脂滴或脂肪体通过MLDSR蛋白参与的转录调控的发现及应用制造技术

本发明专利技术公开了一种脂滴或脂肪体通过MLDSR蛋白参与的转录调控的发现及应用。本发明专利技术提供了一种MLDSR蛋白，其为如下a)或b)或c)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。通过实验证明：MLDSR蛋白可调控MLDS基因的转录水平，其高浓度抑制MLDS基因表达、低浓度诱导MLDS基因表达，同时脂滴或脂肪体会通过调节溶液或胞质中的MLDSR蛋白浓度间接参与基因的转录调控。

Discovery and application of transcriptional regulation of lipid droplets or fat bodies via MLDSR protein

The invention discloses the discovery and application of a transcription regulation of lipid droplets or fat bodies involved by MLDSR proteins. The invention provides a MLDSR protein, which is as follows: a) or b) or C) protein: a) amino acid sequence is shown in sequence 2 protein; b) protein fusion tags in the connection shown in sequence 2 protein N terminal and / or C end of the C); amino acid sequence 2 sequences shown by one or several amino acid substitution and deletion and / or added by the protein with the same function. Experimental results show that MLDSR protein can regulated the transcription of MLDS gene, its high concentration of inhibition of MLDS gene expression and MLDS gene expression induced by low concentration at the same time, lipid or fat of transcriptional regulation by adjusting the concentration of MLDSR protein in the cytoplasm of the solution or indirectly involved in gene.

【技术实现步骤摘要】
脂滴或脂肪体通过MLDSR蛋白参与的转录调控的发现及应用
本专利技术属于生物
，具体涉及脂滴或脂肪体通过MLDSR蛋白参与的转录调控的发现及应用。
技术介绍
脂滴是一种分布广泛的细胞器，从原核生物到真核生物都存在。脂滴是一种具有存储、新陈代谢、物质转运和信号转导等功能的细胞器。在不同的物种及其细胞中，脂滴可能具有不同的功能。脂滴的动态变化会直接影响到人们的日常生活。除了在人类健康和食品质量中起着重要作用之外，微生物中脂滴的三酰基甘油是开发生物柴油的主要来源之一。能源的短缺及环境的污染要求人们尽快开发出可再生的清洁能源。由于微生物能量转化效率较高，因此利用微生物产能尤其是生物柴油的开发变得极其重要。由于脂滴存在于从人到细菌的各个物种中，以及脂滴常驻蛋白具有很强的保守特性，因此，脂滴可能是最早进化出来的细胞器，对于基本生命过程是至关重要的。脂滴的单层磷脂膜可以提供一种不同于其他细胞膜结构的独特膜质环境。这种特殊的化学和物理环境可以提高某些细胞过程的特异性和效率。为了进一步确定细菌中脂滴的功能，我们实验室已经对目前发现的含有脂滴及甘油三酯较多的两种菌株RhodococcusjostiiRHA1(RHA1)和RhodococcusopacusPD630(PD630)的脂滴蛋白质组进行鉴定分析，发现了一种能改变脂滴大小的、主要的脂滴蛋白，并将其命名为microoganismlipiddropletsmall(MLDS)。同时也发现在这些蛋白脂组数据中，很多转录调控因子富集在脂滴组分中。(Ding等人，2012年Identificationofthemajorfunctionalproteinsofprokaryoticlipiddroplets.和陈等人，2014年，IntegratedomicsstudydelineatesthedynamicsoflipiddropletsinRhodococcusopacusPD630。)由此，我们推测脂滴可能会通过这些转录调控因子来参与转录调控。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种蛋白质。本专利技术提供的蛋白质是如下a)或b)或c)的蛋白质，将其命名为MLDSR蛋白质：a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。其中，序列2由168个氨基酸残基组成。为了使a)中的蛋白质便于纯化，可在序列表中序列2所示的蛋白质的氨基末端或羧基末端连接上如表1所示的标签。表1、标签的序列上述c)中的蛋白质，所述一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加为不超过10个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加。上述c)中的蛋白质可人工合成，也可先合成其编码基因，再进行生物表达得到。上述c)中的蛋白质的编码基因可通过将序列1所示的DNA序列中缺失一个或几个氨基酸残基的密码子，和/或进行一个或几个碱基对的错义突变，和/或在其5′端和/或3′端连上表1所示的标签的编码序列得到。本专利技术的另一个目的是提供与MLDSR蛋白质相关的生物材料。本专利技术提供的与MLDSR蛋白质相关的生物材料为下述A1)至A12)中的任一种：A1)编码MLDSR蛋白质的核酸分子；A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。上述相关生物材料中，A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：1)其编码序列是序列1所示的cDNA分子或基因组DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码上述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码上述蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子。其中，所述核酸分子可以是DNA，如cDNA、基因组DNA或重组DNA；所述核酸分子也可以是RNA，如mRNA或hnRNA等。其中，序列1由507个核苷酸组成，编码序列2所示的氨基酸序列。这里使用的术语“同一性”指与天然核酸序列的序列相似性。“同一性”包括与本专利技术的编码序列2所示的氨基酸序列组成的蛋白质的核苷酸序列具有75％或更高，或85％或更高，或90％或更高，或95％或更高同一性的核苷酸序列。同一性可以用肉眼或计算机软件进行评价。使用计算机软件，两个或多个序列之间的同一性可以用百分比(％)表示，其可以用来评价相关序列之间的同一性。上述75％或75％以上同一性，可为80％、85％、90％或95％以上的同一性。上述生物材料中，所述严格条件是在2×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次5min，又于0.5×SSC，0.1％SDS的溶液中，在68℃下杂交并洗膜2次，每次15min；或，0.1×SSPE(或0.1×SSC)、0.1％SDS的溶液中，65℃条件下杂交并洗膜。上述生物材料中，所述载体可为质粒、黏粒、噬菌体或病毒载体。上述生物材料中，所述微生物可为酵母、细菌、藻或真菌，如农杆菌。上述生物材料中，所述转基因植物细胞系、转基因植物组织和转基因植物器官均不包括繁殖材料。本专利技术还有一个目的是提供MLDSR蛋白质的新用途。本专利技术提供了MLDSR蛋白质在作为转录调节因子中的应用。上述应用中，所述转录调节因子为MLDS转录调节因子。本专利技术还有一个目的是提供MLDSR蛋白质或上述生物材料的新用途。本专利技术提供了MLDSR蛋白质或上述生物材料在调控目的基因的表达水平中的应用。上述应用中，所述表达水平为转录水平。上述应用中，所述调控为正向调控和负向调控。本专利技术还提供了MLDSR蛋白质或上述生物材料在如下在如下M1)-M7)中任一种中的应用：M1)结合序列6所示的DNA分子；M2)结合序列6第20-62位所示的DNA分子；M3)结合序列6第43-62位所示的DNA分子；M4)结合序列6第20-42位所示的DNA分子；M5)结合序列7所示的DNA分子；M6)与所述M1)-M5)中至少一种DNA分子结合，进而调控目的基因的转录水平；M7)与所述M1)-M5)中至少一种DNA分子一起调控目的基因的转录水平。上述应用中，所述调控是通过结合序列6第43-62位所示的DNA分子实现。所述调控为随着所述MLDSR蛋白质的量的逐渐降低、目的基因的转录水平逐渐升高。本专利技术还有一个目的是提供如下N1)-N4)中任一种产品：N1)上述M1)-M5)中任一所述的DNA分子；N2)一种产品套装，由MLDSR蛋白质和上述M1)-M5)中任一所述的DNA分子组成；N3)一种产品套装，由脂滴或脂肪体、MLDSR蛋白质和上述M1)-M5)中任一所述的DNA分子组成；N4)一种产品套装，由脂滴或脂肪体与MLDSR蛋本文档来自技高网...

【技术保护点】
蛋白质，是如下a)或b)或c)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。

【技术特征摘要】
1.蛋白质，是如下a)或b)或c)的蛋白质：a)氨基酸序列是序列2所示的蛋白质；b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；c)将序列2所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加得到的具有相同功能的蛋白质。2.与权利要求1所述的蛋白质相关的生物材料，为下述A1)至A12)中的任一种：A1)编码权利要求1所述的蛋白质的核酸分子；A2)含有A1)所述核酸分子的表达盒；A3)含有A1)所述核酸分子的重组载体；A4)含有A2)所述表达盒的重组载体；A5)含有A1)所述核酸分子的重组微生物；A6)含有A2)所述表达盒的重组微生物；A7)含有A3)所述重组载体的重组微生物；A8)含有A4)所述重组载体的重组微生物；A9)含有A1)所述核酸分子的转基因植物细胞系；A10)含有A2)所述表达盒的转基因植物细胞系；A11)含有A3)所述重组载体的转基因植物细胞系；A12)含有A4)所述重组载体的转基因植物细胞系。3.根据权利要求2所述的相关生物材料，其特征在于：A1)所述核酸分子为如下1)或2)或3)所示的基因：1)其编码序列是序列1所示的cDNA分子或基因组DNA分子；2)与1)限定的核苷酸序列具有75％或75％以上同一性，且编码权利要求1所述的蛋白质的cDNA分子或基因组DNA分子；3)在严格条件下与1)或2)限定的核苷酸序列杂交，且编码权利要求1所述的蛋白质的c...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘平生，张聪研，
申请(专利权)人：中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：北京,11