一种提高肌酸酶热稳定性的方法技术

本发明专利技术公开了一种提高肌酸酶热稳定性的方法，属于基因工程和酶工程领域。本发明专利技术的突变体，是在Pseudomonas putida源的肌酸酶的基础上进行氨基酸替换突变得到的。本发明专利技术的突变体H125C/L130C与野生型肌酸酶相比Tm值增加了8.2℃，热稳定性得到了显著的提高。通过本发明专利技术的方法，有效提高了肌酸酶的热稳定性。

Method for improving thermal stability of creatine enzyme

The invention discloses a method for improving the thermostability of creatine enzyme, belonging to the field of gene engineering and enzyme engineering. The invention is based on amino acid mutants, creatine kinase Pseudomonas putida source on the substitution obtained. Compared with the wild type creatine enzyme, the mutant H125C/L130C of the invention has an increase of 8.2 DEG Tm, and the thermal stability is remarkably improved. By the method of the invention, the thermal stability of the creatine enzyme is effectively improved.

【技术实现步骤摘要】
一种提高肌酸酶热稳定性的方法
本专利技术涉及一种提高肌酸酶热稳定性的方法，属于基因工程和酶工程领域。
技术介绍
肌酸酶(creatinase；E3.5.3.3；CRE；分类名为肌酸眯基水解酶,creatinaseamidinohydrolase)属于水解酶类，催化肌酸水解产生尿素和肌氨酸。肌酸水解酶是肌氨酸氧化酶法测定肌酸含量方法中的关键酶。肌酐作为临床肾功能监测指标之一，一直以来备受关注。其测定方法随着科学的发展由最初的碱性苦味酸法(Jeffe氏反应)演变至今的酶法，可以说是一个巨大的进步，因后者可以克服前者固有的一些缺点而得到广泛地应用。肌酸测定所涉及的三种工具酶，即肌肝酶(creatininase，EC3.5.2.10；分类名为肌酐酰胺水解酶,creatinineamidohydrolase)、肌酸酶、肌氨酸氧化酶(sarcosineoxidase，EC1.5.3.1)。目前在多种细菌中均发现肌酸水解酶的存在。这些细菌有假单胞菌属(Pseudomonas)、梭菌属(Clostridium)、黄杆菌属(Flavobacterium)、芽孢杆菌属(Bacillus)、产碱菌属(Al本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肌酸酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是在NCBI上GenBank：CAA00921.1的肌酸酶氨基酸序列的基础上将第125位和第130位的氨基酸替换为半胱氨酸。

【技术特征摘要】
1.一种肌酸酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列是在NCBI上GenBank：CAA00921.1的肌酸酶氨基酸序列的基础上将第125位和第130位的氨基酸替换为半胱氨酸。2.编码权利要求1所述突变体的核苷酸序列。3.携带编码权利要求1所述突变体的核苷酸序列的表达载体。4.表达权利要求1所述突变体的基因工程菌。5.根据权利要求4所述的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌是以大肠杆菌为宿主构建得到的。6.权利要求1所述突变体的应用。7.根据权利要求5所述的应用，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲，杨海麟，高亚楠，辛瑜，王武，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32