用含血浆来源免疫球蛋白M(IgM)的组合物治疗传染病的方法技术

本发明专利技术涉及一种用含血浆来源免疫球蛋白M(IgM)的组合物治疗传染病的方法。本发明专利技术的组合物和方法防止、抑制或减少由微生物分泌的蛋白和毒素的毒性效应。一种用于中和受试者中的微生物蛋白产物的方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含血浆来源IgM和任选地以药物载体形式的一种或更多种赋形剂，其中所述组合物以有效中和所述微生物蛋白产物的量施用。

【技术实现步骤摘要】
描述相关申请的交叉引用本申请要求2015年8月6日提交的美国临时专利申请号62/201,910的优先权，其全部内容通过引用被明确并入本文。专利
本专利技术涉及一种用于治疗传染病的方法，所述方法包括向需要其的患者施用包含血浆来源IgM的组合物。本专利技术还涉及一种用于中和在活跃的微生物感染期间分泌的细胞毒性外毒素的方法，所述方法包括向需要其的患者施用包含血浆来源IgM的组合物。专利技术背景微生物物种可变得对被感染的患者高度有害，如果个体不能清除感染，或者如果患者对治疗不响应的话。感染还可变成脓毒性的，从被感染的器官扩散进血流中。对于患者，这些脓毒性感染具有不良预后(pooroutcome)，通常导致器官衰竭及死亡。问题是，大部分的抗生素靶向活的微生物自身以治疗感染。IgM已被表征为防止由微生物内毒素的全身性效应造成的细菌性感染的毒性脓毒性方面。这些内毒素是细胞壁(特别是革兰氏阴性菌中的)的组分。这些治疗方法无一靶向或已显示出靶向微生物外毒素、超抗原或分泌性酶。尽管血浆来源IgM可结合并防止内毒素介导的对患者的毒性被良好地表征，但这并未解决从微生物主动分泌的其他蛋白及毒素。内毒素的毒性效应通常是对由抗生素或患者的免疫系统引起的细菌死亡或溶菌的响应。这些效应与在微生物感染期间观察到的由微生物主动分泌的蛋白，诸如外毒素引起的毒性事件是不同的。对防止、抑制或减少除了内毒素之外的从微生物分泌的蛋白和毒素的毒性效应的组合物及方法仍存在需求。专利技术概述本专利技术基于治疗剂量的血浆来源IgM中和在活跃的微生物感染期间分泌的微生物蛋白，诸如分泌的细胞毒性外毒素的有害影响的出乎意料的中和效应的发现。本专利技术利用了血浆来源IgM对微生物蛋白的特异性。如以上解释的，IgM结合为糖蛋白的微生物内毒素并且该结合利用IgM对糖蛋白和碳水化合物的普遍结合是被熟知的。在现有技术中，已描述了若干种单克隆抗体，但这些单克隆抗体仅单独地针对单一抗原性靶。另一方面，天然的血浆来源IgM包含过多的能够同时靶向许多不同的抗原的潜在抗原结合位点并因此不依赖于单一治疗模式。此外，本专利技术利用来源于标准血液分级过程，例如Grifols’Gamunex分级过程的废物流的IgM来源。因此，在第一方面，本专利技术涉及一种用于治疗传染病的方法，所述方法包括向需要其的患者施用包含血浆来源IgM的组合物。换言之，本专利技术的实施方案提供了一种用于治疗受试者中的传染病的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含以下、主要由以下组成或由以下组成：血浆来源IgM和任选地以药物载体形式的一种或更多种赋形剂，其中所述组合物以有效中和所述患者中的微生物蛋白产物的量施用。在第二方面，本专利技术涉及一种用于中和在活跃的微生物感染期间分泌的细胞毒性外毒素的方法，所述方法包括向需要其的患者施用包含血浆来源IgM的组合物。换言之，本专利技术的实施方案提供了一种用于中和受试者中的微生物蛋白产物的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含以下、主要由以下组成或由以下组成：血浆来源IgM及任选地以药物载体形式的一种或更多种赋形剂，其中所述组合物以有效中和所述微生物蛋白产物的量施用。所述细胞毒性外毒素可由若干种微生物分泌，诸如大肠杆菌(Escherichiacoli)、铜绿假单胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、肺炎克雷伯杆菌(Klebsiellapneumoniae)、肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)、艰难梭菌(Clostridiumdifficile)、肉毒梭菌(Clostridiumbotulinum)、黄曲霉(Aspergillusflavus)及其组合。优选地，包含血浆来源IgM的组合物从标准分级过程的废物流获得。血浆来源IgM具有至少70％(w/v)、更优选地至少90％(w/v)且最优选地至少95％(w/v)的纯度。还优选地，待被施用的血浆来源IgM的剂量的范围为每千克患者从75mg至1g、优选地从75mg/kg至600mg/kg、更优选地从75mg/kg至300mg/kg。该剂量可以以每日、每隔一日、3x/周或每周一次的方案施用。任选地，血浆来源IgM的组合物还包含选自小分子抗生素、天然或合成的肽抗微生物剂或具有抗微生物特性的蛋白或者其组合的其他分子。小分子抗生素的实例是万古霉素和美洛培南。具有抗微生物特性的蛋白的实例是乳铁蛋白。在本专利技术的方法中，血浆来源IgM的组合物可单独地或与选自由包括抗炎剂的治疗性分子和免疫调节剂组成的组的其他治疗性分子组合使用。附图简述下文将参考以下附图描述本专利技术的实施方案，其中：图1示出了IgM对铜绿假单胞菌外毒素A的免疫反应性。示出了代表性ELISA在450nm处的吸光度OD读数。靶抗原铜绿假单胞菌外毒素A(P.A.ExA)被包被在ELISA板上。从Gammunex方法纯化的汇集的血浆或IgM被用作IgM的来源。如指示的，该样品在PBS中的多种稀释物被测试。对照是尚未用抗原包被的孔(未包被的)。对于每个柱示出了标准偏差。图2A和2B示出了对艰难梭菌毒素B细胞毒性的中和。在推荐的增殖培养基中培养Caco-2细胞(从ATCC获得)。将细胞以每孔8000个细胞接种于96孔板中。在初始铺板后24小时，细胞用如图例中描述的多种IgM制品和/或艰难梭菌毒素B来处理。如通过根据制造商的说明书进行的CellTiterGlow(PromegaCorp.Madison,WI,USA)测定测量的，细胞的相对数目的数据被示为RLU。图2A表明了两个不同批次的IgG和IgM的混合物(对于实心黑色柱和阴影柱，级分浓度分别为45％和70％-80％IgM)对艰难梭菌毒素B(ToxB)的中和特异性，但对于非特异性对照人血清白蛋白(空心柱)并不是这样；图2B还单独表明了增加的浓度的几乎纯的IgM(以微摩尔/L或μL计；实心黑色柱)对艰难梭菌毒素B(ToxB)的中和及对细胞生活力的救护。图3示出了艰难梭菌毒素诱导的Caco-2通透性的中和。使Caco-2细胞在Transwell多孔板插入装置中通过通常方法分化。在分化21天之后，在处理开始之前即刻测量跨上皮电阻(TEER)。仅具有高于200的TEER测量值的那些孔被包括在该实验中。在16小时处理之后，测量TEER以确定处理对TEER的效应。将对照(未处理的细胞)设置成100％作为比较物。处理组被显示为与对照组TEER相比的相对百分比。对于萤光黄通透性实验，将具有高于200的TEER并按图中描述的处理的细胞与萤光黄(LifeTechnologies,GrandIsland,NYUSA)溶液一起在37℃孵育1小时。对Transwell插入装置的顶端隔室和基部隔室取样并评价萤光黄的存在。穿过Caco-2单层的萤光黄的百分比通过样品的荧光测量值来确定。穿过Caco-2单层的萤光黄的百分比数据被表示为通透性相对于被设置为1的值的对照的倍数增加。阐明了对于艰难梭菌毒素B(ToxB)介导的细胞对染料萤光黄的通透性(A)或对于上皮层的电阻(TEER，参见同上)(B)的剂量响应；在两种情况中均包括非毒素B对照(图的左侧)。在萤本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于中和在活跃的微生物感染期间分泌的细胞毒性外毒素的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含血浆来源IgM和任选地以药物载体形式的一种或更多种赋形剂，其中所述组合物以有效中和所述分泌的细胞毒性外毒素的量施用。

【技术特征摘要】
2015.08.06 US 62/201,9101.一种用于中和在活跃的微生物感染期间分泌的细胞毒性外毒素的方法，所述方法包括向所述受试者施用组合物，所述组合物包含血浆来源IgM和任选地以药物载体形式的一种或更多种赋形剂，其中所述组合物以有效中和所述分泌的细胞毒性外毒素的量施用。2.根据权利要求1所述的方法，其中包含血浆来源IgM的所述组合物从标准血液分级过程的废物流获得。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述血浆来源IgM具有至少70％(w/v)的纯度。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述血浆来源IgM具有至少90％(w/v)的纯度。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述血浆来源IgM具有至少95％(w/v)的纯度。6.根据权利要求1所述的方法，其中待被施用至所述患者的血浆来源IgM的剂量的范围为每千克患者从75mg至1g。7.根据权利要求1所述的方法，其中待被施用至所述患者的血浆来源IgM的剂量的范围为每千克患者从75mg至600mg。8.根据权利要求1所述的方法，其中待被施用至所述患者的血浆来源IgM的剂量的范围为每千克患者从75mg至300mg。9.根据权利要求1所述的方法，其中剂量能够以每日、或每隔一日、或3x/周或每周一次的方案施用。10.根据权利要求1所述的方法，其中血浆来源IgM的组合物还包含选自小分子抗生素、天然或合成的肽抗微生物剂或具有抗微生物特性的蛋白或者其组合的其他分子。11.根据权利要求10所述的方法，其中所述小分子抗生素是万古霉素或美洛培南。12.根据权利要求10所述的方法，其中所述具有抗微生物特性的蛋白是乳铁蛋白。13.一种用于治疗受试者中的传染病...

【专利技术属性】
技术研发人员：托马斯·巴尼特，大卫·A·罗斯，
申请(专利权)人：基立福环球运营有限公司，
类型：发明
国别省市：爱尔兰;IE