一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒制造技术

本实用新型专利技术公开了一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，包括试纸条和检测试剂管；所述检测试剂管内设有冻干的苯并[α]芘单克隆抗体

【技术实现步骤摘要】
一种检测苯并[
α
]芘的荧光试剂盒


[0001]本技术属于荧光免疫层析检测
，具体涉及一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒。

技术介绍

[0002]苯并[α]芘，是含苯环的稠环芳烃，被国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)列为I类致癌物。我国于2012年3月17日发布的国家标准GB2762
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2017《食品安全国家标准食品中污染物限量》规定油脂及其制品中苯并[α]芘的最大残留限量为10μg/kg；欧盟于2020年9月9日发布(EU)2020/1255文件规定食品中苯并[α]芘最高限量为10μg/kg。苯并[α]芘的检测是食品质量安全监管的重点工作之一。
[0003]传统检测法，如高效液相色谱法和液相色谱
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串联质谱法，虽然准确度高、精密度好，但样品前处理过程繁琐，需要昂贵的仪器、熟练的技术人员和较长的分析周期，主要适用于行政监管部门质量监督抽检，难以满足即时检测需求。由于苯并[α]芘残留超标问题的客观存在，发展传统实验室定量检测分析方法的同时，研究和应用快速检测技术和方法，能缩短检验周期，节约人力、物力、提高工作效率，对保证农产品质量安全至关重要。

技术实现思路

[0004]为了克服现有技术中的不足，本技术的目的在于提供一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，可以在紫外灯下直接观测结果，实现对苯并[α]芘高灵敏度、高选择性的识别检测。该试剂盒具有易于携带、方便快捷、操作简单、检测时间短、结果准确等特点。
[0005]为了解决上述技术问题，实现上述目的，本技术通过如下技术方案实现：
[0006]一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，包括试纸条和检测试剂管；试纸条包括衬底以及设置在衬底上顺次搭接粘贴的样品垫、反应膜和吸水纸，其特征在于，所述检测试剂管内设有冻干的苯并[α]芘单克隆抗体
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钙钛矿量子点荧光标记物；所述反应膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有苯并[α]芘单克隆抗原
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载体蛋白偶联物，质控线上包被有羊抗鼠IgG二抗。
[0007]优选地，所述荧光试剂盒还包括盖板和底板组成的试纸盒，试纸条设置在该试纸盒内，衬底与试纸盒的底板相接触或粘贴；试纸盒上开设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应试纸条的样品垫，所述观察窗对应检测线和质控线。或者，试纸条的衬底直接采用可以作为试纸盒的材质，直接以试纸条的衬底作为试纸盒的底板也可以。当然，如果盖板为透明盖板，可以不开设观察窗。
[0008]优选地，所述检测线和质控线相互平行并与试纸条的长向垂直，且检测线靠近样品垫一端，质控线靠近吸水纸一端。
[0009]优选地，所述质控线与吸水纸的间距为4～9mm；检测线与质控线的间距为5～10mm；检测线与样品垫的间距4～15mm。
[0010]优选地，试纸条一般长度在7～10cm范围内，宽度在4～6mm范围内；样品垫的长度
在2～3cm范围内，宽度在4～6mm范围内；反应膜的长度在3～5cm范围内，宽度在4～6mm范围内；吸水纸的长度在2～3cm范围内，宽度在4～6mm范围内；卡盒的长度在8～10cm范围内，宽度在5～7mm范围内，厚度在1～2cm范围内。
[0011]优选地，所述检测试剂管一般体积在100～300μL范围内，材质一般为塑料。
[0012]优选地，所述样品垫为用含0.05～0.2wt％聚乙二醇、0.5～2wt％牛血清白蛋白、0.01～0.02wt％表面活性剂吐温
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20的0.01～0.02mol/L PBS缓冲液浸泡处理后的玻璃纤维膜。
[0013]优选地，所述反应膜为硝酸纤维素膜；衬底一般为无纺布；试纸盒的材质一般为塑料。
[0014]本技术的技术构思如下：采用免疫层析技术，在检测试剂管中冻干包被有苯并[α]芘单克隆抗体
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钙钛矿量子点荧光标记物，在硝酸纤维素膜的检测线和质控线处分别包被有苯并[α]芘单克隆抗原
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载体蛋白偶联物和羊抗鼠IgG二抗。待测样本中若含有苯并[α]芘，在检测试剂管温育过程中会与钙钛矿量子点标记的单克隆抗体结合，从而抑制了钙钛矿量子点标记的单克隆抗体与硝酸纤维素膜上包被的抗原结合。检测样品时，只需在检测试剂管中加入待测样品，混匀后，反应约2～10min，然后将检测试剂管中的溶液转移至试剂盒的加样孔中，2～10min后在365nm紫外灯下观测结果。若检测线颜色弱于质控线的颜色或不显色，即待测样本中有苯并[α]芘，为阳性样品，结果为检出；若检测线颜色深于质控线，则为阴性样品，结果为未检出；若检测线显色，质控线不显色，或检测线和质控线均不显色，则为无效，需重新检测。
[0015]与现有技术相比，本技术具有以下有益效果：
[0016]1、该荧光试纸盒操作简单，检测时间短，判定结果直观的特点。
[0017]2、本技术利用钙钛矿量子点标记单克隆抗体，以钙钛矿量子点优异的光学性能，在365nm紫外灯下直接观测结果，实现了对苯并[α]芘高灵敏度、高选择性的识别检测。
[0018]3、本技术利用免疫荧光快速检测技术检测苯并[α]芘残留水平，成本低廉、便捷，适合现场快速检测。
附图说明
[0019]图1为所述荧光试纸条的示意图。
[0020]图2为所述荧光试纸条对待测样品的检测结果示意图。
具体实施方式
[0021]为了更好地理解本技术，下面结合实施例进一步阐明本技术的内容，但本技术不仅仅局限于下面的实施例。
[0022]实施例
[0023]一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，具体制作过程如下：
[0024](1)制备单克隆抗体
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钙钛矿量子点荧光标记物
[0025]向0.1mol/L N
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羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1
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(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)的磷酸盐缓冲液(PBS，0.01mol/L，pH＝7.4)中依次加入钙钛矿量子点溶液和苯并[α]芘单克隆抗体，室温下搅拌5小时，4000r/min离心10分钟，用PBS缓冲液洗涤离心两
次，重新分散于PBS缓冲液，得到均匀的苯并[α]芘单克隆抗体
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钙钛矿量子点标记物溶液，4℃储存备用。其中，苯并[α]芘单克隆抗体厂家为安提生物。
[0026]取100μL苯并[α]芘单克隆抗体
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钙钛矿量子点标记物溶液，在300μL的试管中冻干，即作为检测试剂管。
[0027](2)样品垫的制备
[0028]将玻璃纤维膜用含0.1wt％聚乙二醇、1wt％牛血清白蛋白、0.01wt％表面活性剂吐温
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20的0.01mol/L PBS缓冲液浸泡，50℃真空干燥本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，包括试纸条和检测试剂管；试纸条包括衬底以及设置在衬底上顺次搭接粘贴的样品垫、反应膜和吸水纸，其特征在于，所述检测试剂管内设有冻干的苯并[α]芘单克隆抗体
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钙钛矿量子点荧光标记物；所述反应膜上设有检测线和质控线，检测线上包被有苯并[α]芘单克隆抗原
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载体蛋白偶联物，质控线上包被有羊抗鼠IgG二抗。2.根据权利要求1所述的一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，其特征在于，所述检测线和质控线相互平行并与试纸条的长向垂直，且检测线靠近样品垫一端，质控线靠近吸水纸一端。3.根据权利要求1所述的一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，其特征在于，所述质控线与吸水纸的间距为7～9mm；检测线与质控线的间距为5～10mm；检测线与样品垫的间距8～15mm。4.根据权利要求1所述的一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，其特征在于，还包括盖板，衬底作为试纸盒的底板，盖板与底板组成试纸盒；盖板上开设有加样孔和观察窗，所述加样孔对应试纸条的样品垫，所述观察窗对应检测线和质控线。5.根据权利要求1所述的一种检测苯并[α]芘的荧光试剂盒，其特征在于，还包括透明盖板，衬底作为试纸盒的底板，盖板与底板组成...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽，彭茂民，夏虹，彭西甜，周有祥，彭立军，张仙，郑丹，
申请(专利权)人：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所，
类型：新型
国别省市：