一种肌酸激酶固定化的方法技术

本发明专利技术提出了一种肌酸激酶固定化的方法。它以壳聚糖为原料，先制备出交联壳聚糖溶液，再制备出交联壳聚糖微球，然后制备出接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂，最后以接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂为载体固定化肌酸激酶。本发明专利技术的优点可以使用常规的生产设备在温和的条件下生产磷酸肌酸，工艺简单，操作简便且易于控制，生产成本低，提高了生产效率，生产过程有利于保护环境；且制备的固定化肌酸激酶对热、酸、碱、有机溶剂等条件的稳定性都有显著增加。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及肌酸激酶固定化制备
，具体涉及一种以接枝赖氨酸交联壳聚糖微球固定化肌酸激酶的方法。
技术介绍
肌酸激酶是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、ATP再生有直接关系的重要激酶，能可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。用于心肌梗塞的早期诊断，各种肌肉疾病的测定，以及制备磷酸肌酸等方面。游离肌酸激酶以兔肌肉为原料制备，价格昂贵，在溶液中不稳定，容易变性失活，反应后难以分离回收，无法重复利用。这极大地限制了肌酸激酶的应用，特别是用在以肌酸激酶为催化剂制备磷酸肌酸的反应中。酶的固定化是通过物理或化学方法使游离酶束缚于水不溶介质中的过程，其目的是使被束缚的酶能连续进行反应，反应后便于回收酶并重复使用。与只能使用一次的游离酶相比，固定化酶既保留了游离酶的催化特性，又具有稳定性好、反应过程控制、可组装成酶反应器，进行多酶组合连续反应、可再生并反复使用、成本低等优点，是生物催化剂发展的热门领域。现有的酶的固定化的工艺，例如2011年11月30号公开号为CN102260665A的“一种马来酰化壳聚糖微球固定化脲酶的制备方法”专利，公开的方法是以一定配比的乳化剂、油相溶剂和单体组成油相本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肌酸激酶固定化的方法，其特征在于：它以壳聚糖为原料，先制备出交联壳聚糖溶液，再制备出交联壳聚糖微球，然后制备出接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂，最后以接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂为载体固定化肌酸激酶。

【技术特征摘要】
1.一种肌酸激酶固定化的方法，其特征在于它以壳聚糖为原料，先制备出交联壳聚糖溶液，再制备出交联壳聚糖微球，然后制备出接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂，最后以接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂为载体固定化肌酸激酶。2.根据权利要求I所述的一种肌酸激酶固定化的方法，其特征在于制备交联壳聚糖溶液的步骤为 (O以壳聚糖为原料，按壳聚糖的质量体积浓度为I 5%的盐酸溶液的体积比为I :25 50的比例，将壳聚糖溶解于盐酸溶液中，形成壳聚糖溶液；所述壳聚糖的质量按克来计量，盐酸溶液的体积按毫升来计量； (2)再在搅拌条件下在(I)步骤中加入等体积的液体石蜡进行分散，制备出液体石蜡分散的壳聚糖溶液； (3)然后按壳聚糖的质量体积浓度为2.5% 5. 0%的双缩水甘油醚溶液的体积比为I : 10 30的比例，在液体石蜡分散的壳聚糖溶液中加入双缩水甘油醚溶液，进行交联反应20 30分钟，就制备出交联壳聚糖溶液；所述壳聚糖的质量按克来计量，双缩水甘油醚溶液的体积按晕升来计量。3.根据权利要求I所述的一种肌酸激酶固定化的方法，其特征在于制备交联壳聚糖微球的步骤为 (1)将制备出的交联壳聚糖溶液，先按致孔剂碳酸钙壳聚糖的质量比为I:1 3的比例，在交联壳聚糖溶液中加入致孔剂碳酸钙粉末，搅拌混合均匀； (2)再用O.I 1%的氢氧化钠溶液调节体系pH为9 10. 5，然后升温至60 70°C，并在60 70°C恒温下反应2. 5 3. 5小时后，将反应物泵入抽滤机中，进行第一次抽滤，分别收集第一次抽滤渣和抽滤液； (3)对于收集的抽滤渣，先加入3 6倍体积的体积浓度为2 5%的盐酸溶液，在搅拌下溶解洗涤后滤渣中的碳酸钙而形成混合液；然后将该混合液泵入抽滤机中，进行第二次抽滤，分别收集脱碳酸钙滤过液和脱碳酸钙滤渣； (4)对于收集的脱碳酸钙滤渣，先用蒸馏水反复进行洗涤至洗涤液的pH值为6.5 7. 5为止，分别收集洗涤液和洗涤后的碳酸钙滤渣，洗涤后的碳酸钙滤渣即为制备出的交联壳聚糖微球。4.根据权利要求I所述的一种肌酸激酶固定化的方法，其特征在于制备接枝赖氨酸交联壳聚糖树脂的步骤为 (1)按制备出的交联壳聚糖微球中的游离氨基二环己基碳化二亚胺赖氨酸游离羧基的摩尔...

【专利技术属性】
技术研发人员：毛先兵，周小华，苏昱，陈真文，冉隆富，
申请(专利权)人：西南药业股份有限公司，重庆大学，
类型：发明
国别省市：