野八角中新苯甲酸衍生物及其制备方法、应用和药物组合物技术

本发明专利技术公开了从野八角中提取的一种新苯甲酸衍生物化合物1，及其制备方法，以及含有新苯甲酸衍生物的药物组合物，和在神经保护药物中的应用:特别是脑卒中。药理实验表明本发明专利技术化合物体现了神经保护活性，即在H2O2损伤原代神经元模型和谷氨酸诱导原代神经元毒性模型中均具有良好的神经保护活性。1

Wild star anise new benzoic acid derivative, preparation method, application and medicine composition thereof

The present invention discloses the extraction from Illicium in a new compound 1 benzoic acid derivatives, and preparation method thereof, and containing benzoic acid derivatives and pharmaceutical compositions in neuroprotective drugs application: especially stroke. Pharmacological experiments show that the compounds in the invention exhibit neuroprotective activity, i.e., have good neuroprotective activity in H2O2 damage primary neuron models and glutamate induced primary neuronal toxicity models. One

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及化合物提取分离领域，特别涉及一种野八角新苯甲酸衍生物及其制备方法、应用和药物组合物。
技术介绍
野八角（IliiciumsimonsiiMaxim）为八角属（IlliciumL.）植物，产于我国贵州西北部至西南部、四川和云南以及印度、缅甸。叶、果实入药，味辛，性热；有镇呕、行气止痛、生肌接骨、灭虱杀虫之效，可治胃寒作呕、膀胱疝气、胸前胀痛、疥疮等功效。脑卒中（cerebralapoplexy）是导致全球人类致残的首要病因，全球第二大死因。在一些国家和城市，卒中甚至已经超过心血管病，成为第一位死因。根据中国生物技术发展中心抽样调查的数据显示，中国城乡脑血管病的年发病率平均为200/10万，患病率为400~700/10万，全国每年新发脑血管病病例250万，死亡率为130/10万，是我国人口总死亡第二位原因，在北京已经超过心血管疾病和肿瘤，成为第一位死亡原因。全国每年用于治疗脑血管病的费用达100亿元以上，加上间接经济损失超过200亿元。由此可见，脑血管病已经成为严重影响我国民生的重要公共卫生问题。2010年世界卒中日发布的主题是“六分之一”，即全世界每6个人中有1人可能在一生中罹患卒中；每6s就有1人死于卒中；而每6min就有1人因卒中而永久致残。脑卒中是当今世界重大疾病之一。来源于中草药的有效成分是抗脑卒中新药的研究热点。
技术实现思路
野八角乙醇提取物具有神经保护作用，从有效部位中分离得到1个新苯甲酸衍生物，药效学评价显示其具有很好的神经保护的作用。本专利技术目的之一在于提供了一个新苯甲酸衍生物。本专利技术目的之二在于提供了新苯甲酸衍生物的制备方法。本专利技术目的之三在于提供了一种新苯甲酸衍生物在制备预防或治疗脑血管疾病的药物的应用。本专利技术目的之四在于提供一种药物组合物，其含有新苯甲酸衍生物。本专利技术是通过以下技术方案实现的：野八角新苯甲酸衍生物具有化合物1所示结构1。野八角新苯甲酸衍生物制备方法，每制备化合物1，5mg包括以下步骤：a.干燥的野八角果实10.50kg，粉碎，用95%EtOH80L浸泡2h后，加热回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩，得到261.2g浸膏；b.将浸膏溶解于甲醇中，吸附于500g硅藻土，干燥，装入索氏提取器，依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇索氏回流提取；c.各提取液分别减压浓缩得石油醚部位44.2g，乙酸乙酯部位75.0g和甲醇部位133.6g；d.对乙酸乙酯部位用二氯甲烷-甲醇（二氯甲烷:甲醇=50:1；25:1；10:1；5:1；2:1；1:1；0:100）梯度洗脱分离得到流份Fr1-Fr7；e.对Fr4(8g)通过中压柱色谱法（10–90%的甲醇梯度洗脱10小时）分为50个流份（500ml为1份），通过制备液相从Fr.10得到一个新苯甲酸衍生物类化合物1（5mg）。化合物1在制备预防或治疗脑血管疾病药物中的应用。所述脑血管疾病药物为神经保护药物。所述脑血管疾病为脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。所述脑卒中为缺血性脑卒中或出血性脑卒中。一种药物组合物，其中，含有权利要求1中所示的化合物以及药效学上可接受的载体。根据本专利技术的思路，对野八角新苯甲酸衍生物进行了神经保护相关的药理实验。氧化应激是导致神经元凋亡丢失的重要原因，是缺血性脑卒中的特征。引起氧化应激的原因有很多种，如脑缺血，神经炎症，兴奋性递质释放重摄取机制障碍，重金属暴露，神经毒性剂暴露等，表现为细胞内自由基增加，引起脂质过氧化，线粒体功能障碍继而激活凋亡通路等。谷氨酸，H2O2虽然引发神经元凋亡丢失的机制不一，但都是近年来许多国内外学者倡导的神经元损伤模型的诱发剂。研究认为，脑内兴奋性递质谷氨酸过量通常引起神经元膜上NMDA受体过度激活，从而导致神经元发生氧化应激并丢失，而H2O2是一种过氧化物，以其诱导神经细胞氧化应激损伤模型为基础，揭示了临床有效的药物作用机制，可作为体外筛选抗氧化药物的一种可靠的药理细胞模型，其发生机制，病理生理改变与脑卒中患者脑内表现具有相似性。应用谷氨酸，H2O2制作神经元损伤模型条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，因此在本研究中，H2O2损伤原代神经元模型、谷氨酸诱导原代神经元凋亡模型2个体外模型作为评价手段。新苯甲酸衍生物在体外谷氨酸，H2O2诱发的大鼠大脑皮层神经元死亡的试验中均显示出优良的神经保护作用。阳性对照药物为依达拉奉（edaravone），依达拉奉是以自由基清除为主要作用机制的神经保护药物，能有效抑制因脑缺血导致的脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化应激损伤。对H2O2诱发大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用体外研究中，将本专利技术化合物与依达拉奉（300μM）用神经元培养基稀释，和大鼠大脑皮层神经元温孵24小时后，MTT法测定细胞存活率，同时进行正常对照组和阳性对照组试验。实验结果表明，正常对照组加入H2O2后570nm处吸光度值（OD570）明显降低，阳性对照组和本专利技术化合物OD570明显回升，与依达拉奉（edaravone）的细胞存活率相当，新化合物组的细胞存活率与依达拉奉组相当。对谷氨酸诱发大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用体外研究中，将本专利技术化合物与谷氨酸（20mM）用完全培养基稀释，和大鼠大脑皮层神经元温孵24小时后，MTT法测定细胞存活率，同时进行正常对照组和阳性对照组试验。实验结果表明，正常对照组加入谷氨酸后570nm处吸光度值（OD570）明显降低，阳性对照组和本专利技术化合物OD570明显回升，与依达拉奉（edaravone）的细胞存活率相当，新化合物组的细胞存活率与依达拉奉组相当。本专利技术的有益效果：化合物1体现了神经保护活性，即在H2O2损伤原代神经元模型中均具有良好的神经保护活性，其活性优于依达拉奉。因此本专利技术的化合物在可用于制备预防或治疗脑血管疾病的药物。优选的神经退行性疾病选自脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。优选的脑卒中选缺血性脑卒中和出血性脑卒中。附图说明图1野八角果实的提取流程图。具体实施方式下面的实施例及药理活性实验进一步说明本专利技术，但并不意味着对本专利技术的任何限制。实施例1：野八角新苯甲酸衍生物制备方法，每制备化合物1，5mg包括以下步骤：提取分离实验（见附图1）干燥的野八角果实10.50kg，粉碎，用95%EtOH80L浸泡2h后，加热回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩，得到261.2g浸膏。将浸膏溶解于甲醇中，吸附于500g硅藻土，干燥，装入索氏提取器，依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇索氏回流提取。各提取液分别减压浓缩得石油醚部位44.2g，乙酸乙酯部位75.0g和甲醇部位133.6g。对乙酸乙酯部位用二氯甲烷-甲醇（二氯甲烷:甲醇=50:1；25:1；10:1；5:1；2:1；1:1；0:100）梯度洗脱分离得到流份Fr1-Fr7。对Fr4(8g)通过中压柱色谱法（10–90%的甲醇梯度洗脱10小时）分为50个流份（500ml为1份），通过制备液相从Fr.10得到一个新苯甲酸衍生物（5mg）。实施例2：化合物1在制备预防或治疗脑血管疾病药物中的应用。所述脑血管疾病药物为神经保护药物。所述脑血管疾病为脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。所述脑卒中为缺血性脑卒中或出血性脑卒中本文档来自技高网...

【技术保护点】
野八角中新苯甲酸衍生物，其特征在于具有化合物1所示结构           1。

【技术特征摘要】
1.野八角中新苯甲酸衍生物，其特征在于具有化合物1所示结构1。2.野八角中新苯甲酸衍生物的制备方法，其特征在于，每制备化合物1，5mg包括以下步骤：a.干燥的野八角果实10.50kg，粉碎，用95%EtOH80L浸泡2h后，加热回流提取3次，每次2小时，提取液减压浓缩，得到261.2g浸膏；b.将浸膏溶解于甲醇中，吸附于500g硅藻土，干燥，装入索氏提取器，依次用石油醚、乙酸乙酯和甲醇索氏回流提取；c.各提取液分别减压浓缩得石油醚部位44.2g，乙酸乙酯部位75.0g和甲醇部位133.6g；d.对乙酸乙酯部位用二氯甲烷-甲醇（二氯甲烷:甲醇=50:1；25:1；10:1；5:1；2:1；1:1；0:100）梯度洗脱分离得到流份Fr1-Fr7；e.对Fr4(8g)通过中...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓霞，庄鹏宇，陈金铭，张丹阳，林晓莹，杨宇柯，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：河北;13