TACI-免疫球蛋白融合蛋白质制造技术

干预肿瘤坏死因子受体与其配体结合的分子，例如，可溶性的受体，已经被证实在基础研究中和作为治疗方法均有用。本发明专利技术提供了经过改进的可溶性的跨膜激活剂和钙调节剂和亲环蛋白配体相互作用剂（ＴＡＣＩ）受体。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术总的来说涉及包含肿瘤坏死因子受体部分和免疫球蛋白部分的改良的融合蛋白质。具体地说，本专利技术涉及改良TACI-免疫球蛋白融合蛋白质。
技术介绍
细胞因子是介导包括调节很多细胞类型的生长和各种生物效应的可溶的小蛋白质，(参见例如Arai等人，Annu.Rev.Biochem.59783(1990)；Mosmann，Curr.Opin.Immunol.3311(1991)；Paul和Seder，Cell 76241(1994))。构成细胞因子组的蛋白质包括白细胞介素、干扰素、集落刺激因子、肿瘤坏死因子、以及其他调节分子。例如人的白细胞介素-17是刺激白细胞介素-6、胞内粘附分子1、白细胞介素-8、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子的表达和前列腺素E2表达的细胞因子，并且在CD34+造血前体细胞转变成嗜中性粒细胞的优先成熟中起作用(Yao等人，J.Immunol.1555483(1995)；Fossiez等人，J.Exp.Med.1832593(1996))。结合细胞因子的受体一般由一种或多种整合膜蛋白质组成，该整合膜蛋白质以高亲和性与细胞因子结合并且将该结合事件通过特定的受体亚基的胞质部分转导到细胞。根据其细胞外的配体结合区的相似性，细胞因子的受体被分为若干类。例如根据其特征性的200个残基的胞外区，负责结合和/或转导干扰素效应的受体链是II型细胞因子受体家族的成员。在免疫应答的时候发生的细胞相互作用由若干细胞表面受体家族的成员(包括肿瘤坏死因子受体(FNFR)家族)调节。TNFR家族由一些整合膜糖蛋白受体构成，在与它们各自配体的连接中，许多受体调节不同造血细胞谱系之间的相互作用(参见例如Cosman，Stem Cells12440(1994)；Wajant等人，Cytokine Growth Factor Rev.1015(1999)；Yeh等人.，Immunol.Rev.169283(1999)；Idriss和Naismith，Microsc.Res.Tech.50184(2000))。一种这样的受体是TACI，跨膜激活剂和CAML-相互作用剂(vonBülow和Bram，Science 228138(1997)；Bram和von Bülow，美国专利5,969,102(1999))。TACI是一种膜结合受体，它具有包含二个富含半胱氨酸的假性重复片断(cysteine-rich pseudo-repeats)的胞外区、一个跨膜区和与CAML(钙调节剂和亲环蛋白配体)相互作用的胞质区、CAML是位于胞内囊泡的整合膜蛋白质，当其在Jurkat细胞内过度表达时，是一种NF-AT激活的协同诱导物。TACI与B细胞和T细胞的一种亚型相关。在此提供编码TACI的核苷酸序列和其相应的氨基酸序列，分别为SEQ ID NO1和2。TACI受体与肿瘤坏死因子(TNF)配体家族的两个成员相结合。一个配体被不同地称为ZTNF4、“BAFF”、“neutrokine-α”、“BLyS”、“TALL-1”、以及“THANK”(Yu等人，国际公开文本WO98/18921(1998)，Moore等人，Science 285269(1999)；Mukhopadhyay等人J.Biol.Chem.27415978(1999)；Schneider等人J.Exp.Med.1891747(1999)；Shu等人，J.Leukoc.Biol.65680(1999))。提供ZTNF4氨基酸序列为SEQ ID NO3。另一个配体被不同地称为“ZTNF2”、“APRIL”和“ TNRF死亡配体-1”(Hahne等人，J.Exp.Med.1881185(1998)；Kelly等人，Cancer Res.601021(2000))。提供ZTNF2的氨基酸序列为SEQ ID NO4。两个配体都亦与B细胞成熟受体(BCMA)结合(Gross等人，Nature404995(2000))。提供BCMA的核苷酸序列和氨基酸序列分别为SEQ IDNO26和SEQ ID NO27。经证实的肿瘤坏死因子受体的体内活性表明了该受体的可溶形式的临床潜力。TACI受体的可溶形式已经被以免疫球蛋白融合蛋白质的形式被制造出来。最初的版本导致低水平表达的异质蛋白质。在TACI氨基末端、在Fc羧基末端以及TACI柄部可观察到异质性。因此对药用的TACI受体组合物存在着需要。专利技术概述本专利技术提供了改良的TACI-免疫球蛋白融合蛋白质，它适合作为治疗用的化合物。附图简述附图说明图1显示了人TACI的氨基酸序列。富含半胱氨酸的假性重复段的位置用阴影指出，跨膜结构域被框住，同时柄的区域用虚线指出。图2是免疫球蛋白的IgG1亚群的示意图。CL轻链恒定区；CH1、CH2、CH3重链恒定区；VL轻链可变区；VH重链可变区；CHO碳水化合物；N氨基末端；C羧基末端。图3A、3B、3C和3D为野生型人γ1恒定区Fc的氨基酸序列与变体Fc-488、Fc4、Fc5、Fc6、Fc7和Fc8的比较。人的γ1恒定区的CH1结构域不是Fc的一部分，因此没有显示。指出了铰链区、CH2和CH3结构域的位置。指出了一般与轻链恒定区(LC)和重链恒定区(HC)结合的二硫键有关的Cys残基。符号“.”表示在该位置与野生型相同，而“***”表示羧基末端的位置，并且说明了Fc6与其它Fc版本相比在羧基末端的差异。用EU索引位置指出氨基酸的位置。图4显示125I-ZTNF4与多种TACI-Fc构建体的特异性结合。TACI-Fc融合蛋白质具有缺少SEQ ID NO2氨基酸序列的前29个氨基酸残基的TACI部分。融合蛋白质之一具有带完整柄结构区的TACI部分，而TACI-Fc融合蛋白质之中的三个具有在柄结构区有多种缺失(TACI(d1-29，d107-154)-Fc5；TACI(d1-29，d111-154)-Fc5；TACI(d1-29，d120-154)-Fc5)的TACI部分。实施例4叙述了实验的详细情况。专利技术详述1.总述如下所述，本专利技术提供了跨膜激活剂、钙调节剂和亲环蛋白配体相互作用剂(TACI)-免疫球蛋白融合蛋白质，以及应用TACI-免疫球蛋白融合蛋白质的方法。例如，本专利技术提供了抑制肿瘤细胞增殖的方法，包含给予肿瘤细胞含有TACI-免疫球蛋白融合蛋白质的组合物。上述组合物可以给予体外培养的细胞。或者，该组合物可以是一种药物组合物，它包含药学可接受的载体和TACI-免疫球蛋白融合蛋白质，该药物组合物可以给予患肿瘤受治疗者。受治疗者可以是哺乳动物的受治疗者。该药物组合物的施用可以抑制，例如，哺乳动物受治疗者的B淋巴细胞的增殖。本专利技术还提供了在哺乳动物中抑制ZTNF4活性的方法，它包含给哺乳动物施用含有TACI-免疫球蛋白的组合物。ZTNF4活性可与多种不同的疾病和病症相关联。例如，含有TACI-免疫球蛋白融合蛋白质的药物组合物可用于治疗自身免疫病，如系统性红斑狼疮、重症肌无力、多发性硬化、胰岛素依赖性糖尿病、克罗恩氏病、类风湿关节炎、多关节型(polyarticular-course)青少年类风湿关节炎以及银屑病性关节炎。或者，含有TACI-免疫球蛋白的药物组合物可用于治疗病症，例如哮喘、支气管炎、肺气肿以及终末本文档来自技高网...

【技术保护点】
跨膜激活剂和钙调节剂和亲环蛋白配体相互作用剂（ＴＡＣＩ）－免疫球蛋白融合蛋白质在生产用于抑制肿瘤细胞增殖的药物中的应用，其中ＴＡＣＩ－免疫球蛋白融合蛋白质包括：　　　　（ｃ）ＴＡＣＩ受体部分，它由具有ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２的氨基酸残基３０到１５４的氨基酸序列的多肽片段组成，其中ＴＡＣＩ受体部分包含至少（Ⅰ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２的氨基酸残基３４到６６；和（Ⅱ）ＳＥＱ　　ＩＤ　　ＮＯ：２的氨基酸残基７１到１０４的序列之一，并且其中ＴＡＣＩ受体部分至少与ＺＴＮＦ２或ＺＴＮＦ４之一结合，和　　　　（ｄ）包含免疫球蛋白的恒定区的免疫球蛋白部分。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：MW里克森，JA格罗斯，
申请(专利权)人：津莫吉尼蒂克斯公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]