述方案，所述液相色谱-串联质谱分析时采用正离子-多反应监测(MRM)模式。与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：(1)本专利技术通过一步磁性固相萃取技术可以实现阿维菌素类药物快速的相分离，3种阿维菌素类药物的萃取过程只需一步即可完成，大大简化了操作过程，前处理速度快，效果好；(2)本专利技术直接使用裸的磁性四氧化三铁作为磁性固相萃取的吸附剂，即避免了繁琐的表面改性过程，成功萃取了食用油中3种阿维菌素类农药，整个萃取过程只需一步即可完成；(3)本专利技术所述的前处理方法结合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阿维菌素类农药进行分离检测，大大提高了农药的分离效率，实现了3种阿维菌素类药物的快速分离和检测，建立了食用油中阿维菌素类农药的快速、有效、灵敏的分析方法，检测灵敏度和准确性高，且方法具有很好的重现性，并能成功应用于市场上多种食用油中阿维菌素类农药的分析检测。附图说明图1为本专利技术所述的磁性固相萃取的前处理方法的一种具体示意图。其中，目标物为阿维菌素类农药。图2为三种阿维菌素类农药的离子对色谱图。图3为对本文档来自技高网...

【技术保护点】
快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于包括如下步骤：1)将食用油稀释后，加入磁性四氧化三铁微球对其中的阿维菌素类农药残留进行磁性固相萃取；2)步骤1)完成萃取后固液分离，所得固体产物即为吸附有阿维菌素类农药残留的磁性四氧化三铁微球，经清洗、解吸、复溶后，所得溶液即为快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液。

【技术特征摘要】
1.快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于包括如下步骤：1)将食用油稀释后，加入磁性四氧化三铁微球对其中的阿维菌素类农药残留进行磁性固相萃取；2)步骤1)完成萃取后固液分离，所得固体产物即为吸附有阿维菌素类农药残留的磁性四氧化三铁微球，经清洗、解吸、复溶后，所得溶液即为快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的待测液。2.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述阿维菌素类农药包括阿维菌素、甲氨基阿维菌素苯甲酸盐和伊维菌素。3.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述稀释溶剂采用非极性溶剂，食用油的质量和稀释溶剂的体积比在0.01～2范围内。4.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述食用油和磁性四氧化三铁的质量比在0.5～10范围内。5.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述萃取的时间不少于1min；所述解吸的时间不小于1min。6.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述清洗溶剂采用正己烷-乙酸乙酯混合溶剂，乙酸乙酯在混合溶剂中的体积比在5％～20％之间，混合溶剂的体积与食用油的质量比在5～20范围内。7.根据权利要求1所述的快速测定食用油中阿维菌素类农药残留的前处理方法，其特征在于所述解吸溶剂为质子性溶剂甲醇，解吸溶剂的体积与食用油的质量...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭西甜，鲁维，张惠贤，周有祥，夏虹，胡西洲，王小飞，夏珍珍，张仙，刘丽，彭茂民，彭立军，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：发明
国别省市：湖北,42