用于诱导细胞外基质蛋白合成的肽片段制造技术

本发明专利技术公开了短链的具有生物活性的四肽，包括序列ＧｘｘＧ和ＰｘｘＰ，其中Ｇ（甘氨酸）和Ｐ（脯氨酸）是保守的，ｘ是可变的氨基酸。所述肽可以单独的或组合的方式使用来刺激皮肤中细胞外基质蛋白的产生。本发明专利技术还公开了一种快速的、低成本的生产四肽的异质制剂的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于诱导细 卜基质蛋白合成的肽片段本申ifi青求2006年6月13日提交的申请号为60/813^84的美国临时 申请的优先权，该文献内W&th全文引入作为参考。皮肤老ifcffi常表现为铍纹的形成与伤口愈合能力的削弱。伤口定义为 皮肤的上皮完整性的破坏。正常的伤口愈合过程包括复杂的、动态的、但是经 过精确安排的一系列导致损伤组织修复的事件。普通皮肤中最多的组分是细胞 夕卜基质(ECM)， 一种由其所包围的细胞产生的胶状基质。ECM由两种主要类别 组成，包括纤维结构蛋白与蛋白多糖。目前已知ECM的成分和交联状态的改变 与老化以及大量的获得性或遗传性皮肤失调都有关系。人们也已经证明ECM不 仅具有结构支撑的作用，还能影响诸如分化和增殖的细胞行为。同样，越来越 多的研究表明其基质的组分可能是细胞信号源，肯詢多促肚皮细胞增殖和移动， 从而加十姊口愈合。最多的一类纤维ECM肝是胶原蛋白家族，其包括至少16种不同 鄉的胶原蛋白。皮肤基质中的胶原蛋白主要由I型(80-85%)和m型(8-11%)胶 原蛋白组成，二者均为纤维状或杆状的胶原蛋白。皮肤的拉伸强度主要由这些 纤维 原蛋白肝决定，它们自我组装为^"尾连接的微原纤维，并互相交错 地横向并列排布。胶原蛋白分子与相邻的胶原蛋白^ 相互交联，进一步加强 了胶原蛋白纤维的强度和稳定性。对胶原蛋白网络的损伤(例如，酶或物理损 伤等)，或其整体性的破坏，导致了修复治愈的发生。闕在禾被文献和专利中都鹏了刺激产生ECM蛋白的各种具有生物活性的肽类。这些肽以前是从天然资源中分离得到的，最近则成为结构-功能关系 学研究的目标。天然的肽类还被作为合成的肽类似物设计的出发点。ECM蛋白中特定的序列會嫩刺激皮肤中有用的成分，如I型、m型 胶原蛋白，纤维结合蛋白等(Katayama et al., J. BIOL. CHEM. 288: 9941-9944 (1983》。Katayama等A/人IMI^原蛋白前肽的羧端(残基197-241)中鉴定了五 肽KTTKS(SEQIDNO: 17)。 MT肽被切割于产生成熟的胶原蛋白的时候。切 害i脂的前肽可能Mil生物合成反馈机帝掺与调节胶原蛋白的生产，其中KTTKS 肽鹏激活作用。Maquart等人(JSocBIOL. 193:423画28(1999))报道了肽GHK和 CNYYSNS同样刺激ECM合成。这些序列會,在ECM周转的时候被释放，从 而传递需要ECM修复的信号。M31J^任一种机制释放出来的短B游列通常被 称为"马曲^J3太(matrikines)" (Maquart etal.， J. Soc. BIOL. 193:423-28(1999))。虽然已经有一定数量的天然或合成肽存在，但是人们,需要改进的 生物活性E^其^ffl方法。专利技术 本专利技术公开了特征为氨基,列基序GxxG或PxxP的四肽，其中G (甘氨酸)和P (脯氨酸)残基是保守的，x是可变的氨基酸。该四肽来源于ECM 蛋白一级序列中多次出现的序列，该ECM为IVM^原蛋白。所披露的序列诱 导所有形式的胶原蛋白产生，其诱导能力高于早先已知的肽序列，包括 SEDERMASAS (法国)公司的商标为MATRIXYL 的KTTKS。，一步， 包含不同的多次重复序列组合的组合物弓胞了更强烈的胶原蛋白合成应答。可 以预期肽类组合物对多种不同的ECM蛋白有额外的优点。生产特定组合的用于ECM修复的四肽会使得成本过高，难以进行商 业应用。公开了一种相对简单廉价的方法，即生产生物活性四肽的不同的混合 物。通过生产基序GxxG和PxxP的四肽的组合库，我们可以在一次生产^lf呈中 得到不同的生物活性四肽(例如，GEPQ、 GPEG、 GPPG和GEEG)。四肽组合 物相对于单一肽育的多诱导更多的ECM蛋白合成。包含所公开的单一或混合形式 的四肽的组合物能够被用于皮肤护理行业，包括但不限于针对皮肤褶铍、肤色 调节、皮皿致或^l^松弛等。所公开的四肽刺激合成胶原蛋白能够有效地改 善受损皮肤和老化皮肤的健康和皿。附图简述图l是SEQIDNO:45，为IVMMI蛋白氨基lW列，表明GxxG四 肽的存在。所有粗体序列标有单下划线，重薪列标有双下划线。图2是SEQIDNO:46，为mME原蛋白氨基!W列，表明移码(frame shift)活性PGPR和GAGP的存在。所有移码活,列标记为粗体，加单下划线， 发生一个移^(one fimae shift away)的GxxG序列标有双下划线。图3同样是SEQIDNO:45，为IV型胶原蛋白氨基,列，表明PGPP 四肽的存在。专利技术详述本专利技术主要针对刺激ECM蛋白产生并调节伤口愈合的四肽，以及它 们的应用。 胜本专利技术的一个实戯式是一种分离的四肽，包括基序GxxG或PxxP。 在这个实船式中，G (甘氨酸)或P (脯氨酸)是保守的，x是可变的氮基酸。 一般地，所述的肽可以是落入上述范围的任何一种肽，更加雌的是SEQ ID NO:l、 SEQ IDNO:2、 SEQ IDNO:3、 SEQ IDNO:5、 SEQ IDNQ:7、 SEQ IDNO:8、 SEQIDNO:9、 SEQIDNQ:IO、 SEQIDNO:ll、 SEQIDNQ:12、 SEQIDNO:13、 SEQIDNQ:14、 SEQIDNO:15或SEQE)NO:16。本专利技术的另一个实施方式是一种分离的四肽，包括基序GxPG，其中 在两个可变位点之一或两者上，x是P。在这个实施方式中，G (甘氨酸)和P (脯氨酸)是保守的，x是可变的氨基酸。 一般地，所述的肽可以是落入战范 围的任何一种肽，更加优选的是SEQIDNO:2、 SEQIDNO:3、 SEQIDNO:5或 SEQIDNO:7。本专利技术的另一个实施方式是一种分离的四肽，包括基序GExG。在这 个实歸式中，G (甘氨酸)和E (谷氨酸)是保守的，x是可变的氨基酸。一 般地，所述的肽可以是落入，范围的任何一种肽，更加im的是SEQIDNO:5 或SEQIDNO:8。本专利技术的另一个实施方式是一种分离的四肽，包括基序PGxP。在这 个实施方式中，P (脯氨酸)和G (甘氨酸)是保守的，x是可变的氨基酸。一 般地，本专利技术所述的肽可以是落入上述范围的^f可一种肽，更加优选的是SEQEDNO:ll、 SEQIDNO:12、 SEQIDNO:14或SEQIDNO:16。本专利技术的另一个实施方式是一种分离的四肽，包括基序PExP。在这 个实歸式中，P (脯氨酸)和E (谷氨酸)是保守的，x是可变的氨基酸。一 般地，所述的肽可以是落入J^范围的倒可一种肽，更力口im的是SEQIDNO:l 或SEQIDNO:9。本专利技术的另一个实施方式是一种移码活性四肽。在这个实施方式中， 所述四肽在ECM蛋白中GxxG或PxxP四肽的基础上发生一个移码。 一般地， 所述的肽可以是落入上述范围的任何一种肽，更加优选的是SEQ ID NO:4或 SEQIDNO:6。战一种肽可以含有D型或L型氨基酸。所^l太可以含有所有的D 型或L型氨基酸。这些肽可以具有酸性的C末端(-C02H)或者， 的，具有氨 基的C末端(-CONH2,-CONHR或者-CQNR2)。这些本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够诱导细胞外基质蛋白产生的四肽，其包括式ＧｘｘＧ，其中Ｇ是甘氨酸并且ｘ是可变氨基酸。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：L张，SM哈里斯，TJ法拉，
申请(专利权)人：赫里克斯生物医疗公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]